全 文 ：大孔树脂纯化芫荽总黄酮及芫荽
总黄酮抗氧化和抗菌活性研究
刘芸１，任慧婧１，黄锴２，王珂佳３，胡美忠１＊
（１．铜仁职业技术学院 药学院，贵州 铜仁　５５４３００；２．贵州理工学院，贵阳　５５０００３；
３．贵州轻工职业技术学院 化工系，贵阳　５５００２５）
摘要：目的：研究芫荽总黄酮的大孔树脂纯化工艺及总黄酮抗氧化、抗菌活性。方法：通过筛选优化大孔
树脂型号，优化大孔树脂提取芫荽总黄酮条件，利用ＤＰＰＨ芫荽总黄酮抗氧化活性，琼脂扩散法测试芫
荽总黄酮抗菌活性。结果：ＡＢ－８树脂对芫荽总黄酮有较好的吸附和解吸效果，最优工艺条件为：芫荽总
黄酮上样液的质量浓度为１．５ｍｇ／ｍＬ，上样速率为２ｍＬ／ｍｉｎ，洗脱剂为７０％乙醇，洗脱剂用量为
４ＢＶ，洗脱速率为２ｍＬ／ｍｉｎ，芫荽黄酮提取物清除ＤＰＰＨ·自由基的ＥＣ５０为１．５ｍｇ／ｍＬ。对枯草芽
孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、黑曲霉均有抗菌活性，但是对酿酒酵母无效。结论：
ＡＢ－８型大孔树脂富集芫荽总黄酮效果最佳。
关键词：芫荽；总黄酮；大孔树脂；抗氧化；抗菌
中图分类号：ＴＳ２０１．１　　　文献标志码：Ａ　　　 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－９９７３．２０１５．０８．０１０
文章编号：１０００－９９７３（２０１５）０８－００４３－０５
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｎｄ　Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ
Ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　Ｒｅｓｉｎ　ｏｆ　Ｔｏｔａｌ　Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｃｏｒｉａｎｄｒｕｍ　ｓａｔｉｖｕｍＬ．
ＬＩＵ　Ｙｕｎ１，ＲＥＮ　Ｈｕｉ－ｊｉｎｇ１，ＨＵＡＮＧ　Ｋａｉ　２，ＷＡＮＧ　Ｋｅ－ｊｉａ３，ＨＵ　Ｍｅｉ－ｚｈｏｎｇ１＊
（１．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｔｏｎｇｒｅｎ　Ｐｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃ　Ｃｏｌｅｇｅ，Ｔｏｎｇｒｅｎ　５５４３００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｇｕｉｚｈｏｕ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ　５５０００３，Ｃｈｉｎａ；３．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，
Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｌｉｇｈｔ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ　Ｃｏｌｅｇｅ，Ｇｕｉｙａｎｇ　５５００２５，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｗｉｔｈ　ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ
ｒｅｓｉｎ　ａｎｄ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｎｄ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｃｏｒｉａｎｄｒｕｍ
