全 文 ：　　基金项目:辽宁省科技厅重大科研基金(200822502-1)
通信作者:孙晋民 , Email:L hj@live.cn
杜香提取物熊果酸抗肿瘤作用的实验研究
中国医科大学实验技术中心(110001)　刘海军　孙晋民　刘　翀
中国医科大学附属第一医院　　　　　陈　相　贾兰玲
【摘　要】　目的　探讨杜香提取物熊果酸的抗肿瘤作用。方法　采用水蒸气蒸流法制备杜香提取物熊果
酸 ,用噻唑蓝(MTT)法检测其对人红白血病细胞株 K562、乳腺癌细胞株 Bcap37及肺癌细胞株 A549 的生长抑制
作用。结果　杜香提取物熊果酸对癌细胞 K562、Bcap37 及 A549的生长有抑制作用 , 与对照组相比差异有统计
学意义(P<0.01)。结论　杜香提取物熊果酸有显著的抗肿瘤作用。
【关键词】　杜香属;　熊果酸;　抗肿瘤药 ,植物
Experimental study on anti-tumor effects of ursolic acid extracted from Ledum 　LIU Hai-jun ＊ , SUN J in-min , LIU
Chong , CHEN X iang , J IA Lan-ling .＊E xperiment Technology Center o f China Medical University , S henyang
110001 , China
【Abstract】　Objective　To study the anti-tumo r activ itie s of urso lic acid ex tracted fr om Ledum.Methods　
Vapo r distillation method w as used to ex tract ursolic acid from Led um , the inhibito ry effect o f the ex tract on
tumo r cells prolifera tion w as assayed by M TT method in human leukemia cell line K562 , breast cancer cell lines
cap37 and lung cancer cell line A549 , respectively.Results　The ex tract f rom Ledum display ed obvious pr olifera-
tion inhibitor y effects on K562 , Bcap37 and A549 cells(P<0.01).Conclusion　The ex trac t from Led um showed
significant antitumo r effects.
【Key words】　Ledum;　Ursolic acid;　Antineoplastic agents
　　细叶杜香(Led um palustre L .Var .Angus-
tum E .Busch)是杜鹃花科杜香属(Ericaceae le-
dum)常绿直立小灌木 ,主要分布于我国东北(大 、
小兴安岭 ,长白山)、朝鲜 、日本 、西伯利亚 、北美 、欧
洲等地 ,生于比较湿润的沟谷和水甸子 ,种子繁殖。
细叶杜鹃的叶 、枝 、花和果实中含有挥发油。挥发
油可以入药 ,有镇咳 、祛痰 、平喘 、扩张血管 、降压 、
杀菌止痒作用 ,对慢性支气管炎 、结肠炎 、急性鼻
炎 、流感 、咳嗽 、皮肤病有一定疗效[ 1 , 2] 。我国对杜
香油的利用始于 20世纪 60 年代 ,基于其多种用
途 ,且资源丰富。主要用于医药 、香料行业 ,关于其
体内外抗肿瘤作用 ,至今未见报道。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　细叶杜香:原材料购自齐齐哈尔大学生命科学与工
程学院。
1.1.2　细胞株:人红白血病细胞株 K562 、肺癌细胞株
A549购自武汉典藏细胞库 , 乳腺癌细胞株 Bcap37 由中国
医科大学肿瘤研究所提供。 除 K562 细胞为悬浮生长 , 其
余 3 种细胞均贴壁生长 , 培养于含 5%胎牛血清的 RPM I
1640 培养基中(内含青霉素 、链霉素各 100 U/ mL)。细胞
在含体积分数为 5%CO 2 的 37 ℃培养箱中培养 ,每 2 d 传
一代肿瘤细胞株。
1.1.3　试剂和设备:噻唑蓝(M TT , Sigma公司);小牛血
清 、RPMI 1640 培养基 、CIBCO 公司注射用盐酸阿霉素
(adriamgcin , ADR)均为意大利普强公司;全自动酶标仪
(meter tech960)。
1.2　方法
1.2.1　杜香提取物熊果酸的制备:干冻的杜香粉碎 , 置于
圆底烧瓶加适量于 67 ℃回流提取 , 合并流液 , 过滤冷藏备
用。
1.2.2　熊果酸抗肿瘤作用:细胞毒实验:采用 MTT 法[3] 。
肿瘤细胞株在 RPMI 1640 培养基中培养 2 周后备用 , 取对
数生长期的细胞 , 贴壁生长的细胞经胰蛋白酶消化后 , 用
