全 文 ：收稿日期:2011 － 07 － 15
基金项目:西南交通大学基金(2006B10) ;国家自然保护区生物标本 －民族医药标本整理整合(2005DKA21404)
作者简介:董关涛(1986 －) ，男，硕士研究生，研究方向:药用植物资源与活性成分
* 通讯作者:宋良科(1954 －) ，男，E － mail:songlk591@ 126． com
doi:10． 3969 / j． issn． 1006 － 9690． 2012． 02． 013
天胡荽属药用植物的积雪草苷与羟基积雪草苷的含量测定
董关涛，宋良科* ，汤 昊，王 岩，王小宁
(西南交通大学 生命科学与工程学院，四川 成都 610031)
摘 要 目的:建立天胡荽属植物的积雪草苷和羟基积雪草苷 HPLC 含量分析的方法，为开发利用天胡荽属植物
药用资源奠定基础。方法:以积雪草苷和羟基积雪草苷为指标成分，采用高效液相色谱法，以 Symmetry C18(4． 6 mm
× 250 mm，5 μm)为色谱柱;乙腈 －水(29∶ 71，v /v)为流动相;流速 0． 8 mL /min;柱温 30 ℃;检测波长 210 nm，外标
法进行测定。结果:积雪草苷的回归方程为:Y = 34 958X + 154 822 R2 = 0． 999 1(n = 8) ，羟基积雪草苷的回归方程
为:Y = 114 318X － 21 002 R2 = 0． 999 2(n = 8) ，结果表明线性关系与分离度良好，平均加样回收率为 99. 98%、
100. 53%，RSD为 1. 86%、2. 31%。结论:该方法稳定性、重复性良好，可做为天胡荽属药用资源的评价方法之一，
实验结果为野生与栽培资源的开发与利用奠定了基础。
关键词 天胡荽属植物;积雪草苷;羟基积雪草苷;HPLC
中图分类号:R284 文献标识码:A 文章编号:1006 － 9690(2012)02 － 0047 － 04
Determination of Asiaticoside and Madecassoside in Hydrocotyle
Dong Guantao ，Song Liangke，Tang Hao，Wang Yan ，Wang Xiaoning
(Life Science and Engineering College of Southwest Jiaotong University，Chengdu 610031，China)
Abstract Objective:To establish a stable method for the content determination of asiaticoside and ma-
decassoside in Hydrocotyle． And lay a foundation for the further study． Method:The HPLC was per-
formed using Symmetry C18 column(4． 6 mm ×250 mm，5 μm)and acetonitrile － water (29∶ 71)as the
mobile phase． The flow rate was 0． 8mL /min，the detection wavelength was 210 nm，and the column
temperature was 30 ℃ ． The external standard method was used as quantitative analysis． Results:the re-
gression equation of asiaticoside was Y = 34 958X +154 822 R2 = 0． 999 1(n = 8) ，the regression equa-
tion of madecassoside was Y = 114 318X － 21 002 R2 = 0. 999 2(n = 8) ;the average recovery was
99. 98%、100. 53%，RSD was 1. 86%、2. 31% ． Conclusion:The method is stable and reliable． It can