ｓａｔｉｖｕｍＬ．．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｓｃｒｅｅｎ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　ｒｅｓｉｎ　ａｎｄ　ｏｐｔｉｍｉｚｅ　ｔｈｅ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＣｏｒｉａｎｄｒｕｍ　ｓａｔｉｖｕｍ Ｌ．，ｔｈｅｎ　ｕｓｅ　ｔｈｅ　ＤＰＰＨ　ｍｅｔｈｏｄ　ｔｏ　ｔｅｓｔ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ
ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ａｇａｒ－ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｔｏ　ｔｅｓｔ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＣｏｒｉａｎｄｒｕｍ
ｓａｔｉｖｕｍ Ｌ．．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＡＢ－８ｒｅｓｉｎ　ｈａｓ　ｅｘｃｅｌｅｎｔ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｔｈｅ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ
ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｃｏｒｉａｎｄｒｕｍ　ｓａｔｉｖｕｍ　Ｌ．．Ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｉｓ　１．５ｍｇ／ｍＬ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒａｔｅ　ｉｓ
２ｍＬ／ｍｉｎ，ｔｈｅ　ｅｌｕｅｎｔ　ｉｓ　７０％ ｅｔｈａｎｏｌ　ｏｆ　４ＢＶ　ａｎｄ　ｒａｔｅ　ｏｆ　２ ｍＬ／ｍｉｎ，ｗｈｉｃｈ　ａｒｅ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ
ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＣｏｒｉａｎｄｒｕｍ　ｓａｔｉｖｕｍ Ｌ．ａｌｓｏ　ｈａｓ　ｅｘｃｅｌｅｎｔ
ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ（ＥＣ５０＝１．５ｍｇ／ｍＬ），ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌｉｓ，
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ，Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ，Ｐｅｓｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ，Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ，ｂｕｔ　ｎｏｔ
ａｇａｉｎｓｔ　Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｃｏｒｉａｎｄｒｕｍ　ｓａｔｉｖｕｍＬ．；ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　ｒｅｓｉｎ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ；ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ
收稿日期：２０１５－０４－１２　　　　　　　　＊通讯作者
作者简介：刘芸（１９８５－），女，讲师，硕士，主要从事天然药物提取方面的研究；
胡美忠（１９８１－），男，副教授，博士，主要从事天然药物提取方面的研究。
—３４—
第４０卷 第８期
２０１５年８月
　　　　　　　　　　　　　　　中 国 调 味 品
Ｃｈｉｎａ　Ｃｏｎｄｉｍｅｎｔ 基础研究　　
　　芫荽（Ｃｏｒｉａｎｄｒｕｍ　ｓａｔｉｖｕｍ Ｌ．），属于伞形科，一
