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正交设计优选满山红总黄酮的提取工艺



全 文 :·医药工业·
正交设计优选满山红总黄酮的提取工艺
李晓瑞 薛彦朝 常美玲
作者单位:050035 石家庄市 ,河北以岭医药集团
  【摘要】 目的 优选满山红的提取工艺。方法 采用正交设计对满山红提取工艺优化 , 用紫外分
光光度法测定满山红中总黄酮成分含量。结果 满山红总黄酮的最佳提取工艺为 60%乙醇 15倍量回
流提取 2次 , 每次 1 h。结论 此法简单可行方法重现性好 ,适用于工业化生产 。
【关键词】 满山红;总黄酮;正交设计;提取工艺
  满山红为杜鹃花科植物兴安杜鹃(Rhododendron dauricum
L.)的干燥叶 , 具有止咳 、祛痰的功效 , 用于急 、慢性支气管
炎[ 1] ,黄酮类成分是其主要药理成分。本文采用正交设计法探
讨溶剂用量 、提取方法和提取时间对满山红总黄酮含量的影
响 ,优选最佳提取工艺 , 为生产提供科学依据 ,现报道如下。
1 仪器与试剂
1.1 仪器 紫外分光光度计(日本岛津 UV-120 紫外分光光度
计), DL-180型超声仪(浙江象山县海天电子仪器厂)。
1.2 对照品及对照药材 芦丁对照品(批号:0080-9705)及满山
红对照药材(Rhododendron dauricum L.)(批号:1035-2003), 均购
自中国药品生物制品检定所。
1.3 试剂 试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 样品制备 所用满山红药材与对照药材在相应位置上显
相同颜色的荧光斑点 , 故满山红药材为 Rhododendron dauricum
L.。将其在 40℃烘干 , 粉碎成粗粉 ,精密称取各约 1 g 的药材 9
份 ,用 60%乙醇进行提取。采用 L9(34)正交表进行实验 ,按表 1
所列溶剂用量 、提取方法和提取时间进行提取 , 固定提取次数
为2 次。趁热过滤 , 洗涤残渣 , 用 60%乙醇定容于 50 ml量瓶
中 ,摇匀。精密量取 2 ml , 置 10 ml量瓶中 , 用 60%乙醇定容至
刻度 ,即得样品溶液。
表 1 满山红提取条件实验因素水平
水平 因素溶剂用量(倍)A 提取方法 B 提取时间(h)C
1 10 超声 0.5
2 15 回流 1
3 20 浸泡 2
2.2 总黄酮测定 (1)标准曲线的制备:精密称取经五氧化二
磷减压干燥至恒重的芦丁对照品 5.8 mg , 置 100 ml量瓶中 , 加
60%乙醇适量使溶解 , 并稀释至刻度 , 摇匀 , 即得(每 1 ml中含
无水芦丁 58 μg)。精密吸取对照品溶液 0.5、1.0、2.0、3.0、4.0
ml ,分别置 10 ml量瓶中 , 各加 0.1 mol/L 三氯化铝溶液 2 ml , 1
mol/ L醋酸钾溶液 3 ml ,加 60%乙醇至刻度 , 摇匀 , 放置 30 min ,
同时作空白。在 420 nm 的波长处测定吸收度 ,以吸收度(A)为
纵坐标 ,芦丁浓度 C(μg/ ml)为横坐标 , 绘制标准曲线。得回归
曲线:A=5.013 C+0.0356 , r =0.9993。结果表明 , 芦丁在 2.9
~ 14.5 μg/ml范围内 , 吸收度与浓度线性关系良好。(2)样品测
定:样品溶液照“标准曲线制备”项下的方法 , 精密吸取样品溶
液 1.0 mL , 分别置 10 ml量瓶中 , 自“加 0.1 mol/ L 三氯化铝溶
液”起 ,置 420 nm 下测定吸光度值 , 并按回归方程计算样品溶液
中总黄酮含量。
2.3 实验结果 各样品总黄酮含量含量见表 2。
表 2 正交试验方案和结果
试验号码 A B C 总黄酮含量(%)
1 1 1 1 1.25
2 1 2 3 2.37
3 1 3 3 1.88
4 2 1 2 3.56
5 2 2 3 3.46
6 2 3 1 1.73
7 3 1 3 2.4
8 3 2 1 1.46
9 3 3 2 2.52
K1 5.50 7.21 4.44
K2 8.75 7.29 8.45
K3 6.38 6.13 7.74
R 3.25 1.16 4.01
2.4 结果分析 对试验结果进行分析 , 结果见表 3。从中可以
看出各因素对提取效果的影响程度依次为 C>A>B , C、A因素
差异均有显著性 , 而 B在所考察的范围内则影响最小。各因素
的最佳组合水平 A2B2C2 。
表 3 方差分析
方差来源 方差平方和 自由度 均方 F 值 P值
A 1.884 2 0.942 21.1 <0.05
B 0.280 2 0.140 3.1
C 3.503 2 1.526 34.3 <0.05
误差 0.089 2 0.045
3 讨论
满山红中总黄酮的最佳提取条件为:用 15 倍的 60%乙醇
回流提取 1 h , 提取 2 次 , 以此法提取满山红总黄酮含量为
3.5%,与表 2 中试验 4 较接近 , 说明本文选用的制备工艺是完
全可行的。
参考文献
1 中华人民共和国药典一部.第 1版.北京:化学工业出版社 , 2000.
296-297.
146 河北医药 2006 年 2月第 28 卷第 2期 Hebei Medical Journal , Feb 2006 , Vol 28 , No.2