be used for quality control of Hydrocotyle． And the result provides scientific basis for exploiting wild and
plant resources．
Key words Hydrocotyle;asiaticoside;madecassoside;HPLC
天胡荽属药用植物天胡荽(Hydrocotyle sibthor-
pioides Lam．)、破铜钱［H． sibthorpioides var． batra-
chium (Hance)Hand． － Mazz．］的全草［1］，始载于
唐代孙思邈所撰的《备急千金要方》卷二十六“一种
小草，生近水渠，温湿处，冬生，其状类胡荽，亦名鸡
肠荽，可以疗痔病，一名天胡荽。”具有清热解毒，去
湿退黄，利尿消肿的作用，用于治疗肾结石、肝炎及
菌痢、结膜炎、带状疱疹等疾病［2 － 3］。同属植物尼泊
尔天胡荽(H． nepalensis Hook．)、肾叶天胡荽(H．
wilfordi Maxim．)、柄花天胡荽(H． podantha Molk．)
在我国南方各省区民间不同程度的作红马蹄草［4］
或透骨草［5］使用。该属植物广泛分布于四川、重
庆、贵州、云南、广西、广东、江西、湖北、湖南等南方
各省区，野生资源十分丰富，现常作为良好的地被植
物栽培于城镇庭院。对天胡荽属药用植物的黄酮类
化合物研究报道较多［6 － 7］，而对该属植物的积雪草
苷［8］和羟基积雪草苷含量测定尚未见报道，为充分
利用天胡荽属野生与栽培资源，现以积雪草［Centel-
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第 31 卷第 2 期
2012 年 4 月
中 国 野 生 植 物 资 源
Chinese Wild Plant Resources
Vol． 31 No． 2
Apr． 2012
la asiatica (L．)Urb．］［9］作对照药材，用积雪草苷和
羟基积雪草苷为指标成分，建立天胡荽属药用植物
的 HPLC分析方法，为指导临床安全用药和进一步
研究其药用物质基础提供实验依据。
1 仪器与试药
1． 1 仪器
Waters2487 高效液相色谱仪(Waters515 HPLC
泵，7725i进样器，Waters 2487 紫外检测器) ，Waters
色谱工作站;KQ2200DB 数控超声波清洗仪(上海科
导超声仪器有限公司) ，FA1004 微量分析天平(上海
精科天平) ，DGG －9246A电热恒温鼓风干燥箱(上海
齐欣科学仪器有限公司) ，DF －15台式连续投料粉碎
机(温岭市林大机械有限公司)。
1． 2 试药
积雪草苷对照品(中国药品生物制品检定所，
批号:877 － 9901) ;羟基积雪草苷对照品(中国药品
生物制品检定所，批号:110893 － 200201)。乙腈色
谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。样品采集
与药材购买地见表 1，各样品经宋良科鉴定为天胡
荽(Hydrocotyle sibthorpioides Lam．)、破铜钱［H．
sibthorpioides var． batrachium (Hance) Hand． －
Mazz．］、红马蹄草(尼泊尔天胡荽) (H． nepalensis
Hook．)、肾叶天胡荽(H． wilfordi Maxim．)、柄花天
胡荽(H． podantha Molk．) ，选择每个样品样本 3 份，
鲜品清洗晾至 6成干后，置烘箱中 45 ℃烘干，取其平
均值;所有样品编号用小型粉碎机粉碎成粗粉，备用。
2 方法与结果
2． 1 样品含水量测定
按照中国药典附录Ⅸ H水分测定法测定，结果
见表 1。
2． 2 色谱条件
Symmetry C18 色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5
μm) ;流动相为乙腈 －水(29∶ 71) ;流速为 0. 8 mL /
min;柱温 30 ℃;检测波长为 210 nm。
2． 3 对照品溶液的制备
积雪草苷对照品的制备:精密称取积雪草苷对
照品 0. 4 mg，置 5 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定
容。精密量取 1 mL，置 10 mL 容量瓶中，用甲醇定
容，制成 0. 008 mg /mL的对照品液，备用。