年生草本，有很强的香味，《本草纲目》称芫荽“性味辛
温香窜，内通心脾，外达四肢”，具有发汗透疹、消食下
气、醒脾和中之功效［１－３］，芫荽除了含有平常植物所含
有的蛋白质、多糖、维生素等成分外，还含有挥发性油、
黄酮等药用成分，并且挥发性油、黄酮是芫荽能用于调
味食品及药用的主要物质。
大孔吸附树脂广泛用于天然药用成分的提取、分
离、纯化中。在水溶液中大孔吸附树脂吸附力较强，且
具备优良的选择吸附性，广泛应用于黄酮类物质的分
离纯化［４－６］。
芫荽黄酮具有很强的抗菌活性和抗氧化清除自由
基活性。曾有报道芫荽水浸提液对细菌抑制效果明
显。本实验通过大孔树脂分离纯化芫荽黄酮，并测试
芫荽黄酮的抗氧化活性及抗菌特性，为以后进一步开
发利用芫荽黄酮提供参考。
１　材料与仪器
１．１　材料
芫荽，洗净晾干、６０℃恒温干燥箱中烘干，干燥后
粉碎并过４０目筛待用（购于铜仁市场，经铜仁职业技
术学院中药制剂技术教研室鉴定为伞形科芫荽属一年
生草本植物芫荽）。芦丁标准品，购于中国药品生物制
品检定所。其他试剂为市售，分析纯。ＡＢ－８，ＮＫＡ－９，
Ｄ４０２０，Ｓ－８大孔树脂（南开大学化工厂）。ＬＢ培养基
（北京奥博星）。
指示菌：枯草芽孢杆菌（ＡＴＣＣ　９３７２），金黄色葡
萄球菌（ＡＴＣＣ　２５９２３），大肠杆菌（ＡＴＣＣ　２５９２２），绿
脓杆菌（ＡＳ　１．２６２０），黑曲霉（ＡＴＣＣ　１６４０４）及酿酒酵
母（ＡＴＣＣ　９７６３）。
１．２　仪器
ＴＵ－１９０１紫外可见分光光度计　北京普析通用仪
器有限责任公司；ＨＭＣ－ＷＳ１０纯水机　韩国Ｈｕｍａｎ公
司；ＲＥ５２－０５旋转蒸发仪　上海亚荣公司；ＡＲ１５３０通
用型电子天平　美国；２０ｋＨｚ超声波发生器；手提式灭
菌锅（ＤＳＸ－２８０）；超净工作台　苏州净化。
２　方法与结果
２．１　方法
２．１．１　标准曲线的建立及样品中总黄酮的测定
采用芦丁为标准对照品，精密配制系列浓度的芦
丁溶液，亚硝酸钠－硝酸铝为显色体系，在５００ｎｍ波长
下测定其吸光值，从而得出芦丁的浓度Ｃ（μｇ／ｍＬ）与
它们相对应的吸光度Ａ的回归方程［７］，标准回归方程
Ｃ＝１０．４３３Ａ－０．００１７，Ｒ２＝０．９９７０。
精密移取１ｍＬ处理好的样品液，按照测定标准
对照品芦丁方式测试其吸光度，由回归方程计算出样
品中总黄酮的浓度，从而计算出芫荽中总黄酮的得率。
总黄酮的提取率＝Ｃ
·Ｖ·Ｎ
Ｍ ×１００％
。
式中：Ｃ为提取液中总黄酮的浓度（ｇ／ｍＬ）；Ｖ为
提取液的总体积（ｍＬ）；Ｎ为在含量测定过程中稀释的
倍数；Ｍ为原料的质量（ｇ）。
２．１．２　芫荽总黄酮的提取
取芫荽粉末３００ｇ，按照王珊珊等所述方法提
取［８］，即４０％乙醇，料液比１∶３０，时间４０ｍｉｎ，温度
６５℃，功率９６Ｗ 的条件下，提取３次，合并滤液，旋转
蒸发至无乙醇气味，等体积的石油醚萃取３次除去脂
肪，得总黄酮提取液，冷藏备用。
２．１．３　不同类型大孔吸附树脂静态吸附洗脱性能筛
选
ＡＢ－８，ＮＫＡ－９，Ｄ４０２０、Ｓ－８树脂按照说明预处理
好烘干备用。精密称取预处理好的 ＡＢ－８，ＮＫＡ－９，
Ｄ４０２０，Ｓ－８树脂１ｇ，置于５０ｍＬ具塞三角瓶中，精密
加入２．１．２制取的样品液２０ｍＬ后利用摇床震荡吸
附２ｈ，静置过夜，吸取上层液测定总黄酮浓度，３次平
行，结果取平均值。
将经上述饱和吸附的总黄酮树脂滤出，滤纸吸干
表面水分，精密加入７０％浓度的乙醇２０ｍＬ后震荡
２ｈ后滤出，测定洗脱液总黄酮的浓度，计算黄酮回收
率（下同），实验３次平行，结果取平均值。
黄酮回收率＝Ｃ１
·Ｖ１
Ｃ２·Ｖ２
×１００％。
式中：Ｃ１ 为洗脱液中总黄酮的浓度（ｇ／ｍＬ）；Ｃ２
为上样液中总黄酮的浓度（ｇ／ｍＬ）；Ｖ１ 为洗脱液的总
体积（ｍＬ）；Ｖ２ 为上样液的总体积（ｍＬ）。
２．１．４　ＡＢ－８大孔树脂纯化芫荽总黄酮工艺优化
２．１．４．１　上样浓度对ＡＢ－８大孔树脂吸附能力的影响
预处理好的ＡＢ－８大孔树脂１２ｇ湿法装柱，配制
—４４—
基础研究　　第４０卷 第８期
２０１５年８月
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Ｃｈｉｎａ　Ｃｏｎｄｉｍｅｎｔ
