全 文 ：— 17 —现代中药研究与实践2014年第28卷第1期Chin Med J Res Prac,2014 Feb.Vol.28 No.1
收稿日期：2013-09-18
基金项目：科技部2010年度科技型中小企业技术创新基金(10C26214204534)
地道北柴胡规范化种植。
作者简介：蔡华（1965—），女，本科，副主任药师；研究方向：医院
药学；Tel：0719-8801197，E-mail：56335481@qq.com。
*通讯作者：杜士明（1964—），男，博士，主任药师；研究方向：中药
资源及其品质评价；Tel：0719-8801163，E-mail：dsmch@
sina.com。
鄂西北地区竹叶柴胡不同采收期柴胡皂苷
A、D含量动态积累研究
蔡　华 1 ，杜士明 * ，叶　方 1，马东明 2，王　刚 1，杜　婷 1
(1 湖北医药学院附属太和医院，湖北 十堰 442000; 2 湖北医药学院，湖北 十堰 442000)
摘　要：目的　以鄂西北地区竹叶柴胡为样本，研究柴胡皂苷 a、d的动态变化规律，探讨本地区竹叶
柴胡的最佳采收期。方法　采用高效液相色谱法，以Waters Atlantis T3 色谱柱、乙腈 -水为流动相进行梯
度洗脱，流速 0.8ml·min-1，检测波长为 210nm。结果　不同采收期竹叶柴胡中的柴胡皂苷 a、d 含量具有
明显的差异。7月底柴胡皂苷 a、d的含量最高，到 11 月底最低。结论　初步确定了鄂西北地区竹叶柴胡的
最适采收期，为柴胡药材的采收及生产提供了一定的科学依据。
关键词：竹叶柴胡；柴胡皂苷；动态变化
中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：1673-6427(2014)01-0017-03
Study on Dynamic Accumulation of Saikosaponin A,D from Bupleurum marginatum in
Various Collecting Periods in Northwest of Hubei
CAI Hua1, DU Shi-ming1*,YE Fang1, MA Dong-ming2, WANG Gang1, DU Ting1
(1.Department of Pharmacy, Taihe Hospital of Hubei University of Medicine, Shiyan 442000,China 2. Pharmacy
College of Hubei University of Medicine, Shiyan 442000, China)
Abstract: Objective To study the dynamic change law of saikosaponin a,d from Bupleurum marginatum in
northwest of Hubei province, and to explore the optimal harvest period of Bupleurum marginatum. Methods The
experiment determined the content of saikosaponin in Bupleurum by HPLC.The chromatographic separation was
performed on Waters Atlantis T3(3μm, 150mm×4.6mm) column and the mobile phase consisting of acetonitrile-
water in gradient elution. The fl ow rate was 0.8ml·min-1,and the detection wavelength was 210nm. Results There
are obvious differences among the contents of saikosaponin a,d in various collecting periods sample, and it was
the highest in July, the lowest in November. Conclusion The optimal harvest period of Bupleurum marginatum
in northwest of Hubei is preliminary identifi ed, which can provide scientifi c basis for crude drug production and
processing.
Key words: Bupleurum marginatum;saikosaponins;dynamic accumulation.