表 1 实验样品采集地与含水量测定结果
编号 植物名 采集地与购买地 采集日期 含水量 /%
1
天胡荽
H． sibthorpioides
峨眉山市峨秀湖
四川乐山市农贸市场
2010． 8 11． 30
2
破铜钱
H． sibthorpioides var．
batrachium
峨眉山市黄湾乡
四川峨嵋山市农贸市场
2010． 8 10． 20
3
柄花天胡荽
H． podantha
四川省峨眉山善觉寺二坪 2010． 8 10． 00
4
肾叶天胡荽
H． wilfordi
峨眉山市黄湾乡
四川峨嵋山市农贸市场
2010． 8 10． 80
5
尼泊尔天胡荽
H． nepalensis
四川峨眉山黄湾乡
四川洪雅县农贸市场
2010． 8 10． 10
6
积雪草
C． asiatica
西南交大峨眉校区
峨眉山市黄湾乡
2010． 10 9． 80
羟基积雪草苷对照品的制备:精密称取羟基积
雪草苷对照品 1. 0 mg，置 5 mL容量瓶中，加甲醇溶
解并定容。精密量取 1 mL，置 10 mL 容量瓶中，用
甲醇定容，制成 0. 02 mg /mL的对照品液，备用。
2． 4 供试品溶液的制备
取经干燥粉碎的天胡荽药材粉末约 1 g，(称量
范围为 0. 995 ～ 1. 005 g) ，精密称定，置 100 mL锥形
瓶中，精密加入甲醇 50 mL(用 50 mL移液管) ，称定
质量，在 65 ℃下回流 4 h。称定重量，补足损失甲醇
的量，摇匀，滤过。弃去初滤液，精密量取续滤液 1
mL，置 25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。用
0. 45 μm的微孔滤膜过滤，即得。
2． 5 方法学考察
2． 5． 1 线性关系考察 分别精密吸取积雪草苷和
羟基积雪草苷对照品溶液 2 μL、4 μL、6 μL、8 μL、
10 μL、12 μL、16 μL、20 μL，依次进样，以进样体积
为横坐标 X，峰面积为纵坐标 Y，经线性回归，求得
积雪草苷的回归方程为:Y = 34 958X + 154 822，R2
= 0. 999 1(n = 8) ，结果表明，积雪草苷在进样量
0. 016 ～ 0. 16 μg范围内时，其进样体积与峰面积呈
良好的线性关系;羟基积雪草苷的回归方程为:Y =
114 318X － 21 002，R2 = 0. 999 2(n = 8) ，结果表明，
羟基积雪草苷在进样量 0. 04 ～ 0. 4 μg 范围内时，其
进样体积与峰面积呈良好的线性关系。
2． 5． 2 精密度试验
精密吸取积雪草苷和羟基积雪草苷对照品溶
液，连续进样 6 次，每次进样 10 μL，测定峰面积。
结果见表 2，表明精密度良好。
表 2 精密度试验结果表
对照品 峰面积 RSD /%
积雪草苷 396 258 398 521 399 281 380 217 385 613 386 712 2． 03
羟基积雪草苷 1 319 729 1 263 595 1 262 243 1 281 562 1 294 162 1 286 229 1． 66
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中 国 野 生 植 物 资 源 第 31 卷
2． 5． 3 稳定性试验 取样品 4，按照供试品溶液制
备方法制备，分别在制备后 0 h、2 h、4 h、6 h、12 h、16
h、24 h 进样 5 μL，测定积雪草苷和羟基积雪草苷的
峰面积，结果表明稳定性良好，24小时稳定。见表 3
表 3 稳定性试验结果表
进样时间 /h
峰面积
0 4 6 12 16 24
RSD /%
积雪草苷 774 692 780 331 800 485 847 090 804 207 782 643 2． 46%
羟基积雪草苷 1 919 825 1 918 678 1 939 163 1 929 790 1 908 179 1 909 299 0． 62%
2． 5． 4 重复性试验 取样品 5，按供试品溶液制备
方法平行制备 6 份，每份进样 5 μL，测定积雪草苷
和羟基积雪草苷的峰面积，结果表明重复性好。见
表 4。
表 4 重复性试验结果表
对照品 峰面积 RSD /%
积雪草苷 764 692 780 331 800 485 804 207 782 643 817 090 2． 41
