全 文 ：华西药学杂志W CJ· PS　2008, 23(5)：538 ～ 540 　　
1.2.10　回收率试验　精密称取同一批次药材 6份
(157.7 mg·g-1),加入齐墩果酸对照品溶液 ,按供
试品溶液的制备方法实验 ,显色后 , 80min内测定吸
光度 ,计算回收率(表 5)。
表 5　回收率实验(n=6)
Table5　Resultsofrecoverytest(n=6)
Oringal Added/mg A Recovery/% X RSD/%
1.0143 0.0156 0.7492 98.1 101.7 1.54
1.0146 0.0156 0.7581 98.7
1.0145 0.0234 0.6014 100.5
1.0151 0.0234 0.6133 101.8
1.0150 0.0312 0.6960 101.8
1.0148 0.0312 0.6842 100.1
1.2.11　瘤果槲寄生中总皂苷的测定 　精密称取
5.0g不同批号的瘤果槲寄生药材约于 250ml圆底
烧瓶中 ,选择最佳的提取条件 ,按供试品溶液的制备
方法实验 ,以样品和甲醇为空白对照 ,显色后在 536
nm测定吸光度 ,由标准曲线回归方程计算出样品中
总皂苷的含量 , 2002、2003、2004年样品中总皂苷的
含量分别为 1.73%、4.54%、3.13%。结果表明 ,药
材中总皂苷的含量以新鲜的较高 ,瘤果槲寄生药材
中总皂苷的含量以采摘年度为 2003年的最高。
2　讨论
将药材的醇提液分别用石油醚 、乙酸乙酯 、正丁
醇萃取 , 3种萃取溶剂中均能检测到三萜及其三萜
皂苷成分 ,故工艺提取时不采用萃取步骤 ,而直接将
醇提液处理后显色 ,用紫外 -可见分光光度法对特
征成分进行含量测定。由于齐墩果酸等三萜类化合
物在 8%香草醛乙醇溶液和 72%硫酸作用下于 536
nm处产生最大吸收 [ 4] ,故通过紫外 -可见分光光
度法来测定其中总皂苷的含量 [ 5] 。经实验确定的
显色条件 ,倘若改变香草醛乙醇溶液和硫酸的浓度 ,
则显色不稳定 ,显色后的加热时间不足也将导致含
量测定的数据不准确。
研究结果表明 ,瘤果槲寄生三萜皂苷类化合物
含量高 ,提示尚有大量的 、尤其是进一步寻找中等极
性以上的 、结构新颖具活性的皂苷类化合物方面的
研究工作有待进行 。系统研究系列化合物在抗肿瘤
方面的活性及构效关系 ,可为寻找高效 、低毒化合物
进而研究新药奠定基础 ,也为开展分子多样性的苷
类天然产物的合成和创新药物研究提供借鉴 。
参考文献:
[ 1] 　 罗集鹏 ,张电光.瘤果槲寄生的形态组织和紫外光谱鉴别
[ J] .中药材 , 2001, 24(11):797.
[ 2] 　 杨燕军 ,林洁红 ,郭可锦.瘤果槲寄生化学成分的研究 [ J].
广州中医药大学学报 , 2005, 22(2):144.
[ 3] 　 于德泉 ,吴毓林.天然产物化学进展 [ M] .北京:化学工业出
版社 , 2005.86-107.
[ 4] 　 郭明全 ,宋风瑞 ,陈貌连 ,等.超声提取 -分光光度法测定刺
五加叶中总皂苷含量 [ J].分析化学 , 2002, 30(2):250.
[ 5] 　 何正有 ,张艺 ,张旭 ,等.分光光度法测定藏翼首草中总皂苷
的含量 [ J] .华西药学杂志 , 2002, 17(1):43-45.