芫荽提取液总黄酮浓度分别为０．５，１．５，２．５，３．５，
４．５ｍｇ／ｍＬ各４０ｍＬ，以２ｍＬ／ｍｉｎ的流速分别上样
吸附，待吸附完成，用蒸馏水以２ｍＬ／ｍｉｎ的速率洗至
流出液无色，再用４ＢＶ（柱床体积）７０％乙醇洗脱，收
集洗脱液，测试洗脱液中黄酮的浓度，计算黄酮回收
率，３次平行。
２．１．４．２　上样速率对 ＡＢ－８大孔树脂吸附能力的影
响
取芫荽提取液总黄酮浓度为１．５ｍｇ／ｍＬ的样品
液４０ｍＬ，分别以１，２，３，４，５ｍＬ／ｍｉｎ的流速用ＡＢ－８
大孔树脂（湿法装柱，１２ｇ，下同）吸附，待吸附完成，用
蒸馏水以２ｍＬ／ｍｉｎ的速率洗至流出液无色，再用
４ＢＶ（柱床体积）７０％乙醇洗脱，收集洗脱液，测试洗
脱液中黄酮的浓度，计算黄酮回收率，三次平行。
２．１．４．３　乙醇浓度对芫荽总黄酮洗脱的影响
取芫荽提取液总黄酮浓度为１．５ｍｇ／ｍＬ的样品
液４０ｍＬ，以２ｍＬ／ｍｉｎ的流速用ＡＢ－８大孔树脂（湿
法装柱）吸附，待吸附完成，用蒸馏水以２ｍＬ／ｍｉｎ的
速率洗至流出液无色，再分别用浓度为３０％，５０％，
７０％，９０％，１００％的４ＢＶ乙醇洗脱，收集洗脱液，测
试洗脱液中黄酮的浓度，计算黄酮回收率，３次平行。
２．１．４．４　乙醇洗脱速率对芫荽总黄酮洗脱的影响
取芫荽提取液总黄酮浓度为１．５ｍｇ／ｍＬ的样品
液４０ｍＬ，以２ｍＬ／ｍｉｎ的流速用ＡＢ－８大孔树脂（湿
法装柱）吸附，待吸附完成，用蒸馏水以２ｍＬ／ｍｉｎ的
速率洗至流出液无色，再分别用４ＢＶ　７０％的乙醇以
１，２，３，４，５ｍＬ／ｍｉｎ的流速洗脱，收集洗脱液，测试洗
脱液中黄酮的浓度，计算黄酮回收率，３次平行。
２．１．４．５　洗脱剂用量的选定
取芫荽提取液总黄酮浓度为１．５ｍｇ／ｍＬ的样品
液４０ｍＬ，以２ｍＬ／ｍｉｎ的流速用ＡＢ－８大孔树脂（湿
法装柱）吸附，待吸附完成，用蒸馏水以２ｍＬ／ｍｉｎ的
速率洗至流出液无色，再分别用２，３，４，５，６ＢＶ　７０％
的乙醇以２ｍＬ／ｍｉｎ的流速洗脱，收集洗脱液，测试洗
脱液中黄酮的浓度，计算黄酮回收率，３次平行。
２．１．５　芫荽黄酮抗氧化活性试验
浓度为０．１ｍｍｏｌ／Ｌ的ＤＰＰＨ （二苯代苦味酰自
由基，溶剂为乙醇）２ｍＬ，分别加入０．５，１，１．５，２，
２．５，３，３．５，４，５，５．５ｍｇ／ｍＬ的芫荽黄酮纯化液（ＡＢ－
８大孔树脂纯化样品）２ｍＬ，遮光放置１０ｍｉｎ后，以乙
醇为空白对照，于５２０ｎｍ 测定其吸光度［９］。ＤＰＰＨ
自由基清除活性用ＥＣ５０（ｍｇ／ｍＬ）值表示。
自由基清除率＝（１－Ａ１－Ａ２Ａ３
）×１００％。
式中：Ａ１ 为未加提取液的 ＤＰＰＨ·溶液的吸光
度；Ａ２ 为加入提取液后的ＤＰＰＨ·溶液的吸光度；Ａ３
为ＤＰＰＨ·溶液与提取液混合后的吸光度。
２．１．６　芫荽黄酮抑菌活性实验
制备带菌（枯草芽孢杆菌 ＡＴＣＣ　９３７２，金黄色葡
萄球菌ＡＴＣＣ　２５９２３，大肠杆菌ＡＴＣＣ　２５９２２，绿脓杆
菌 ＡＳ　１．２６２０，黑曲霉 ＡＴＣＣ　１６４０４ 及酿酒酵母
ＡＴＣＣ　９７６３）ＬＢ培养基（真菌为ＰＤＡ培养基），洁净
环境下倾倒平板，待平板凝固，５ｍｍ 孔径打孔器打
孔，移液枪吸取０．４５μｍ滤膜过滤的芫荽黄酮纯化液
（０．５ｍｇ／ｍＬ）１００μＬ上样，３７℃下培养２４ｈ（真菌为
２８℃培养７２ｈ）后测试其抑菌圈直径［１０］，以无菌水作
为空白对照，实验３个平行。
２．２　结果与分析
２．２．１　ＡＢ－８、ＮＫＡ－９、Ｄ４０２０、Ｓ－８树脂对芫荽总黄酮
静态吸附、解吸附试验结果
表１　各种类型大孔树脂饱和吸附量和回收率（ｎ＝３）
Ｔａｂｌｅ　１Ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｑｕａｎｔｉｔｙ　ａｎｄ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ
ｏｆ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｒｅｓｉｎｓ（ｎ＝３）
大孔树脂型号 吸附量（ｍｇ／ｇ） 解吸量（ｍｇ／ｇ） 回收率（％）
ＮＫＡ－９　 ２９．９０±１．２６　 ２３．４０±０．７０　 ７８
