全 文 ：* 本课题为广西科学研究与技术开发项目 ( No.桂科攻 0322024-5E)
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收稿日期: 2004-01-20
天胡荽与破铜钱中总黄酮的含量测定*
李　江　林　军　黄忠仕　林　兴　黄仁彬△
(广西医科大学药理学教研室　南宁　 530021)
摘要　目的:建立植物天胡荽与破铜钱中总黄酮含量的测定方法 ,同时测定并比较两种植物中总黄酮含量的差异。 方法: 用
70%乙醇 85～ 90℃加热回流提取药材中的总黄酮 ,并以芦丁为对照品 ,用分光光度法在 510 nm处测定其含量。结果:植物天
胡荽样品中总黄酮含量为 4. 107 7 mg /g ,破铜钱样品中总黄酮含量为 14. 027 3 mg /g。结论: 两种植物中总黄酮含量有较大差
异 ,天胡荽样品中的总黄酮含量为破酮钱的 29. 28%
关键词　天胡荽 ;破铜钱 ;总黄酮
中国图书资料分类法分类号　 R914. 1
DETERMINATION OF TOTAL FLAVONES IN HYDROCOTYLE SIBTHORPIOIDES
Li Jiang , Lin Jun, Huang Zhongshi, et al. ( Department of Pharmacolog y, Guangxi M edical Univ ersi ty, Nanning
530021 China)
Abstract　 Objective: To establish a method on determination of total f lav ones in Hydroco tyle sibthorpioides
Lam. and Hydrocotyle sibthorpioides Lam. Var. bat rachium ( Hance) Hand. -Mazz. ex Shan, determinate and
compare the contents of total f lav ones in tw o plants. Methods: The total flav ones are ex tracted wi th 70%
CH3 CH2OH and determinated by ult raviolet spect rophotometry , compared with rutin standard. The detective
w aveleng th w as 510 nm. Result: The content of to tal f lav ones is 4. 107 7 mg /g in Hydrocoty le sibthorpioides
Lam. , and 14. 027 3 mg /g in Hydrocoty le sibthorpioides Lam. Var. bat rachium ( Hance ) Hand. -M azz. ex
Shan. Conclusion: The content of total f lav ones is g reat ly different in tw o plants.
Key words　 Hydrocotyle sibthorpioides Lam. ; Hydrocoty le sibtho rpioides Lam. Var. batrachium ( Hance )
Hand. -Mazz. ex Shan; total f lavones
　　天胡荽 ( Hydrocoty le sibthorpioides Lam. )及其变种破铜
钱 [ Hydroco tyle sibthorpioides Lam. Va r. batrachium
( Hance) Hand. -Mazz. ex Shan ]为伞形科天胡荽属植物 ,按照
《广西中药材标准》 ( 1990年版 )的规定: 这两种植物可以作为
同等功效的药材入药 ,具有清热解毒 ,去湿退黄 ,利尿消肿的
作用 ,用于湿热黄疸、肾炎、淋病、咽喉肿痛等 [1]。根据目前的