收稿日期:2008-01
作者简介:王海宁(1985-),男 ,山东济宁 ,从事天然药物化学研究。
微波辅助提取竹叶柴胡中的槲皮素
王海宁 1 ,谢印芝 2 ,樊飞跃1 ,刘培勋 1 ,龙　伟1
(1.中国医学科学院 放射医学研究所 ,天津 300192;2.天津美伦医药集团 ,天津 300400)
摘要:目的　利用微波辅助提取技术从竹叶柴胡中提取槲皮素。方法　考察了影响提取率的因素 ,包括提取溶剂 、物料粒度 、
微波时间 、功率 、固液比 、pH值。结果　确定了微波辅助提取竹叶柴胡槲皮素的最佳条件为:60%乙醇作提取溶剂 ,竹叶柴胡
粒度为 80～ 120目 , pH7 ～ 8,按 1：30的料液比 , 480W下辐照 3min。槲皮素提取率为 2.8 ～ 3.0mg·g-1 , 较热回流提取 2 h的
提取率多 23.5%。结论　微波辅助提取不仅提取率高 , 且缩短提取时间 ,是竹叶柴胡中槲皮素快速高效的提取方法。
关键词:微波辅助提取;槲皮素;竹叶柴胡;正交实验设计;高效液相色谱
中图分类号:R28　 文献标识码:A　 　文章编号:1006-0103(2008)05-0538-03
ExtrationtechnologyofquercetininHerbaBupleuribymicrowave
WANGHai-ning1 , XIEYin-zhi2 , FANFei-yue1 , LIUPei-xun1 , LONGWei1
(1.InstituteofRadiationMedicine, ChineseAcadmayofMedicalScience, Tianjin300192, China;2.TianjinMeilunPharmaceutical
Group, Tianjin30040, China)
DOI :10.13375/j .cnk i.wcjps.2008.05.013
Abstract:OBJECTIVE　ToextractquercetininHerbaBupleuriusingmicrowaveassistextraction.METHODS　Thefactorsinclu-
dingextractionsolvent, materialgradesize, microwavetimeandpower, solid-liquidratioandpHwhichinfluenceextractedratewere
inspected.RESULTS　Theoptimizedconditionsofmicrowaveassistextractionwereasfolows:extractionsolventwas60% alcohol,
thematerialsizewas80-120 meshed, pHwas7-8, solid-liquidwas1：30.Thepowerofextractionirradiationwas480 Wandthe
extractiontimewas3min.Theextractionyieldofquercetinwas2.8-3.0mg· g-1 , 23.5% higherthanheatrecirculationfor2hours.
CONCLUSION　MicrowaveassistextractionisarapidandeficientextractiontechniqueforextractionofquercetininHerbaBupleuri.
Keywords:Microwaveassistextraction;Quercetin;HerbaBupleuri;Orthogonolexperimentaldesign;HPLC
CLCnumber:R28　　　 Documentcode:A　 　ArticleID:1006-0103(2008)05-0538-03
　　竹叶柴胡 BupleurummarginaturnWal.ExDC.
为伞形科柴胡属植物 ,性味苦寒 ,具有解热 、镇痛 、抗
病毒和保肝的作用 [ 1] 。竹叶柴胡主要分布于四川
北部 、陕西南部 、湖北西部以及云南 、贵州等省 ,为目
前市场上药材柴胡的三大主要来源之一[ 2] 。槲皮
素是一种具有多种生物活性的黄酮类化合物 ,是黄
酮类化合物的主要成分 ,具有抗氧化 、抗炎 、抗过敏 、
抗菌 、抗病毒 、清除体内自由基 、抑制恶性肿瘤的生
长和转移 ,降低血压 、增强毛细血管抵抗力 、调血脂 、
扩张冠状动脉等作用 [ 3] 。已有利用微波技术从槐
米 、蒲公英 、洋葱中提取槲皮素的报道[ 4 ～ 6] 。为此 ,