Ｄ４０２０　 ４０．００±０．８０　 ２２．００±１．０６　 ５５
Ｓ－８　 ３３．７３±１．４２　 ２４．６７±０．９０　 ７３
ＡＢ－８　 ４７．３７±０．６２　 ３８．５０±０．５３　 ８１
　　由表１可知，各种型号大孔吸附树脂对芫荽总黄
酮的吸附效果解吸附差别较大，综合考虑，以ＡＢ－８大
孔树脂效果较好，故进一步选择 ＡＢ－８大孔树脂进行
工艺优化。
２．２．２　ＡＢ－８大孔树脂纯化芫荽总黄酮工艺优化
２．２．２．１　上样浓度对 ＡＢ－８大孔树脂吸附解吸附芫
荽总黄酮的影响
由图１可知，当上样浓度为０．５～１．５ｍｇ／ｍＬ时，
芫荽总黄酮回收率约为９０％，当上样浓度继续增加，
其回收率下降，故综合考虑，上样浓度１．５ｍｇ／ｍＬ为
最佳，在此浓度下，大孔树脂的利用效率最高。
—５４—
第４０卷 第８期
２０１５年８月
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Ｃｈｉｎａ　Ｃｏｎｄｉｍｅｎｔ 基础研究　　
95
90
85
80
75
70
黄
酮
回
收
率
（ %
）
0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0
上样浓度（mg/mL）
图１　上样浓度对芫荽黄酮回收率的影响
Ｆｉｇ．１Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ
２．２．２．２　上样速率对ＡＢ－８大孔树脂吸附、解吸附芫
荽总黄酮的影响
黄
酮
回
收
率
（ %
）
100
90
80
70
60
50
1 2 3 4 5
上样速率（mL/min）
图２　上样速率对芫荽黄酮回收率的影响
Ｆｉｇ．２Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅ　ｖｅｌｏｃｉｔｙ　ｏｎ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ
　　由图２可知，以１ｍＬ／ｍｉｎ和２ｍＬ／ｍｉｎ速度上样
时，总黄酮回收率都较高且差别不明显，当上样速度达
到３ｍＬ／ｍｉｎ时，总黄酮回收率有了最明显的下降。
从有利于提高效率考虑，上样速率２ｍＬ／ｍｉｎ为最佳。
２．２．２．３　乙醇浓度对芫荽总黄酮洗脱的影响
黄
酮
回
收
率
（ %
）
20 40 60 80 100
洗脱剂浓度（%）
100
90
80
70
60
50
40
图３　乙醇浓度对芫荽总黄酮回收率的影响
Ｆｉｇ．３Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｅｌｕｔｉｏｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ
　　由图３可知，乙醇浓度过低，溶剂极性较大，大部
分总黄酮难以洗脱，非常不利于总黄酮的回收。相对
乙醇浓度过高也会带来回收率的稍微下降，但作用不
十分明显。５０％～７０％的乙醇洗脱，回收率得到了质
的提升，７０％～９０％乙醇对回收率影响相近，但９０％
脂溶性杂质较多且成本较高，综合各方面因素，以
７０％为乙醇洗脱浓度最优。
２．２．２．４　乙醇洗脱用量对芫荽总黄酮洗脱的影响
黄
酮
回
收
率
（ %
）
2 3 4 5 6
洗脱剂用量（BV）
100
90
80
70
60
50
40
30
20
图４　乙醇洗脱用量对芫荽总黄酮回收率的影响
Ｆｉｇ．４Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｅｌｕｔｉｏｎ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｎ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ
　　由图４可知，２～４ＢＶ回收率上升明显，到４ＢＶ
时达到最佳值，之后略有下降，但下降不明显。综合考
虑，４ＢＶ乙醇最佳。
２．２．２．５　乙醇洗脱速率对芫荽总黄酮洗脱的影响
黄
酮
回
收
率
（ %
）
1 2 3 4 5
洗脱速率（mL/min）
100
80
60
40
20
0
