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RP-HPLC-UVD法测定莽吉柿胶囊中alpha-mangostin的含量



全 文 :RP- HPLC- UVD法测定莽吉柿胶囊中
alpha- mangos tin 的含量
赵岩 1, 刘金平 2, 卢丹 2, 李平亚 2※, 张连学 1
(1.吉林农业大学中药材学院,长春 130118; 2.吉林大学再生医学科学研究所,长春 130021)
摘要:建立一种测定莽吉柿胶囊中α- 倒捻子素(alpha- mangostin)含量的方法。采用反相高效液相色谱 - 紫外检测法测定。色谱
条件:DiamonsilTMCl8色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇 - 水(83∶17),流速为 1.0 mL/min,柱温:25℃,紫外检测波
长:317 nm。在选定的色谱条件下,反相高效液相色谱 - 紫外检测法符合精密度、准确度、线性(r =0.999 5)的基本要求,加样回收率
为 100.9%,RSD为 1.82%。该方法简便、准确、灵敏度高、重现性好,可用于莽吉柿胶囊中 alpha- mangostin的含量测定。
关键词:莽吉柿胶囊;α- 倒捻子素;双苯吡酮;含量测定;反相高效液相色谱
中图分类号:R927.2 文献标识码:A
Determination of Alpha- mangostin in Mangjishi
Capsule by Using RP- HPLC- UVD
ZHAOYan1,LIU Jin- ping2,LUDan2,LI Ping- ya2※,ZHANGLian- xue1
(1.College of Chinese Medicinal Materials,Jilin Agricultural University,Changchun 130118,China;
2.Institute of Frontier Medical Science of Jilin University,Changchun 130021,China)
Abstract:To establish a method for the determination of alpha- mangostin in Mangjishi capsule. Reverse phase high- perfor-
mance liquid chromatography(RP- HPLC)method with a ultra- violet detector(UVD)was performed using a 5μm Diamon-
silTMCl8 column(4.6 mm×250 mm)at 25℃,the mobile phase composition was metha- nol- water(83∶17),the flow rate was
at 1.0 mL/min, the detection wavelength was at 317 nm. The method fulfilled all the standard requirements of precision,ac-
curacy and linearity(r =0.999 5).The recovery was 100.9 %,RSD was 1.82 %.RP- HPLC- UVD method is simple,accu-
rate,high sensitivity,good reproducibility,and can be used for determination of alpha- mangostin in Mangjishi capsule.
Key words:Mangjishi capsule;Alpha- mangostin;Xanthone;Determination;RP- HPLC
收稿日期:2009- 12- 29
基金项目:吉林农业大学中药材学院博士基金项目(ZYC2009- 01)
作者简介:赵岩(1979-),男,吉林长春市人,博士,讲师,主要从事中药化学成分及其生物活性研究工作。
※通讯作者:李平亚,E- mail:lipy@jlu.edu.cn.
文章编号:1001- 4721(2010)03- 0050- 03
特 产 研 究Special Wild Economic Animal and Plant Research50
莽吉柿(Pericarpium Garciniae Mangostanae)为藤
黄科(Guttiferae)藤黄属(Garcinia)常绿乔木莽吉柿
(Garcinia mangostana L.)果实山竹(Mangosteen)的干燥
果皮,是东南亚地区的传统药物。作为热带五大名果之
一的山竹,有数百年的栽培历史,原产于马来半岛和马
来群岛,在东南亚地区栽培较多。1919年中国台湾引
种,1930~1950年中国海南的文昌、琼海、万宁、保亭等
县引种。从 20世纪 70年代开始,莽吉柿的化学成分及
其生物活性已引起国外业内人士的关注,相继发现了
一系列新的化学成分,主要为双苯吡酮—xanthones类
化合物,其主要的有效成分为 alpha- mangostin。具有一
系列非常有价值的生物活性,如抗疟原虫、抗氧化、抗
肿瘤、抗菌、抗炎、抗过敏、抗 HIV等活性[1~6],而国内的
研究成果非常少见。本课题组对莽吉柿进行了系统研
究,包括化学成分[7~9]、降血脂活性[10]、一般药理学、毒理
学等,并研制开发了中药二类新药——莽吉柿胶囊。莽
吉柿胶囊是以山竹的干燥果皮为原料,经现代科学方
法提取制成的硬胶囊制剂,主要用于治疗高血脂症,其
主要有效物质为以α- 倒捻子素为代表的双苯吡酮类
化合物。本试验介绍了通过反相高效液相色谱 - 紫外
检测法(CRP- HPLC- UVD)来控制莽吉柿胶囊的生产
质量的方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器
SHIMADZU LC- 10AT高效液相色谱仪(日本);
LC- 10VP紫外检测器(日本);N2000色谱工作站(浙江
大学智能信息工程研究所)。
1.2 试药
α- 倒捻子素对照品(本实验室自制;批号:
081218,纯度:99.2 %);甲醇为色谱纯,其它试剂为分
析纯;莽吉柿 4批样品(批号:090620、090905、090907、
090909,由吉林大学再生医学科学研究所提供)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:DiamonsilTMC18(250 mm×4.6 mm,5μm);
柱温:25℃;流动相:甲醇 - 水(83∶17);流速:1.0
mL/min;检测波长:317 nm;进样量:10μL。
2.2 对照品溶液的制备
取α- 倒捻子素对照品适量,精密称定,加甲醇制
成每 1 mL含 0.1 mg的溶液,即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品内容物,混匀,取 0.1 g,精密称定,加 85 %
乙醇 100 mL超声处理 10 min,过滤;滤液蒸干,残渣加
甲醇适量使溶解,并转移至 100 mL量瓶中,加甲醇至
刻度,摇匀,过滤,取续滤液,即得。
2.4 线性关系的考察
精密吸取α- 倒捻子素对照品溶液(0.216 mg/mL)
2μL、4μL、6μL、8μL、10μL、12μL、14μL、16μL进
样,以对照品峰面积为纵坐标,对照品的量为横坐标
绘图,得一直线,回归方程为 y=1 686 516x+17 849.03
r = 0.999 5,数据见表 1。
结果表明,α- 倒捻子素在 0.432μg~3.456μg范
围内呈良好的线性关系。
2.5 阴性对照溶液的测定
按照“供试品溶液的制备”方法制备不含莽吉柿的
阴性测试溶液,依法测定并记录 HPLC色谱图。结果表
明,在α- 倒捻子素的峰位处,阴性对照溶液无干扰。说
明供试品中其它组分对α- 倒捻子素的测定也无干扰。
2.6 稳定性试验
取供试品溶液(090620),每隔 2 h测试 1次。测定
结果表明,供试品溶液 8 h内保持稳定,结果见表 2。
2.7 精密度试验
取同一供试品溶液(090620),连续进样 5次,结果
见表 3。
2.8 重现性试验
同一批样品(090620),按“供试品溶液的制备”项
下平行制备 6份样品,独立测定,结果见表 4。
2.9 加样回收率试验
称取已知含量的样品(090620)0.01g 9份,精密称
定。加α- 倒捻子素适量,加 85 %乙醇 15 mL,超声处
理 10 min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇适量使溶解,并
转移至 25 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,过滤,取续
滤液,依正文方法测定,计算回收率,结果见表 5。
表 1 标准曲线数据
α-倒捻子素量(μg)
峰面积
α-倒捻子素量(μg)
峰面积
0.432
760 868
2.160
3 587 317
0.864
1 476 080
2.592
4 351 765
1.296
2 257 438
3.024
5 217 167
1.728
2 886 912
3.456
5 833 935
表 2 稳定性试验结果
时间(h) 0 2 4 6 8 RSD(%)
峰面积 2 799 291 2 833 095 2 768 657 2 841 381 2 856 490 1.26
表 3 精密度试验结果
No. 1 2 3 4 5 RSD(%)
峰面积 2 704 650 2 784 235 2 796 227 2 722 960 2 876 978 2 735 216
表 4 重现性试验结果
No. 1 2 3 4 5 6 RSD(%)
含量(mg/粒) 44.8 44.6 45.1 45.7 43.9 45.1 1.34
第 3期 赵岩,等:RP- HPLC- UVD法测定莽吉柿胶囊中 alpha- mangostin的含量 51
表 5 回收率试验结果
No.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
称样量(mg)
10.1
10.7
10.6
10.8
11.1
11.2
9.7
10.5
10.7
样品含量(μg)
1.333
1.412
1.399
1.426
1.465
1.478
1.280
1.386
1.412
添加量(μg)
0.2
0.2
0.2
1.0
1.0
1.0
1.5
1.5
1.5
测得量(μg)
1.533
1.615
1.597
2.467
2.499
2.488
2.799
2.882
2.897
回收率(%)
99.9
101.3
98.9
104.1
103.4
101.0
101.2
99.7
99.0
均值(%)
100.9
RSD(%)
1.82
2.10 样品的含量测定
按照“供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液,
按照“对照品溶液的制备”方法制备对照品溶液,分别
吸取对照品溶液 10μL和供试品溶液 10μL注入高效
液相色谱仪,采用外标法计算含量,结果见表 6。结果,3
批样品含α- 倒捻子素的平均值为 45.0 mg/粒。
3 讨论
本试验以α- 倒捻子素为对照品,采用反相高效
液相色谱 - 紫外检测法测定莽吉柿胶囊中的α- 倒捻
子素含量。试验中色谱条件采用 DiamonsilTMCl8色谱柱
(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇 - 水(83∶
17);流速为 1.0 mL/min;柱温:25 ℃;紫外检测波长:
317 nm。试验结果表明,在选定的色谱条件下,反相高
效液相色谱 - 紫外检测法符合精密度、准确度、线性(r
= 0.999 5)的基本要求,加样回收率为 100.9%,RSD为
1.82%。该方法简便,准确,灵敏度高,重现性好,可用
于莽吉柿胶囊中 alpha- mangostin的含量测定。
参 考 文 献
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表 6 3批样品α- 倒捻子素含量测定结果
批号 含量(mg/粒)
090905 44.6
090507 45.4
090909 44.9
特 产 研 究 2010年第 3期52