全 文 ：2010 年 9 月第 5 期
No． 5 Sep． 2010
中 医 学 报
JOURNAL OF CHINESE MEDICINE
第 25 卷 总第 150 期
Vol． 25 Serial No． 150
山橿对幽门螺杆菌的抑菌实验研究
Experiments of Lindera Reflexa Hemsl of Helicobacter Pylori Antibacterial
李雪菊 Li Xueju，雷敬卫 Lei Jingwei，陈随清 Chen Shuiqing
河南中医学院，河南 郑州 450008
Henan College of Chinese Medicine，Zhengzhou，Henan，China 450008
摘要:目的:研究山橿各部位对幽门螺杆菌(helicobacterpyleri，HP)的体外抗菌作用。方法:采用棋盘法设计，以琼脂平板法测
定山橿不同部位不同浓度提取物对 HP的最低抑菌浓度。结果:山橿石油醚部位提取物对 HP的最低抑菌浓度为每升含相当
于 125 g生药)。结论:找出山橿不同部位提取物的最低抑菌浓度，为进一步研究药材中抗 HP活性物质提供依据。
Abstract:Objective:Research Lindera reflexa Hemsl for helicobacterpyleri parts of in vitro antimicrobial effect． Methods:Using board
design method，Lindera reflexa Hemsl AGAR plate method for determination of different concentrations of different parts of the Hp min-
imum inhibitory concentration． Results:Lindera reflexa Hemsl petroleum ether extract on parts of helicobacter pylori minimum inhibito-
ry concentration for 125 g (including out)/ L． Conclusion :Find Lindera reflexa Hemsl area，extract the minimum inhibitory concen-
tration for further research of herbs provide active substances HP．
关键词:山橿;幽门螺杆菌;抑菌实验
Key words:Lindera reflexa Hemsl;Helicobacter pylori (Hp) ;susceptibility test
中图分类号 CLC number:R285． 55 文献标识码 Document code:A 文章编号 Article ID:1674 － 8999(2010)05 － 0908 － 02
山橿性温、味辛，归肺、胃经，具有行气止痛、健脾消积、
活血消肿等作用。目前以河南道地药材山橿为主药的制剂
“胃疼宁”片是由民间验方经现代方法的提取而研制的，已收
载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十八册，有温中、行
气、制酸、止痛的作用。近年来发现本品在对抗消化性溃疡上
具有明显作用。消化性溃疡是较严重的胃部疾病，胃酸过多，
胃黏膜保护功能减弱和幽门螺杆菌(helicobacterpyleri，HP)感
染是胃溃疡的发病基础。依据中医的临床功效结合现代的研
究成果，我们分别对山橿药材挥发油、石油醚、正丁醇、乙酸乙
酯、水等提取部位对 HP的体外抑菌效果进行了研究。
1 材料与方法
1． 1 实验材料
超净工作台(济南隆宏净化设备有限公司) ，微需氧培养
罐(昆明玻璃厂) ，恒温培养箱，超净化工作台(上海实验仪
器厂) ，温度湿度表(天津凤洋仪器仪表工贸公司) ，微量加
样器(美国 Eppendorf 公司出品) ，混合气体(85% N2、10%
CO2、5%O2，昆明天贝特种气体有限公司) ;培养基:布氏肉
汤培养基，布氏琼脂培养基。菌株:HP标准株 NCTC 11637 。
药品:中药山橿的 5 个提取部位(挥发油、石油醚、乙酸乙酯、
正丁醇、水提)。混悬剂为羧甲基纤维素钠。
1． 2 方法［1 － 6］
1． 2． 1 布氏固体培养基 称取 1 g 大豆蛋白胨、1 g 胰蛋白
胨、0． 5 g 氯化钠、0． 1 g 酵母浸出粉、0． 01 g 重亚硫酸钠、
1． 5 g琼脂粉，加入 100 mL 蒸馏水中，调 pH 至 7． 2，121℃高
压灭菌 20 min。冷却至 60℃左右时，加入 10 mL 绵羊血，并
加入以下四种抗生素:10 mg /L万古霉素 0． 5 mL，2 mg /L 两
性霉素 0． 5 mL，2500 U /L多粘菌素 0． 1 mL，5 mg /L TMP(磺
胺增效剂)0． 2 mL。倾倒平板。
1． 2． 2 菌液的制备 将培养 3 d的 Hp菌株挑起一部分，用