竹叶柴胡BupLeurum marginatum WaLL.ex DC. 是
我国药材市场上三大柴胡来源之一，虽然《中国药
典》收载北柴胡BupLeurum chinese DC. 或狭叶柴胡
BupLeurum scorzonerifoLium wiLLd. 的干燥根作为正品
柴胡 [1]，但竹叶柴胡也在我国的云南、贵州、四川北
部、陕西南部、湖北等多个地区的临床广泛使用。资
源调查结果显示鄂西北地区称为“北柴胡”的柴胡药
材实际均为竹叶柴胡，并且在国内外市场享有较好的
声誉 [2]。随着我国经济的持续发展，人们的健康意识
不断提高，医药需求总量也是不断增加，野生柴胡资
源急骤下降，为了缓解供需矛盾，即能科学地保护柴
胡野生资源，又能保证临床应用，发展 GAP 种植是
切实可行的方法。科学合理的采收期是保证中药材质
量的关键步骤。柴胡皂苷 a（SSa）、柴胡皂苷 d（SSd）
的含量是《中国药典》规定的控制柴胡药材质量的指
标性物质，通过考察其含量变化可以为本地区柴胡药
材的采收时间提供理论基础。
1　仪器与试药
戴安 UltiMateTM3000 型（美国戴安公司）高效
液相色谱仪，包括四元梯度泵、自动进样器、柱温
DOI:10.13728/j.1673-6427.2014.01.009
— 18 — 现代中药研究与实践2014年第28卷第1期Chin Med J Res Prac,2014 Feb.Vol.28 No.1
箱、紫外检测器和 chromeleon 软件数据处理系统；
AUW120D 型电子天平（岛津公司）；CQX25-06 型超
声波震荡器 ( 上海必能信超声有限公司 )。
SSa 对照品（中国药品生物制品检定所提供，批
号：110777-200406）；SSd 对照品（中国药品生物制
品检定所提供，批号：110778-200505）；柴胡样本采
自湖北房县 GAP 种植基地，从 2012 年 5 月至 11 月
按期采集，结果见表 1。经湖北中医药大学中药资源
和中药复方教育部重点实验室陈科力教授鉴定为竹
叶柴胡Bupleurum marginatum WaLL.ex DC.。药材日
光下晒干后，4℃低温密闭保存，测定前粉碎过 4号
筛，备用；乙腈、甲醇为色谱纯；水为自制超纯水，
其他试剂均为分析纯。
表 1不同采收期柴胡皂苷 a、d含量
Tab. 1 The content of saikosaponin a,d in various collecting periods
样品编号 生长方式 采集时间 SSa% SSd%
1 人工种植 2012 年 5 月 30 日 0.3048 0.1784
2 人工种植 2012 年 7 月 1 日 0.3181 0.2454
3 人工种植 2012 年 7 月 31 日 0.4324 0.3276
4 人工种植 2012 年 8 月 30 日 0.3518 0.2572
5 人工种植 2012 年 10 月 7 日 0.3902 0.1713
6 人工种植 2012 年 10 月 30 日 0.3731 0.1425
7 人工种植 2012 年 11 月 30 日 0.1528 0.1348
2　方法与结果
2.1　色谱条件 Waters AtlantisT3 色谱柱（3μm，
150mm×4.6mm），预柱 (10×4.6mm) ；检测波长：
210nm ；柱温：30℃；以乙腈为流动相 A，以水为流
动相 B，梯度洗脱：0~50min 为 25~90%A，50~55min
为 90%A；流速：0.8mL·min-1 ；进样量 10μL。
2.2　对照品溶液的制备
精密称取 SSa 和 SSd 适量，加甲醇制成含 SSa、
SSd 0.48mg·mL-1 的溶液，摇匀，0.45μm 滤膜滤过
即得对照品溶液。
2.3　供试品溶液的制备
精密称取柴胡粉末 0.5g，置具塞锥形瓶中，加入
5%浓氨试液的甲醇溶液 25 mL，密塞，30℃水温超
声处理（功率 200W，频率 40kHz）30 min，滤过，
用甲醇 20 mL 分二次洗涤容器及药渣，洗液与滤液合
并，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至 5mL
量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，0.45μm滤过，取续
滤液，即得。
2.4　线性关系考察
在上述色谱条件下，取“2.2”项下混合对照
品溶液分别自动进样 2.0，4.0，8.0，10.0，12.0，
16.0，20.0μL，测定峰面积。以柴胡皂苷对照品溶
液进样量 X（μg）为横坐标，以峰面积 Y 为纵坐
标，绘制标准曲线，结果 SSa、d的回归方程分别为：
ySSa= 6.566 3x-0.001 5（R2= 0.999 1），ySSd=7.983 0x +
0.298 1（R2= 0.999 5）。表明 SSa、SSd 在 0.960~9.600μg
范围内呈良好的线性关系。
2.5　精密度试验
取对照品溶液 10μL 连续自动进样 6 次，测定
峰面积，结果RSD 为 0.82%，表明仪器精密度良好。