特采用微波技术从竹叶柴胡中提取槲皮素 ,开辟了
竹叶柴胡加工的新途径。
1　实验部分
1.1　仪器与材料
LC-10Avp高效液相色谱仪(日本岛津)。槲
皮素对照品(中国药品生物制品检定所);竹叶柴胡
(市售)经天津中医药大学中药鉴定教研室张丽娟
副教授鉴定为竹叶柴胡 Bupleurum marginatum
Wal.exDC.。
1.2　方法与结果
1.2.1　色谱条件　色谱柱 DiamonsilC18(150mm ×
4.6 mm, 5 μm);流动相为甲醇 -0.4%磷酸(60：
40);流速 1ml·min-1;柱温 35℃;检测波长 370nm。
1.2.2　溶液的制备 　取竹叶柴胡粉碎 , 烘箱中
60℃烘干 2 h。称取一定量的粉末于三角瓶中 ,加入
一定量不同浓度的乙醇 ,搅匀 ,浸泡 ,将瓶口用保鲜
膜覆盖 ,放入微波炉中加热 ,取出过滤 ,滤液加溶剂
定容至 100 ml,摇匀即为供试液 。精密称取 15.2
mg槲皮素对照品 ,加甲醇定容至 100ml量瓶中 ,摇
匀 ,得 152 μg·ml-1的对照品溶液。
1.2.3　线性关系的考察 　分别取 2.0、4.0、6.0、
8.0、10.0 μl对照品溶液 ,进样 ,记录峰面积。结果显
示 ,槲皮素 0.304 ～ 1.520 μg与峰面积的线性关系良
好 ,回归方程为:Y=2 ×106X+39.482 ×103 (r=
0.9999)。
1.2.4　单因素考察　取 2.0 g干燥竹叶柴胡粉末 ,
置 150 ml三角瓶中 ,按固液比 1：20(g·ml-1)依次
加入水 、30% 、50% 、60%、70%的乙醇浸泡 30 min,
320 W微波作用 2 min。提取液过滤 、定容 ,并测定
槲皮素的含量由图 1a可见 ,随乙醇浓度的增加 ,槲
皮素含量增加 ,乙醇浓度为 60%时最大 ,进一步增
大浓度 ,含量降低。
取 2.0 g干燥竹叶粉末 ,粒度分别为 24目以
上 、24 ～ 50目 、50 ～ 80目 、80 ～ 120目 、120目以上 ,
置 150 ml三角瓶中 ,按固液比 1：20依次加入 60%
的乙醇 ,浸泡 30min, 320W微波作用 2min,提取液
处理后测定槲皮素的含量由图 1b。可见 , 80 ～ 120
目的提取率较大。
取干燥竹叶粉末 2.0g,过 80 ～ 120目筛 ,置 150
ml三角瓶中 ,按固液比 1：20依次加入 60%的乙
醇 ,分别用 1 mol·L-1柠檬酸或 1 mol·L-1 NaOH调
节 pH3 ～ 4、pH5 ～ 6(原液)、pH7 ～ 8、pH9 ～ 10、
pH11 ～ 12、pH13 ～ 14,浸泡 30 min, 320 W微波作用
2min。提取液处理后测定槲皮素的含量由图 1c可
见 , pH7 ～ 8提取率最高。
取干燥竹叶粉末 2.0 g过 80 ～ 120目筛 ,置 150
ml三角瓶中 ,按固液比 1：20依次加入 60%的乙
醇 , 1mol·L-1 NaOH调节 pH7 ～ 8,浸泡 30min,分别
选取微波功率为 160、 320、480、640、 800 W作用 2
min。提取液处理后测定槲皮素的含量由图 1d可
见 , 480W时提取率最高 。
取干燥竹叶粉末 2.0 g(80 ～ 120目),置 150 ml
三角瓶中 ,按固液比 1：20依次加入 60%的乙醇 ,
1mol·L-1 NaOH调节 pH7 ～ 8 ,浸泡 30 min, 320 W
功率下分别用微波作用 30s及 1、2、3、4、5 min。提
取液处理后测定槲皮素的含量 。由图 1e可见 , 3
min时槲皮素提取率达最大值 ,此后随时间延长 ,提
取率逐渐减少 。
取干燥竹叶粉末 2.0g,过 80 ～ 120目筛 ,置 150
ml三角瓶中 ,分别按固液比 1：10、1：20、1：30、
1：40依次加入 60%的乙醇 , 1 mol·L-1 NaOH调节
pH7 ～ 8。浸泡 30min,选取微波功率为 320 W的条
件下作用 2min。提取液处理后测定槲皮素的含量。
由图 1f可见 ,固液比 1：30时 ,提取率最高。
539第 5期 王海宁 ,等。微波辅助提取竹叶柴胡中的槲皮素 　　　
1.2.5　不同提取工艺的比较　将微波提取法与传
统提取法进行比较(表 1)。可见微波提取与索式提
取效果接近 ,比回流提取高出 23.5%。
表 1　不同提取工艺所提槲皮素得率的比较
Table1　Extractionyieldsofquercetinwithdiferentextractive
techniques
