全 文 ：2010，Vol．13 No．1Journal of Guangxi Traditional Chinese Medical University
图 1 糯米藤氯仿提取液 UV－VIS吸收光谱
图 2 糯米藤乙酸乙酯提取液 UV－VIS吸收光谱
图 3 糯米藤丙酮提取液的 UV－VIS吸收光谱
图 4 糯米藤乙醇提取液 UV－VIS吸收光谱
华凤仙总黄酮的含量测定
彭定基，李 兵，陈晓丽
（广西中医学院，广西 南宁 530001）
摘 要：［目的］对华凤仙药材中黄酮类化学成分进行专项预试，并建立分光光度法测定其中总黄酮的含量。［方法］采用分
光光度法，以芦丁为对照品，以亚硝酸钠－硝酸铝－氢氧化钠为显色剂，在波长 510 nm处对药材总黄酮含量进行测定。［结果］黄
酮类化合物在 0．005～0．05 mg/ml范围内线性关系良好（r ＝0．9996）；平均加样回收率为 96．37％，RSD＝2．26％（n＝6）；华凤仙药材
中总黄酮的平均含量为 1．92 mg/g。［结论］本测定方法简便快速，稳定可靠，可用于华凤仙中总黄酮的含量测定。
关键词：华凤仙；总黄酮；分光光度法；含量测定
中图分类号：R284．1 文献标识码：A 文章编号：1008－ 7486（2010）01－ 0054－ 02
收稿日期：2010－02－01
华凤仙，别名水凤仙、水指甲花、象鼻花等，分布于广东、
广西、浙江、江西、福建、云南等地。具有清热解毒、活血化瘀、
消肿拔脓的功效，用于治疗发热、咳嗽、咳痰、肺结核、跌打损
伤、瘀血疼痛；外用治蛇头指疮、痈疮肿毒等病症，为广西民间
常用中草药［1］。目前国内对华凤仙药材中黄酮类化合物的提
取分离以及其含量测定的相关研究尚未见报道。本实验通过
专项化学成分预试验，提示华凤仙中含有黄酮类化合物，并进
一步采用分光光度法测定其中总黄酮的含量。现报道如下。
1 仪器与试药
美国 Agilent 8453型紫外－可见分光光度计；华凤仙药材
采于广西南宁市老虎岭，经广西中医学院朱意麟老师鉴定为
凤仙花科（Balsaminaceae）植物华凤仙（Impatiens chinensis
Linn．）的根、茎、叶和花全株；芦丁对照品（购于中国药品生物
行该植物生物活性成分的提取、分离研究提供了实验基础。
3．2 经紫外－可见光谱扫描发现，糯米藤全草在不同溶剂中
具有不同的特征吸收峰，对生药学的鉴别有一定意义，为民间
用药的品种鉴定、品质评价和资源的开发利用提供科学依据。
参考文献
［1］国家中医药管理局《中华本草》编委会．中华本草［M］．第
五卷．上海：上海科学技术出版社，1999：557．
［2］《全国中草汇编》编写组．全国中草药汇编（上册）［M］．北
京：人民卫生出版社，1996：969．
［3］南京中医药大学．中药大辞典（下册）［M］．上海：上海科学
技术出版社，2006：3859．
（编辑 陈明伟）
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广西中医学院学报2010年 第 13卷 第 1期
制品检定所，批号 100080－200306，供含量测定用）；无水甲
醇。
2 方法与结果
2．1 华凤仙化学成分预试验 取华凤仙粗粉 2 g，加 95％乙
醇 20 ml，加热回流提取 1 h，滤过，取滤液做下列黄酮类化合
物的定性检查试验。
2．1．1 盐酸－镁粉反应 取乙醇提取液 1 ml于试管中，加少
量镁粉，再加入浓盐酸数滴，在沸水浴中加热 3 min，溶液呈
紫红色。
2．1．2 三氯化铝试验 取乙醇提取液点在滤纸上，再滴加
1％三氯化铝乙醇液，在紫外光下观察呈黄色荧光斑点。
2．1．3 氨熏试验 取乙醇提取液滴在滤纸上，置氨气上熏，斑
点由浅黄色变黄色，紫外灯光观察显黄色荧光斑点。
以上实验结果表明，该乙醇提取液中可能含有黄酮类化
合物。
2．2 测定溶液的制备
2．2．1 对照品溶液的制备 取 120 ℃干燥至恒重的芦丁对照
品约 10 mg，精密称定，用无水甲醇溶解，并定容至 100 ml量
瓶中，摇匀，得芦丁对照品溶液浓度为 0．1001 mg/ml。
2．2．2 供试品溶液的制备 取华凤仙粗粉 2 g，精密称定，加
95％乙醇 20 ml，加热回流 1 h，滤过，滤液加适量水使含醇量
