全 文 ：中国药物与临床2008年8月第8卷第8期ChineseRemedies&Clinics,August2008,Vol.8,No.8
满山红为杜鹃花科植物兴安杜鹃的干燥叶(Rhododen-
drondauricumL),满山红具有止咳、祛痰、平喘的作用,用于
治疗急、慢性支气管炎、哮喘[1]。满山红滴丸是由其总黄酮有
效部位开发而成的中药新药,有服用剂量小、速效等优点,满
足急慢性支气管炎及哮喘快速释放的要求,剂型选择合理。
本试验制定滴丸的质量标准,为质量控制提供依据。
1 仪器药品
1.1 仪器:TU—1901紫外吸收光谱仪(北京普析通用仪器有
限责任公司),752型分光光度计 (上海菁华科技仪器有限公
司),MP3002分析天平(0.1mg)。
1.2 药品与试药:满山红滴丸(山西医科大学药学院自制),
芦丁标准品购自中国药品生物制品检定所,其他试剂均为分
析纯。
2 方法与结果[2,3]
2.1 色谱鉴别
称取滴丸粉末0.10g用甲醇5ml将药物溶解,作为供试
品溶液;取杜鹃素对照品,加甲醇制成 1mg/ml的对照品溶
液;称取适量基质配成 0.6mg/ml浓度的甲醇溶液作为阴性
对照进行薄层色谱试验。吸取上述 3种溶液各 5μl,分别点
于同一硅胶 G薄层板上,以甲苯—乙酸乙酯—甲酸的上层溶
液为展开剂,置于饱和15min的展开缸中展开,取出晾干,喷
三氯化铝试液,加热至斑点显色清晰,置紫外灯下(365nm)
检视。供试品色谱中,在于对照品色谱对应的位置上有相同
淡绿色的荧光斑点,阴性对照没有显示斑点。
2.2 总黄酮含量测定
2.2.1 对照品溶液的制备:精密称取经五氧化二磷减压干燥
至恒质量的芦丁对照品适量,加 60%的乙醇制成 60.0μg/ml
的溶液,作为对照品溶液。
2.2.2供试品溶液的制备:取满山红滴丸适量研磨成粉,精密
称取 80mg置 100ml量瓶中,加 60%的乙醇溶解并加至刻
度,摇匀即得。
2.2.3 最大吸收波长的选择:供试品溶液及对照品溶液过
滤,精密吸取续滤液各 1ml,分别加 0.1mol/L三氯化铝 2
ml,1mol/L醋酸钾 3ml显色,60%的乙醇定容至 10ml,同时
作空白,放置 30min,在 200~600nm进行光谱扫描,结果两
者在418nm处均有最大吸收。另外精密称取基质适量,配成
0.6mg/ml浓度,同法加显色剂进行光谱扫描,结果在 418nm
处没有吸收,最大吸收波长选为418nm。
2.2.4 标准曲线建立:精密量取芦丁对照品溶液 0.5、1、2、3、
4ml,按2.3.3方法在418nm处测定吸光度。以浓度为横坐
标,吸收值为纵坐标,计算回归方程为:Y=0.0287X+0.0005
(r=0.9998),线性范围为:3.0、6.0、12.0、18.0、24.0μg/ml,A值
分别为0.091、0.171、0.338、0.520、0.690。
2.2.5 稳定性试验:精密称取滴丸粉末 79.9mg,按 2.2.3方
法显色,立即测定吸光度值,然后每间隔 5min测定 1次,共
测定120min。结果显示,前30min吸收度增大较快,30~105
min吸收度稳定。
2.2.6 精密度试验:按 2.2.3方法对同一批对照品溶液进行 6
次测定,结果分别为 0.334,0.338,0.340,0.343,0.337,相对标
准差(RSD)为0.91%。
2.2.7 重复性试验:精密称取同一批号的滴丸粉末 80mg,6
份,分别按照“供试品溶液的制备”方法制备供试液,测定吸
光度值。结果:满山红滴丸中总黄酮平均含量为 13.99%,
RSD=1.3%。表明方法重复性良好,结果见表1。
2.2.8 加样回收试验:精密称取 40mg滴丸粉末 3份,分别
加入对照品,按照“供试品溶液的制备”方法制备供试液,显
色,测定吸光值。结果:加样回收率平均为 99.68%,RSD=
1.2%,n=6。结果见表2。
·药物研究·
满山红滴丸质量标准的建立
魏东光 赵承孝 李青山
基金项目:山西省科技攻关基金资助项目(2006031201-01)
作者单位:030001太原,山西省人民医院呼吸科(魏东光);山西
医科大学药学院(赵承孝、李青山)
表1 重复性试验结果
项目 称量(mg) A值 含量(%)
1 80.1 0.330 14.33
2 80.1 0.324 14.07
3 80.0 0.320 13.92
4 79.9 0.317 13.80
5 80.0 0.328 14.26
6 79.9 0.319 13.89
RSD(%) 1.3
表2 加样回收率试验结果
称取量
mg
原有量
mg
加入量
mg
总黄酮量
mg
测得量
mg
回收率
%
RSD
%
40.0 5.46 5.2 10.66 11.20 105.0
1.2
40.2 5.49 5.5 10.99 11.01 100.4
40.1 5.47 5.5 10.97 10.82 98.6
40.1 5.47 5.4 10.87 10.79 99.3
40.2 5.49 5.5 10.99 10.58 98.7
40.0 5.46 5.3 10.76 10.91 101.4
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中国药物与临床2008年8月第8卷第8期ChineseRemedies&Clinics,August2008,Vol.8,No.8
2.2.9 样品含量测定:取三批满山红滴丸 (含量分别为
14.0%,14.1%,13.9%),依法测定。满山红滴丸中总黄酮平均
含量为14.0%,三批样品中总黄酮含量稳定,RSD为0.54%。
3 结 论
对满山红滴丸的质量控制研究表明,各项均符合药典要
求,为新药质量标准的建立提供了科学依据。
参 考 文 献
1 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部).北京:化学工业
出版社,2005.