无菌生理盐水洗下后，配成布氏肉汤菌悬液，于恒温箱(85%
N2、10%CO2、5%O2)中孵育 3 d，再用标准比浊管比浊，校正
菌液浓度，使其菌液浓度相当于 1 × 109 cfu /L。
1． 2． 3 实验药液配制 取山橿药材 1 kg 粉碎，过 24 目筛，
取粗粉 500 g用石油醚(沸点为 60 － 90℃)回流提取 2 次，每
次均加入 8 倍量回流 2 h，滤过，合并滤液，浓缩至稠膏无石
油醚味，称重得石油醚部位浸膏 17． 8 g。用上述方法依次用
乙酸乙酯、正丁醇、水试剂进行提取，分别得乙酸乙酯部位浸
膏 12． 4 g，正丁醇部位浸膏 12． 7 g，水部位浸膏 36． 5 g。
取山橿粗粉 300 g，加水 3 000 mL，用水蒸气蒸馏法(《中
国药典》2005 版一部附录 XD 项下甲法)提取挥发油，得
4． 2 mL挥发油。
上述山橿各部提取物均按每 L含相当于 1 000 g生药的
培养液配制，调 pH 为7． 4，分别倍比稀释至相当于每 L 含
500、250、125、62． 5、31． 25 g 生药的培养液，加 5%羧甲基纤
维素钠混悬。灭菌备用。
1． 2． 4 抑菌实验 取培养好的 1 × 106 cfu /L 菌液 0． 1 mL，
分别接种到配制好的不同浓度培养液中，混匀，放入培养罐
中 (85%N2、10%CO2、5%O2)置恒温箱中 37 ℃培养 2 d后，
将其接种于固体培养基上，培养 48 h 后观察菌株生长情况。
同时设对照 1 组(培养基 +羧甲基纤维素钠 + HP 培养)、对
照 2 组(培养基 + HP培养)、对照 3 组(培养基阴性对照)。
2 结果
不同提取部位山橿对 HP的抑制结果见表 1。
(下转第 911 页)
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DOI:10.16368/j.issn.1674-8999.2010.05.078
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Vol． 25 Serial No． 150
综上所述，此法线性范围合理、精密度和稳定性较好、重
复性和加样回收符合规定，可以作为本品中黄芩苷的含量测
定方法。
2． 2． 8 样品含量测定 按正文供试品溶液的制备和测定法
项下操作，测定样品，结果见表 2。
表 2 黄芩三批样品含量测定结果
批号 黄芩苷(mg /mL)
20080110 6． 09
20080115 6． 54
20080120 6． 19
3 讨论
HPLC流动相配比对样品分离度、保留时间影响很大，在
本实验条件下黄芩苷得到很好分离，阴性无干扰。实验结果
表明，本实验方法重现性好、回收率高、操作简单、结果稳定，
适于产品质量控制。
参考文献:
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［5］卫生部药典委员会．中国药典(一部)附录ⅥD［M］．北京:化学工
业出版社，2005:1105．
收稿日期:2010 － 04 － 01
作者简介:贾永艳(1965 －) ，女，河北衡水人，硕士研究生导
师，从事药物制剂研究。
编辑:程延安
(上接第 908 页)
表 1 中药山橿不同提取部位对 HP的抑制结果
药材提取部位
培养液浓度相当于含生药(g /L)
1000 500 250 125 62． 5 31． 25 对照 1 对照 2 对照 3
水部位 － － + + + + + + －
正丁醇部位 － － + + + + + + －
石油醚部位 － － － － + + + + －
乙酸乙酯部位 － + + + + + + + －
挥发油部位 － + + + + + + + －
注:“ －”为无细菌生长、“ +”为有细菌生长。
山橿石油醚部位提取物对幽门螺杆菌的最小抑菌浓度
为相当于每 L含生药 125 g;水部位、正丁醇部位提取物对幽
门螺杆菌的最小抑菌浓度均为相当于每 L 含生药 500 g;乙
酸乙酯部位、挥发油提取物对幽门螺杆菌的最小抑菌浓度均
为相当于每 L含生药 1 000 g。
3 讨论
结果表明山橿石油醚部位的体外抑菌能力最强，其次是
水部位、正丁醇部位，乙酸乙酯部位和挥发油部位体外抗 HP
作用最弱。
首次研究了山橿不同提取部位的体外抗 HP 作用，结果
发现不同的提取部位抑菌作用不同，此结果为进一步研究山
橿药材中抗 HP活性物质提供依据。
参考文献:
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验研究［J］．中国病原生物学杂志，2008，3(12) :892 － 893．
收稿日期:2010 － 07 － 20
作者简介:李雪菊(1970 －) ，女，河南郑州人，讲师，研究方
向:中药材规范化种植及质量标准研究。Tel:86 － 371 －
65289282
通讯作者:雷敬卫(1972 －) ，男，河南巩义人，副教授，医学博
士生。研究方向:中药资源及质量标准研究。
编辑:程延安
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