文献 [2～ 4] ,这两种植物的主要成分均为黄酮类 ,而黄酮类成
分根据目前的研究资料 ,除了有心血管方面的活性外 ,还发
现有抗病毒的活性 [5～ 7]。 本文建立天胡荽和破铜钱中总黄酮
含量的测定方法 ,同时测定并比较天胡荽与其变种破铜钱中
总黄酮含量的差异 ,为药材植物来源的筛选提供依据。
1　材　料
1. 1　实验仪器: TU-1800SPC紫外可见分光光度计 (北京普
析通用仪器公司 ) , FA2004电子天平 (上海精密科学仪器有
限公司 ) , FW177型中草药万能粉碎机 (天津市泰斯特仪器
有限公司 ) , GZX-DH电热恒温干燥箱 (上海市跃进医疗器械
一厂 )。
1. 2　试剂与材料:芦丁对照品 (中国药品生物制品检定所 ,
批号: 0080-9705,供含量测定用 ) ,其余试剂均为分析纯。
天胡荽购于南宁佳和大药房 ,破铜钱采于钦州 ,经鉴定
为伞形科天胡荽属植物天胡荽和破铜钱。药材阴干后粉碎过
24目筛 , 80℃干燥 3 h后保存于干燥器中备用。
2　方法与结果
2. 1　测定波长的选择: 参考文献 [ 8 ]的方法 ,取芦丁对照品
溶液及其铝络合物测定液在波长 250～ 800 nm之间扫描 ,芦
丁对照品溶液在 510 nm处没有吸收 ,而其铝络合物测定液
在 510 nm处有一个吸收峰 (如图 1) ;再取天胡荽与破铜钱供
试品溶液及其铝络合物测定液在 200～ 800 nm之间进行扫
描 ,供试品溶液在 510 nm处没有吸收 ,而其铝络合物测定液
在 510 nm处有吸收峰 (如图 2、图 3)。 由于形成金属有色配
合物后吸收红移是黄酮类化合物的特性 ,说明方法的选择性
较好 ,故决定以 510 nm为本实验测定波长。
2. 2　标准曲线的制备:精密称定芦丁对照品 20 mg,用 50%
乙醇定容于 100 ml容量瓶 ,制成对照品溶液。精密量取对照
品溶液 0. 0、 1. 0、 2. 0、 3. 0、 4. 0、 5. 0 ml,分别置于 10 ml容量
瓶中 ,各加 50%乙醇使成 5 ml;各加 5%亚硝酸钠溶液 0. 3
ml,摇匀 ,放置 6 min;各加 10%硝酸铝溶液 0. 3 ml,摇匀 ,放置
6 min;再各加 1%氢氧化钠溶液 4 ml,分别用 50%乙醇稀释
至刻度 ,摇匀 ,放置 15 min,制成待测对照品溶液。 以第一瓶
为空白 ,在 510 nm处测定吸收度 ,以吸光度 ( A )对浓度 ( C,
g / L)进行线性回归 ,得回归方程 C = 0. 085 48 A - 0. 000 76
( r = 0. 999 4) ,线性范围 0. 019 0～ 0. 096 0 g /L。
2. 3　样品的处理:精密称定药材粗粉 2 g ,用 70%乙醇 40 ml
85～ 90℃回流提取 1 h后过滤 ,再用 20 ml 70%的乙醇洗
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广 西 医 科 大 学 学 报
JOURN AL OF GUAN GXI MEDICAL UNIV ERSITY
　 2004 Aug; 21( 4)DOI : 10. 16190 /j . cnki . 45 -1211 /r . 2004. 04. 009
涤 ,将滤液合并后水浴蒸干 ,用 50%的乙醇溶解过滤后定容
于 100 ml容量瓶制成供试品溶液。
精密量取供试品溶液 0. 0、 1. 0 ml,分别置于 10 ml容量
瓶中 ,按照标准曲线的制备方法 ,自“各加 50%乙醇使成 5 ml
……”起 ,配成络合后待测供试品溶液。 以第一瓶为空白 ,在
510 nm处测定吸光度 ,代入回归方程计算总黄酮的含量。
图 1　芦丁对照品溶液在形成铝络合物前后的 UV光谱图
A:芦丁对照品溶液形成铝络合物前的 UV光谱图
B: 芦丁对照品溶液形成铝络合物后的 UV光谱图
图 2　天胡荽供试品溶液在形成铝络合物前后的 UV光谱图
A: 天胡荽供试品溶液形成铝络合物前的 UV光谱图
B:天胡荽供试品溶液形成铝络合物后的 UV光谱图
图 3　破铜钱供试品溶液在形成铝络合物前后的 UV光谱图