RPM I 1640 培养基制成含细胞 1.0 ×105 mL -1单细胞悬
液 ,分别接种于无菌 96 孔培养板中 , 每孔反应总体积 200
μL , 设空白对照组(加等体积 RPMI 1640)、阳性对照和实
验组, 每组3 个重复孔。培养 4 h 细胞贴壁后 ,加不同浓度
的熊果酸 ,再培养 24 h后 ,每孔加入 MTT 20 μL(5 mg/ mL)
继续培养 4 h , 弃上清液 , 每孔加入 100 μL 二甲基亚砜
(DMSO), 用酶标仪于波长 570 nm , 充分振荡 10 min , 酶标
仪在 A570处测定吸光度值。
1.3　统计学处理
用 SPSS 13.0 软件进行统计学处理 , 计量数据以 x±s
表示 ,组间差异比较采用单因素方差分析 , LSD 检验 , P<
0.01 为差异有统计学意义。
·700· 山西医药杂志 2010年 8月第 39卷第 8期上半月　Shanxi Med J , August 2010 , Vol.39 , No.8 the Firs t
2　结　　果
体外实验结果显示 , 杜香提取物对人红白血病细胞株
K562、乳腺癌细胞株 Bcap37 及肺癌细胞株 A549 的生长具
有明显的抑制作用 , 并在 2.5 ～ 80 μg/ mL 浓度范围内呈剂
量依赖关系。杜香提取物对正常成纤维细胞(L929)的生
长无明显的抑制效应 , 然而在 40 ～ 80 μg/ mL 的剂量对
L929 细胞却有一定的促进生长作用 , 提示杜香提取物熊果
酸体外对恶性肿瘤细胞的生长具有明显的抑制效应 , 而对
正常细胞生长无抑制作用。见表 1。
表 1　熊果酸对 K562 Bcap37 A549及 L929细胞生长抑制作用( x±s)
组别 剂量(μg/mL) K562细胞 Bcap37细胞 A549细胞 L929细胞
对照组 　　　 0 1.051±0.159 0.801±0.012 1.146±0.059 0.892±0.022
提取物 　　　 2.5 1.029±0.157 0.770±0.027 1.148±0.074 0.856±0.082
　　　 5.0 0.991±0.216 0.804±0.016 1.077±0.079 0.896±0.043
　　　10.0 1.252±0.095 0.758±0.010 1.117±0.041 0.935±0.021
　　　20.0 0.868±0.075 0.513±0.016 0.067±0.042 0.903±0.026
　　　40.0 0.699±0.050 0.416±0.072 0.045±0.010 1.059±0.164
　　　80.0 0.685±0.016 0.354±0.037 0.338±0.054 1.258±0.196
　　注
　　1 与对照组比较 P<0.01。
3　讨　　论
研究显示杜香提取物熊果酸对肿瘤细胞增殖
有抑制作用 ,也有诱导凋亡作用 ,它与肿瘤的发
生 、发展和消退有密切关系 。谈华和刘庆华[ 4] 报道
杜香挥发油对青霉菌和金黄色葡萄球菌有抑制和
杀灭作用 ,不同菌类 、菌体对杜香挥发油的敏感程
度不同 ,酵母菌最敏感 ,青霉菌和金黄色葡萄球菌
次之。Kutsuna 等[ 5] 研究杜香中熊果酸提取物对
人舌鳞癌细胞株有抑制作用 。Murakami等[ 6] 和
Balanehru 和 N agarajan[ 7] 认为杜香成分中含有抗
氧化作用和捕获 O 2-自由基的能力 , 这可能是熊
果酸抑制炎症反应 、抑制脂质过氧化物的原因 。关
爽等[ 8] 研究表明杜香熊果酸提取物对遗传损伤有
保护作用。 Thaloor 等[ 9] 发现熊果酸能抑制细胞
微管的形成和破坏已形成的微管 ,降低相对分子质
量 53 000和 72 000金属蛋白酶的明胶降解活性 ,
减少 72 000金属蛋白酶的转录和表达 ,认为熊果
酸的抗血管生成作用是通过调节血管生成中蛋白
水解酶的活性而实现的 。杜香熊果酸提取物能降
低细胞微核的发生率 ,实验结果表明不同浓度杜香
提取物 2.5 、5.0 、10.0 、20.0 、40.0 、80.0 μg/mL 分
别对人红白血病细胞株 K562 、乳腺癌细胞株
Bcap37及肺癌细胞株 A549有明显的抑制作用 ,且
与阴性对照组比较差异有统计学意义 ,在不同剂量
下 ,杜香提取物有明显抗肿瘤作用。
尽管中药杜香有效成分抗肿瘤实验研究已经
取得一定成果 ,但仍然存在不足———中药有效成分
的分离和纯化及中药有效成分抗肿瘤机制 ,尚需进
一步加强和完善 ,这是我们后续研究的重点 。
参 考 文 献
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(收稿日期:2010-04-26)
作者简介:刘海军 , 男 , 1967年 3 月生 , 讲师 , 中国医科大学
实验技术中心 , 110001
·701·山西医药杂志 2010年 8月第 39卷第 8期上半月　Shanxi Med J , Augu st 2010 , Vol.39 , No.8 the First