羟基积雪草苷 1 919 825 1 918 678 1 939 163 1 929 790 1 908 179 1 909 299 0． 62
2． 5． 5 加样回收试验 取已知积雪草苷和羟基积
雪草苷含量的天胡荽样品 1，6 份，每份 1 g，精密称
定，分别加入对照品，按供试品溶液制备方法制备供
试品溶液，按照样品测定方法测定，按公式:回收率
= (测出总量 － 对照品含量)/对照品加入量 ×
100% 计算回收率。结果见表 5
表 5 天胡荽加样回收结果
样品质量 / g
含量 /mg 加入量 /mg 测得总量 /mg 回收率 /% RSD /%
积雪
草苷
羟基积
雪草苷
积雪
草苷
羟基积
雪草苷
积雪
草苷
羟基积
雪草苷
积雪
草苷
羟基积
雪草苷
积雪
草苷
羟基积
雪草苷
1． 001 6 0． 331 6 0． 137 6 0． 340 0． 140 0． 675 7 0． 276 8 101． 20 99． 40
1． 000 9 0． 331 4 0． 137 5 0． 340 0． 140 0． 676 8 0． 274 4 101． 60 97． 80
1． 001 8 0． 331 7 0． 137 7 0． 340 0． 140 0． 665 2 0． 282 0 98． 10 103． 10
1． 86 2． 311． 002 1 0． 331 8 0． 137 7 0． 340 0． 140 0． 664 0 0． 275 6 97． 70 98． 50
1． 000 2 0． 331 1 0． 137 4 0． 340 0． 140 0． 668 7 0． 279 1 99． 30 101． 20
1． 001 9 0． 331 7 0． 137 7 0． 340 0． 140 0． 678 5 0． 282 2 102． 00 103． 20
2． 6 样品含量测定
精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 5 μL，分
别注入液相色谱仪中，依上述色谱条件测定积雪草
苷和羟基积雪草苷的峰面积，按外标法计算含量。
结果见表 6、图 1、图 2、图 3
表 6 样品含量测定结果表
编号 植物名
积雪草
苷含量 /%
羟基积雪
草苷含量 /% 总量 /%
1 天胡荽 0． 331 1 0． 137 4 0． 468 5
2 破铜钱 0． 256 3 0． 099 2 0． 355 5
3 柄花天胡荽 0． 444 3 0． 666 2 1． 110 5
4 肾叶天胡荽 0． 437 8 0． 562 1 0． 999 9
5 尼泊尔天胡荽 0． 314 0 0． 852 4 1． 166 4
6 积雪草 0． 319 4 0． 299 5 0． 618 9
图 1 天胡荽属药用植物积雪草苷与羟基积雪草苷含量
a．积雪草苷 b．羟基积雪草苷 c．总量
1．天胡荽 2．破铜钱 3．柄花天胡荽
4．肾叶天胡荽 5．尼泊尔天胡荽 6．积雪草
图 2 标准品 HPLC图
(A．羟基积雪草苷;B．积雪草苷)
图 3 供试品 HPLC图
A．羟基积雪草苷;B．积雪草苷
(1．尼泊尔天胡荽，2．柄花天胡荽，3．肾叶天胡荽，
4．积雪草，5．破铜钱，6．天胡荽)
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第 2 期 董关涛，等:天胡荽属药用植物的积雪草苷与羟基积雪草苷的含量测定
3 讨 论
3． 1 积雪草苷和羟基积雪草苷为三萜类化合物，仅
在近紫外区末端有吸收，经过对比试验，乙腈 －水比
例为 29∶ 71 时，积雪草苷和羟基积雪草苷分离度高，
峰形对称性好，没有其他杂峰干扰，该方法稳定性、
重复性良好，可做为天胡荽属药用资源的评价方法
之一。
3． 2 按同年采收的天胡荽属植物和不同药材的样
本取其平均值比较两种组分总含量:尼泊尔天胡荽
1． 166 4 ﹥柄花天胡荽 1. 110 7 ﹥肾叶天胡荽﹥
0. 999 9 ﹥天胡荽 0. 468 5 ﹥破铜钱 0. 355 5。尼泊
尔天胡荽的含量最高，其中羟基积雪草苷含量达
0. 852 4%，可作为资源植物加以利用。
3． 3 天胡荽属药用植物在药材上可分为小叶组:天
胡荽、破铜钱;大叶组:尼泊尔天胡荽、肾叶天胡荽和
柄花天胡荽。积雪草苷和羟基积雪草苷的含量大叶