2.6　重复性试验
取 2 号样品 6 份，按“2.9”项下方法操作，计
算含量和RSD。结果SSa和SSd 的RSD分别为1.36%、
1.09%，表明方法有较好的重现性。
2.7　稳定性试验
取 2号样品溶液在 0，2，4，8，12，24h 分别进
样 10μL，依法测定，结果 SSa 和 SSd 的RSD 分别
为 1.32%、0. 99%，表明样品供试品溶液在 24h 内检
测对结果无影响，稳定性良好。
2.8　加样回收率试验
精密称取已知含量的样品（2号样）6份，每份
0.5g，精密加入 SSa 和 SSd 对照品适量，按“2.3”
项下方法制备，进行加样回收率试验，测定含量，
计算回收率，结果 SSa、SSd 的平均回收率分别为
96.96%、97.42%，RSD 分别为 1.66%、1.36%，结果
见表 2。
表 2 柴胡皂苷 a、d加样回收率
Tab. 2 Results of recovery test of saikosaponin
药材量
（g）
皂苷含
量（mg）
加样量
（mg）
测得量
（mg）
回收
率%
平均回
收率%
RSD%
SSa 0.5095 1.62 0.96 2.54 95.76 96.96 1.66
0.5105 1.62 0.96 2.58 99.59
0.5060 1.61 0.96 2.53 95.88
0.5072 1.61 0.96 2.55 97.56
0.5014 1.59 0.96 2.51 95.32
0.5007 1.59 0.96 2.53 97.63
SSd 0.5095 1.25 0.96 2.19 97.88 97.42 1.36%
0.5105 1.25 0.96 2.21 99.71
0.5060 1.24 0.96 2.17 96.70
0.5072 1.24 0.96 2.18 97.43
0.5014 1.23 0.96 2.15 95.79
0.5007 1.23 0.96 2.16 97.01
2.9　样品含量测定
分别取“2.2”项下对照品溶液和“2.3”项下供
试品溶液按上述色谱条件测定，以外标法计算样品中
SSa、SSd 的含量，结果见表 1，对照品和样品色谱图
见图 1。
— 19 —现代中药研究与实践2014年第28卷第1期Chin Med J Res Prac,2014 Feb.Vol.28 No.1
A
B
图 1 柴胡皂苷的HPLC色谱图 A. 柴胡皂苷对照品 B. 柴胡样品
Fig.1　HPLC chromatogram of saikosaponin
A. standard substance　B.Bupleurum samples
2.10　柴胡皂苷 a、d含量动态积累规律结果分析
根据含量测定结果，结合采收时间绘制柴胡皂苷
a、d 含量变化曲线图（图 2）。由图可知，SSa、SSd
的含量从 5月开始逐渐上升，7月含量最高，其后开
始下降，SSa 在 8、9、10 月的含量基本稳定，但在
种子成熟，地上部分枯萎后的 11 月含量急骤下降；
SSd 则在 7月后的 8、9月较快下降，其后缓慢下降，
到 11 月后进入 12 月 SSa、SSd 的含量下均降至最低，
总含量低于药典规定的 0.3%。
图 2　不同采收期柴胡皂苷 a、d含量动态变化
Fig. 2 Dynamic change of saikosaponin a,d from in various collecting
periods
3　讨论
3.1　《中国药典》规定柴胡药材的采收期为春、秋二
季采挖，但是由于季节的变换，植物生长发育也发生
周期性变化，药材中的各种化学成分也会发生变化。
从分析结果看，5月以后柴胡从休眠期进入生长发育
的旺盛期，SSa、SSd 含量逐渐升高，到 7 月柴胡开
始进入花果期含量达到最高，随着果实逐渐成熟可能
地上部分需要更多的营养支持，所以地下部分的皂苷
含量开始下降。进入 10 月种子成熟，收获种子后，
由于此时鄂西北地区气候还比较温暧，又从柴胡基
部长出新的叶子，导致 SSa、SSd 的含量进一步降低，
到 11 月底进入冬季，植物进入休眠期，含量最低。
由此说明，单从 SSa、SSd 的含量分析，柴胡的采收
期不应定为春季，如果不希望收获种子，可以考虑在
进入花果期采收。
3.2　根据观察，不同种植时间柴胡的生命周期有较
大差别。从湖北房县柴胡种植基地和湖北医药学院中
草药“百草园”里种植的柴胡看，春、秋季种植的柴
胡生命周期相差较大，较早的 6月开花，晚的 12 月
还在继续开花，所以进一步考察最佳采收期应结合植
物的生命周期与时间综合考察。另外还将继续分析其
他成分的含量变化趋势，但由于准备不足，本次考察
没有对不同采收期的柴胡产量进行比较，在接下来的
方案中会进一步综合考察化学成分含量、产量和采收
时间的关系，全面分析合理的采收时间。
参考文献
[1]　国家药典委员会 . 中国药典（一部）[S]. 北京 : 中国医药科技出版
社 ,2010,263-264
[2]　杜士明 , 叶　方 , 杨光义 , 等 . 鄂西北地区柴胡资源调查研究 [J]. 中药
材 ,2012,35(6):866-869