为 70％，在分液漏斗中加石油醚萃取除去叶绿素，加 70％乙
醇定容至 50 ml，备用。
2．3 波长的选择 取供试品溶液适量，加 5％亚硝酸钠溶液
0．30 ml，在碱性条件下，经硝酸铝显色后，以相同试剂为空白
液，在 400～800 nm波长范围内测定供试品溶液的吸光度，结
果表明，供试品溶液于 510 nm波长处有最大吸收，故选用此
波长为测定波长。
2．4 标准曲线的绘制 分别精密吸取芦丁对照液
（0．1001 mg/ml）0，0．25，0．50，1．00，1．50，2．00，2．50 ml 于 5 ml
量瓶中，加入 5％亚硝酸钠溶液 0．15 ml，摇匀，静置 6 min；再
加 10％硝酸铝溶液 0．15 ml，摇匀，静置 6 min；再加 4％氢氧
化钠溶液 2 ml，用 60％乙醇稀释至刻度，摇匀，静置 12 min，
以相同试剂作空白对照，于 510 nm处测定吸光度。得出回归
方程为：A＝5．4997C＋0．0032，r＝0．9996，线性范围为 0．005～
0．05 mg/ml。芦丁曲线吸收图见图 1。
2．5 精密度试验 精密吸取样品溶液 0．25 ml，共 6份，按标
准曲线的绘制项下自“加入 5％亚硝酸钠溶液”起，同法操作，
测定吸光度，计算总黄酮含量，以总黄酮含量计算出 RSD值
为 0．43％（n＝6），表明该仪器精密度良好。
2．6 稳定性试验 精密吸取供试品溶液 0．25 ml于 5ml量瓶
中，按标准曲线的绘制项下自“加入 5％亚硝酸钠溶液”起，同
法操作，分别于 0，5，10，20，30，60 min在 510 nm处测定吸光
度，RSD值为 1．27％（n＝6），结果显示供试品溶液在 1 h内稳
定。
2．7 重复性试验 取同一批华凤仙药材粗粉的乙醇提取液 6
份，分别按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按标准曲线
的绘制项下自“加入 5％亚硝酸钠溶液”起，同法操作，测定吸
光度，计算出总黄酮含量，RSD值为 2．19％（n＝6）。
2．8 加样回收率试验 精密量取 6份已知总黄酮含量的样
品溶液 1．00 ml，分别加入标准芦丁对照品溶液 1．00 ml
（0．1001 mg/ml），按标准曲线的绘制项下自“加入 5％亚硝酸
钠溶液”起，同法操作，测定吸光度，并计算加样回收率，结果
平均加样回收率为 96．37％，RSD值为 2．26％（n＝6）。
2．9 样品总黄酮的测定 精密吸取供试品溶液 0．25 ml，置
5 ml量瓶中，平行制备 3份，按标准曲线的绘制项下自“加入
5％亚硝酸钠溶液”起，同法操作，测定吸光度，根据回归方程，
计算供试品中总黄酮的含量，结果见表 1。供试品曲线吸收图
见图 2。
3 讨 论
黄酮类化合物分子中的 3－羟基、5－羟基或邻二酚羟基易
与金属盐试剂反应，生成有色的金属络合物，通过比色法可以
测定总黄酮含量。本实验选择比较了中草药中总黄酮类化合
物含量测定常用的 4种显色剂：亚硝酸钠－硝酸铝－氢氧化
钠、10％硝酸铝、三氯化铝－醋酸钾和 10％三氯化铝，结果表明
以亚硝酸钠－硝酸铝－氢氧化钠作为显色剂时吸收光谱最大，
吸收波长重叠较好，且显色后样品稳定；且用本法测定华凤仙
中总黄酮含量有较好的线性关系，可用于其总黄酮的含量测
定。
参考文献
［1］江苏新医学院．中药大辞典（上册）［M］．上海：上海科学技
术出版社，1985：917－918．
（编辑 陈明伟）
图 1 芦丁对照液曲线吸收图
1．5
1．25
1
0．75
0．5
0．25
0
－0．25
－0．5
－0．75
300 400 500 600 700
表 1 华凤仙药材中总黄酮含量 （n＝3）
编号 吸光度（A） 总黄酮含量
（mg/g）
平均含量
（mg/g） RSD（％）
1 0．43 1．95
1．92 1．512 0．42 1．90
3 0．42 1．90
图 2 供试品曲线吸收图
0．8
0．6
0．4
0．2
0
－0．2
－0．4
－0．6
－0．8
300 400 500 600 700
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