组是小叶组的两倍以上;而槲皮素含量却是小叶组
高于大叶组［10］，民间将天胡荽、破铜钱做金钱草或
小马蹄草药用，将尼泊尔天胡荽、肾叶天胡荽、柄花
天胡荽做红马蹄草或透骨草药用，区别药用可能与
积雪草苷、羟基积雪草苷、槲皮素含量呈现的不同比
例有关。
3． 4 单一用积雪草苷和羟基积雪草苷作为积雪草
的主要有效成分比较天胡荽属药用植物(见图 1) ，
大叶组尼泊尔天胡荽、肾叶天胡荽、柄花天胡荽的积
雪草苷和羟基积雪草苷总量或单一组分均高于积雪
草;但大叶组仅限于民间药用，其结果为进一步研究
天胡荽属药用植物的物质基础和与积雪草的相关性
提供了参考。
参考文献
［1］ 广西壮族自治区卫生厅．广西中药材标准［S］．南宁:广西科学
技术出版社，1990:27．
［2］ 宋德平．区别金钱草正品与同名异物的临床应用［J］． 中国民
间疗法，2004，12(8) :38 － 39．
［3］ 宋良科，蒋合众，易志刚，等．红马蹄草及其类似品的鉴别［J］．
时珍国医国药，2006，17(6) :1022 － 1023．
［4］ 曹萍，褚小兰，范崔生． 江西金钱草—天胡荽类药用植物的本
草考证［J］．中药材，2002，25(8) :593 － 595．
［5］ 中国药材公司． 中国中药资源志要［M］． 北京:科学出版社，
1994:864．
［6］ 吴柳春，黄桂华，覃子龙．天胡荽药材质量标准研究［J］． 中国
药品标准，2008，9(4) :256 － 259．
［7］ 王祥培，许士娜，吴红梅，等．天胡荽药材中槲皮素的薄层鉴别
与含量测定［J］．时珍国医国药，2010，21(1) :44 － 45．
［8］ 刘志锋，赵慧男，聂绍良．积雪草苷药理作用及其机制的研究
进展［J］．广东医学，2009，30(4) :649 － 651．
［9］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典(一部) ［S］． 北京:中
国医药科技出版社，2010:266．
［10］ 董关涛，宋良科，李小锋，等． 天胡荽及其近缘植物的槲皮素
含量测定［J］．安徽农业科学，2010，38(10) :
櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚櫚
5101 － 5103．
(上接第 46 页)
［10］ Arano H． Cytological studies in subfamily Carduoides (Composi-
tae)of Japan［J］． Bot Mag (Takyo) ，1963，76:32 － 39．
［11］ Levan A，Fregdga K，Sandberg A A． Nomenclature for centromer-
ic position on chromosomes［J］． Hereditas，1964，52:201 － 220．
［12］ Stebbins G L． 植物的变异和进化［M］． 复旦大学遗传研究所
译．上海:上海科学技术出版社，1950．
［13］ 李懋学，陈瑞阳．关于核型分析的标准化问题［J］． 武汉植物
学研究，1985，3(4) :297 － 302．
［14］ 洪德元．植物细胞学分类［M］．北京:科学出版社，1990:91 －96．
［15］ 杨利平，刘雪梅，张敩芳． 卷丹的细胞学研究［J］． 植物研究，
1997，17(1) :85 － 87．
［16］ 岳玲，雷家军，王欣．辽宁的四种野生百合(Lilumu spp． )的核
型研究［J］．辽宁农业科学，2006(4) :5 － 8．
［17］ 谢晓阳，武全安．三倍体川百合的核型与酯酶同功酶鉴定［J］．
云南植物研究，1993，15(1) :57 － 60．
［18］ 图立古尔，刘立波．吉林省产的 5 种百合的核型研究［J］．武汉
植物学研究，1996，14(1) :6 － 12．
［19］ 戴小红，牛立新，张延龙． 百合三品系代表品种的核型分析
［J］．西北林学院学报，2006，21(4) :58 － 61．
［20］ 刘华敏，智丽，赵丽华，等．四种野生百合核型分析［J］．植物遗
传资源学报，2010，11(4) :469 － 473．
［21］ 范小峰，郭小强，李师翁． 子午岭产 4 种百合科植物的核型多
样性研究［J］．西北植物学报，2000，20(5) :882 － 888．
—05—
中 国 野 生 植 物 资 源 第 31 卷