提取方法 提取时间 提取溶剂 料液比 提取率 / mg·g-1
乙醇回流 2 h 60%乙醇 1： 30 2.37
索式提取 6 h 甲醇 1： 30 2.98
微波提取 3 min 60%乙醇 1： 30 2.93
图 1　乙醇浓度(a)、物料粒度(b)、pH(c)、微波功率(d)、微波时间
(e)和料液比(f)对槲皮素得率的影响
Fig1　effectsofconcentrationofalcohol(a), materialsize(b), pH
(c), microwavepower(d), time(e)andsolid-liquidratio
(d)ontheextractionofquercetin
2　讨论
随着乙醇浓度的增加 ,槲皮素含量增加 。乙醇
浓度为 60%时最大 ,进一步增大浓度 ,含量降低 。
可能与槲皮素的极性有关 ,因为微波提取的选择性
主要取决于目标物质和溶剂性质的相似性;提高乙
醇浓度 ,可增加提取剂对物料的渗透性 ,提高槲皮素
的溶解度。但使用微波加热时 ,乙醇浓度过高会使
料液升温减慢 ,从而影响得率。综合考虑 ,将乙醇浓
度确定为 60%。 50目以下提取率相对较低 ,可能由
于竹叶柴胡茎及叶柄粉碎度不够 ,集中于低目数部
分 ,且其中槲皮素含量较少;120目以上的细粉主要
为纤维类物质 ,槲皮素含量相对较低;50 ～ 120目随
着粒度变小 ,比表面积增大 ,植物细胞 、组织受破坏
程度较大 ,从而利于有效成分的扩散 ,提取率逐渐增
大。 pH7 ～ 8提取率最高 ,因槲皮素为黄酮类化合
物 ,含有酚羟基 ,宜在碱性环境下提取;而碱浓度过
高时 ,加热条件下可能破坏黄酮类母核 ,提取率反而
下降 。当微波功率小于 480 W时 ,提取液槲皮素含
量随功率增大而升高 ,可能因功率增大 ,加热速率增
大 ,分子运动速度加快 ,摩擦增加 ,物质的渗透 、扩散
和溶解速度加快 ,故有利于有效物质由外层细胞转
移到溶剂中。超过 480W后 ,提取液槲皮素含量下
降 ,可能是强热效应对其产生了破坏作用 ,同时溶剂
挥发较多 ,溶解出的杂质也增多。 3 min时 ,槲皮素
提取率达最大值 , 此后随时间延长 ,提取率逐渐减
少。可能由于微波辐射在短时间内对细胞膜的破碎
作用比较大 ,溶出物多 ,所以产率上升较快 [ 7] 。增
加提取剂比例 ,可提高得率 ,因溶液体积增大时 ,可
使槲皮素从胀破的细胞里充分溶解出来 ,从而提高
得率 。当料液比达 1：30后 ,继续增加提取剂比例 ,
对得率不再有明显影响 ,增加提取剂比例会加大后
续处理工序的投入 。
试验中使用的是家用微波炉 ,不能对物料进行
长时间加热。因此 ,只能采用间歇加热方式 ,加热一
段时间要对料液降温 ,然后再补足加热时间 ,因此 ,
提取温度不易控制 。由此产生的影响暂时还无法评
估。文献 [ 8]报道 ,使用几个间断辐射的周期比连续
辐射效果要好 ,视具体的被萃取物质而定。通过微
波辅助提取与传统提取方法的比较可见 , 微波提取
不仅提取率高 ,且提取时间也大大缩短 ,是一种很有
潜力的提取技术。
参考文献:
[ 1] 　 冯煦 ,王鸣 ,赵友谊 ,等.北柴胡茎叶总黄酮抗流感病毒作用
的研究 [ J] .植物资源与环境学报 , 2002, 11(4):15.
[ 2] 　 中药辞海编委会.中药辞海 [ M] .北京:中国医药科技出版社
[ M] , 1996.2035.
[ 3] 　 宋玉乔 ,姚凌云 ,曹蔚 ,等.槲皮素的药理作用研究近况 [ J].
2002, 17(1):40-42.
[ 4] 　 蒙松年 ,陈代武.微波辅助提取槐米中槲皮素 [ J] .华西药学
杂志 , 2005, 20(6):561-562.
[ 5] 　 马丽春 ,魏凤岭.蒲公英提取工艺优选 [ J] .中国中药杂志 ,
2005, 30(13):995-997.
[ 6] 　 陈代武 ,李杰红.微波技术提取洋葱中槲皮素和及其含量的
HPLC测定 [ J] .邵阳学院学报 , 2005, 2(2):107-108.
[ 7] 　 龚盛昭 ,杨卓如 ,曾海宇 ,等.微波提取黄芪甲苷的工艺研究
[ J] .中成药 , 2005, 27(8):889-891.
[ 8] 　 GanzlerK, SalgoA, ValkoK.Microwaveextraction-anovel
samplepreparationmethodforchromatograPhy[ J] .JChromatog-
raphy, 1986, 371(1):299-306.
收稿日期:2007-11
540 　 华 西 药 学 杂 志　　　 第 23卷