2 曹美云,陈斌,曹明成.灯盏花素滴丸质量标准研究.安徽中医
学院学报,2004,10(5):39.
(收稿日期:2008-04-28)
芩连颗粒剂由黄芩、连翘、黄连等 6味中药组成的复方
制剂,是由 2005年版《中国药典》收载的芩连片经改变剂型
而制成的颗粒剂。具有清热解毒、消肿止痛之功效。临床主要
用于脏腑蕴热,头痛目赤,口鼻生疮,热痢腹痛,湿热带下,疮
疖肿痛等症[1]。本方中黄芩为君药,其主要有效成分为黄芩
苷,为有效控制该制剂质量,笔者采用高效液相色谱法测定
芩连颗粒剂中黄芩苷的含量。结果表明,该方法简便,灵敏度
高,重现性好。结果准确,现报告如下。
1 仪器与试药
1.1 仪器:1100高效液相色谱(HPLC)仪,包括 1100HPLC工
作站、G1311Aquat泵、G1314A紫外检测器 (美国 Agilent公
司);AB204—N电子分析天平[梅特勒—托利多仪器(上海)
有限公司];CQ—250型超声波清洗器(上海必能信超声有限
公司)。
1.2 试药:黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号:
0715—200212);芩连颗粒(本院制剂,批号:061122,061208,
061218);甲醇 (色谱醇,上海生生化工助剂厂,批号:
030516);水为纯化水;试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:AichromBond—1C18(5μm,4.6×250mm);流动
相:甲醇—水—冰醋酸(50∶49∶1);检测波长:277nm;灵敏度:
0.1AUFS;流速:1.0ml/min;柱温:25℃;理论塔板数按黄芩苷
峰计算,不应低于3000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的黄芩苷对照品适量,加 70%甲醇
制成每1ml含50μg的溶液,即得。
2.3 样品溶液与阴性对照液的制备
精密称取芩连颗粒剂 1.0g(含黄芩苷约为 5mg),置 100
ml量瓶中,加 70%甲醇 80ml,超声处理(功率 220W,频率
33kHz)30min,放冷。加70%甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤
液即得样品溶液;另按处方工艺制备不含黄芩的阴性样品,
按样品溶液制备方法制成阴性样品溶液。
2.4 系统适应性试验
分别取黄芩苷对照品溶液,样品溶液和阴性对照品溶
液,各进样10μl,依法测定。结果表明,阴性对照品未呈现与
对照品保留时间相同的色谱峰,对测定无干扰。
2.5 样品含量测定
2.5.1 标准曲线的绘制:精密称取干燥至恒质量的黄芩苷对
照品 10.2mg,置 50ml容量瓶中,加 70%甲醇溶解并定容备
用。再分别精密吸取 0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml置于 10ml
容量瓶中,用 70%甲醇稀释并定容。分别精密量取以上 6种
浓度溶液10μl注入高效液相色谱仪进行测定。以峰面积比
值(A)与浓度(C)进行线性回归。得回归方程为:A=-14.69+
28.54C(r=0.9999)。结果表明,黄芩苷进样量在 10.2~102.0
μg/ml范围内,峰面积和进样量具有良好的线性关系。
2.5.2 稳定性试验:精密吸取同一样品溶液 10μl,分别于 0,
1、2、4、8、12h进样,并计算黄芩苷含量。结果 RSD为 1.35%
(n=6),表明样品溶液在12h内稳定性良好。
2.5.3 精密度试验:取“2.2”项下对照品溶液,重复进样 5次,
依法测定峰面积,结果RSD为0.78%(n=5)。表明仪器精密度
良好。
2.5.4 重现性试验:取同一样品(批号:061208),按“2.3”项下
方法操作,平行 5份,依法测定黄芩苷含量,结果测得黄芩苷
平均含量为5.06mg/g,RSD为1.12%。表明方法重现性良好。
2.5.5 加样回收率试验:精密称取已知含量的芩连颗粒剂(含
量为5.06mg/g)1.0g,按“2.3”项下方法配制样品溶液。分成 9
份,每 3份为一组,分别加入黄芩苷适量,按“2.5.6”项下方法
操作,计算回收率,结果详见表1。
2.5.6 样品含量测定:精密称取 3批芩连颗粒剂样品,按
“2.3”项下方法制备样品溶液,分别进样 10μl,按上述色谱条
件测定,按外标法以峰面积计算样品中黄芩苷含量,结果:批
号 061122为 5.04μg/g,批号 061208为 5.01μg/g,批号
061218为5.06μg/g。
3 讨 论
黄芩药材或含黄芩的复方制剂,以黄芩中有效成分黄芩
苷为质量控制标准,采用HPLC测定含量的文献已有报道[1-3]。
高效液相色谱法测定芩连颗粒中黄芩苷的含量
王 薇 覃 贝
作者单位:430070广州军区武汉总医院药剂科
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