图５　乙醇洗脱速率芫荽总黄酮回收率的影响
Ｆｉｇ．５Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｅｌｕｔｉｏｎ　ｖｅｌｏｃｉｔｙ　ｏｎ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ
　　由图５可知，洗脱速率越小，总黄酮回收率越小。
１ｍＬ／ｍｉｎ速度洗脱时，总黄酮回收率最高，但与
２ｍＬ／ｍｉｎ相差不大，洗脱速率大于２ｍＬ／ｍｉｎ后，其
回收率下降迅速，故综合考虑，以２ｍＬ／ｍｉｎ为洗脱速
率最佳。
—６４—
基础研究　　第４０卷 第８期
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Ｃｈｉｎａ　Ｃｏｎｄｉｍｅｎｔ
２．２．３　芫荽黄酮纯化液抗氧化活性
芫荽黄酮提取物的抗氧化能力虽然与总黄酮含量
高低有关，但是不完全呈线性关系，见图６。
清
除
DP
PH
能
力
（ %
）
1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0
黄酮浓度（mg/mL）
100
90
80
70
60
50
图６　总黄酮提取物浓度对清除率的影响
Ｆｉｇ．６Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ
ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｎ　ｃｌｅａｒａｎｃｅ　ｒａｔｅ
　　当总黄酮提取物浓度在３．５ｍｇ／ｍＬ以下时，
ＤＰＰＨ·自由基的清除率随着浓度的增加而增加，斜
率趋势不均，之后略有下降且变化不明显。由图６可
知，芫荽黄酮提取物清除 ＤＰＰＨ·自由基的 ＥＣ５０为
１．５ｍｇ／ｍＬ。
２．２．４　芫荽黄酮纯化液抑菌活性
表２　总黄酮抑菌活性
Ｔａｂｌｅ　２Ｔｈｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
指示菌 指示菌来源 抑菌活性（ｍｍ）ａ
枯草芽孢杆菌 ＡＴＣＣ　９３７２　 １３．５５±０．５１
金黄色葡萄球菌 ＡＴＣＣ　２５９２３　 １４．３２±０．３４
大肠杆菌 ＡＴＣＣ　２５９２２　 １５．２７±０．５２
绿脓杆菌 ＡＳ　１．２６２０　 １１．３２±０．５４
黑曲霉 ＡＴＣＣ　１６４０４　 ９．７５±０．７２
酿酒酵母 ＡＴＣＣ　９７６３　 ０
　　注：“ａ”为孔径５ｍｍ，上样４０μＬ。
由表２可知，芫荽总黄酮对大肠杆菌抑菌活性明
显，可达１５．２７ｍｍ。对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球
菌、绿脓杆菌、黑曲霉均有一定抑菌效果，而对酿酒酵
母无抑菌活性。
３　讨论
芫荽是人们喜欢的一种调味蔬菜，具备一定的药
用价值，其富含的挥发性油、黄酮引起了食品、化学、医
药等行业的兴趣，也发现了新的生理功能。
大孔吸附树脂是一类不含交换基团且有大孔结构
的高分子吸附树脂，具有良好的大孔网状结构和较大
的比表面积，可以有选择地通过物理吸附水溶液中的
有机物，是２０世纪６０年代发展起来的新型有机高聚
物吸附剂，已在环保、食品、医药等领域得到了广泛的
应用。本研究筛选大孔树脂纯化芫荽黄酮，确定了
ＡＢ－８型大孔吸附树脂纯化效果最好，进而对上样浓
度、上样速率、上样量、洗脱液乙醇浓度、洗脱液乙醇用
量、洗脱速度等条件进行了探究，优化了芫荽总黄酮的
纯化分离工艺路线。这是目前实验室分离纯化黄酮的
经典方法，也是常用方法。
近代医学的发展，认为人体衰老与体内自由基关系
非常大，芫荽作为一种日常蔬菜，而蔬菜通常被认为对
人体健康有促进作用，本实验通过抗氧化实验证实芫荽
黄酮具有抗氧化功效，同时也发现芫荽黄酮具有抑制革
兰阳性菌、革兰阴性菌及霉菌的功效，这为将来进一步
开发芫荽，提升芫荽的附加值具有重要参考意义。
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第４０卷 第８期
２０１５年８月
　　　　　　　　　　　　　　　中 国 调 味 品
Ｃｈｉｎａ　Ｃｏｎｄｉｍｅｎｔ 基础研究