A: 破铜钱供试品溶液形成铝络合物前的 UV光谱图
B:破铜钱供试品溶液形成铝络合物后的 UV光谱图
2. 4　精密度试验: 按标准曲线项下操作 ,配制一定浓度的待
测对照品溶液 ,在 510 nm处测吸光度 ,连续测定 5次 ,计算
RSD为 0. 20% ,表明仪器精密度良好。
2. 5　稳定性试验: 按标准曲线项下操作 ,配制一定浓度的络
合后待测对照品溶液和络合后待测供试品溶液 ,分别放置 0、
10、 20、 30、 40、 50、 60 min后 ,在 510 nm处测定吸光度 ,结果
络合后待测对照品溶液在 60 min内测定结果基本稳定 , RSD
为 0. 48% ;而络合后待测供试品溶液在 30 min内吸光度基
本稳定 , RSD为 2. 24% , 30 min后吸光度呈快速下降趋势。
2. 6　重复性试验: 分别取同一破铜钱样品 ,按供试品的制备
方法平行制备 5份 ,依法测定 ,总黄酮含量平均为 14. 027 2
mg /g , RSD为 2. 87% ,表明方法的重现性良好。
2. 7　加样回收率试验: 精密称定已知含量的破铜钱样品 6
份 ,分别加入一定量的芦丁对照品 ,按照供试品溶液的制备
方法制备和测定 ,结果平均回收率为 102. 9% , RSD为
2. 53% ( n = 6)。 结果见表 1。
表 1　加样回收率实验结果
样品含量
( m /mg)
加入量
( m /mg )
测得量
( m /mg)
回收率
(% )
平均回收率 (% ) RSD(% )
28. 21 10. 15 10. 03 98. 82
28. 15 10. 08 10. 40 103. 17
29. 66 30. 26 30. 59 101. 09 102. 9 2. 53
28. 38 30. 65 32. 24 105. 19
28. 28 50. 83 52. 51 103. 31
28. 30 51. 07 54. 03 105. 80
2. 8　天胡荽样品的测定:精密称定天胡荽样品 3份 ,同法测
定 ,天胡荽样品中的总黄酮含量平均为 4. 107 7 mg /g , RSD
为 2. 34% ( n = 3)。 天胡荽样品中的总黄酮含量为破铜钱样
品的 29. 28%。
3　讨　论
天胡荽与破铜钱这两种植物的主要有效成分均为黄酮
类 ,但此前未见有对这两种植物进行黄酮含量测定的研究报
道。本实验证实了天胡荽与其变种破铜钱中的总黄酮含量存
在较大差异 ,天胡荽样品中总黄酮含量为破铜钱的 29. 28%。
这种差异应是生物进化中变异的结果。由于药品标准规定这
两种植物作为同一药材入药 ,故需要进一步研究黄酮含量差
异与药效之间的关系 ,为药材的筛选提供依据。
参　考　文　献
1　广西壮族自治区卫生厅 . 广西中药材标准 ( 1990版 ) . 南
宁: 广西科学技术出版社 , 1992. 27, 152.
2　江苏新医学院 . 中药大辞典 (上册 ) . 上海:上海科学技术
出版社 , 1977. 328, 954.
3　《中药辞海》责编组 . 中药辞海 . 第 2卷 . 北京: 中国医
药科技出版社 , 1993. 719, 2 295.
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tochemistry , 1982, 21( 8): 2 156-2 159.
5　杭悦字 ,吴菊兰 ,周义峰 ,等 . 剪夏罗鲜汁及黄酮组分对
体内Ⅰ 型单纯疱疹病毒的抑制作用 . 植物资源与环境 ,
1998, 7( 4): 24-28.
6　高中洪 ,黄开勋 ,徐辉碧 . 黄芩中黄酮类生物活性的研究
进展 . 中国药学杂志 , 1998, 33( 12): 705-707.
7　王志洁 ,黄铁牛 ,刘焱文 ,等 . 黄芪多种成分抗人疱疹病
毒的初步实验研究 . 中国现代应用药学杂志 , 2002, 19
( 5): 356-359.
8　梁生旺主编 . 中药制剂分析 . 北京: 中国中医药出版社 ,
2003. 385-386.
492
广西医科大学学报　 2004 Aug; 21( 4)