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竹叶柴胡地上部分总黄酮含量测定



全 文 :2  结果
不同采收期两种前胡的总香豆素含量详列于表
1、表 2。通过 SPSS统计软件分析 ,两种前胡的总香
豆素 9 ~ 11月一直保持上升趋势 ,分别于 11月中旬
和 11月下旬 ,达到峰值。此后地上部分逐渐枯死 ,
总香豆素的含量也缓慢下降。此外 ,本测定还显示:
紫花前胡所含总香豆素明显高于白花前胡 ,与文献
报道〔1〕的结论一致 。这可能是近代以来紫花前胡
逐渐取代白花前胡成为前胡主流品的重要原因 。
3  讨论
3.1  关于前胡总香豆素的分析 ,文献所述各种方
法均有优劣 〔1 ~ 6〕。HPLC法与 GC法针对性强 ,但费
用较高且前胡香豆素成分复杂难以逐个分离。紫外
比色法费用低 ,操作简便 ,适合于资源考查时大量的
样品检测。本试验用乙醇为提取溶媒进行紫外光谱
扫描 ,均在 322 nm处有最大吸收波长 ,与香豆素共
同的母核伞形花内酯(7-OH香豆素)的最大吸收峰
一致 ,可以用来检测前胡总香豆素的含量 ,简便地考
察样本的动态变化。
3.2  关于栽培白花前胡与紫花前胡的采收期 ,国
家药典要求冬至春季未抽苔前采挖 。本测定表明 ,
前胡香豆素含量一直随前胡生长而增长 。在地上部
分枯死后 ,前胡香豆素含量缓慢下降 ,但仍维持较高
的水平。所以从秋季以后 11月 ~ 12月均可采收 ,
以 11月为最佳采收期。
参 考 文 献
1 彭维 ,等 .前胡中总香豆素的含量测定 .中药材 , 1997,
20(1)∶25
2 李意 ,等 .RP-HPLC法研究前胡茎叶中的有效成分及其
含量 .中草药 , 1995, 26(1)∶11
3 李意 ,等 .RP-HPLC分析白花前胡根和茎叶中花椒毒素
的含量 .中国药学杂志 , 1995, 30(10)∶622
4 孔令义 ,等 .RP-HPLC法分析白花前胡属中 Pd-Ia和紫
花前胡中 Pd-C-I的含量 .中国医科大学学报 , 1996, 27
(4)∶215
5 徐勤 ,等 .高效液相色谱法测定前胡属植物中紫花前胡
苷的含量 .中国中药杂志 , 2000, 25(12)∶731
6 徐勤 ,等.GC法测定前胡中 Pd-Ia和 Pd-Ⅱ的含量.中国
药学杂志 , 2001, 36(2)∶123
(2004-11-12收稿
2005-03-04修回)
·资源·
竹叶柴胡地上部分总黄酮含量测定
汪 琼 史云云 徐增菜 王年鹤*
(江苏省中国科学院植物研究所南京中山植物园 ,南京 210014)
  摘要 目的:探讨竹叶柴胡地上部分总黄酮含量及最佳提取方法。方法:采用正交试验法 , 考察提取温度 、提
取时间 、乙醇浓度及提取次数对提取液中总黄酮含量的影响 , 确定最佳提取条件。结果:影响竹叶柴胡总黄酮提取
因素为提取次数 >提取温度 >提取时间 >乙醇浓度。结论:竹叶柴胡总黄酮最佳提取条件为:50%乙醇 、 100℃水
浴回流 、提取 3次 、每次 2.0 h, 其地上部分总黄酮含量高于同属其它种 ,颇有开发前景。
关键词 竹叶柴胡;地上部分;总黄酮
  柴胡是最常用中药之一 ,历来在中药中占有很
重要的地位 。从古以来 ,中国大部分地区药用的柴
胡以伞形科的北柴胡 Bupleurumchinese和南柴胡 B.
scorzonerifloium为主 ,而西南地区则用竹叶柴胡 B.
marginatum。前二种用的是根 ,后一种通常使用全
草 。竹叶柴胡主要分布于四川北部 、陕西南部 、湖北
西部以及云南 、贵州等省 ,为目前市场上药材柴胡的
三大主要来源之一〔1〕。
柴胡根的主要成份为柴胡皂苷 ,还含有植物甾
醇 、侧金盏花醇 ,以 及少量挥发油 、多糖等;地上部
分主要含黄酮类成分。已往对柴胡的研究多集中于
根及根茎部分 ,临床应用的多为复方冲剂或挥发油
注射液。以地上部分为主的竹叶柴胡经药理实验证
明也具有解热 、镇痛 、抗病毒和保肝作用 〔2〕。
竹叶柴胡在我国西南地区分布广泛 ,在栽培条
件下具有生长旺盛 、产量高的优点 ,值得大力开发的
药用植物资源 。北柴胡等的黄酮类含量虽有过报
道〔3、4〕 ,但测定方法沿用了其他植物的黄酮类成分
·453·中药材第 28卷第 6期 2005年 6月
测定条件。笔者经实验证实文献报道的方法并非最
佳 ,故采用正交试验对竹叶柴胡地上部分总黄酮含
量测定进行了方法学研究 ,为进一步开发利用竹叶
柴胡这一丰富的资源提供依据 。
1  材料与仪器
竹叶柴胡为本所引种栽培 ,原产地陕西丹凤 ,经
江苏省中国科学院植物研究所潘泽惠研究员鉴定为
BupleurummarginatumWal.exDC.,凭证标本存本
所标本馆(JSBI)。试剂均为国产分析纯;Shimadzu
UV-2501型紫外-可见分光光度计。
2  方法与结果
2.1  总黄酮定性分析 常法提取竹叶柴胡总黄
酮 ,行聚酰胺薄层层析 。展开剂:正丁醇-醋酸 -水(6
∶1∶1)的上层 ,对照品:芦丁 。喷 3%三氯化铝后于
紫外下检测荧光 ,证实芦丁为竹叶柴胡总黄酮中的
主要成分之一。
2.2  对照品溶液制备 精密称取干燥至恒重的无
水芦丁 10mg置 100 ml容量瓶中 ,加乙醇适量使之
溶解 ,用乙醇稀释至刻度 ,摇匀 ,即得芦丁对照液贮
备液。
2.3  标准曲线制备 取芦丁对照品溶液 0、0.5、1、
1.5、2、2.5 ml,分别置 10 ml容量瓶中 ,加 5%亚硝
酸钠溶液 0.3 ml,摇匀 ,放置 6 min,加 10%硝酸铝
溶液 0.3 ml,摇匀 ,放置 6 min,加 1mol/l氢氧化钠
4.0ml,用 30%乙醇释至刻度 ,摇匀 ,放置 10 min后
于 510nm处测吸光度。以浓度 C为纵坐标 ,吸光度
值 A为横坐标进行线性回归 ,得方程:C=85.87A-
0.370, r=0.00019。线性范围:0.2 ~ 1.8 mg/ml。
2.4  样品提取与测定 称取竹叶柴胡地上部分粗
粉 5.000 g,按表 1条件 ,采用不同浓度的 12倍量乙
醇在水浴中回流提取数次 ,合并提液 ,过滤 ,用旋转
蒸发仪减压浓缩至近干 ,加少量蒸馏水溶解后 ,以正
丁醇萃取至水相无黄酮反应 ,减压回收正丁醇至近
干 ,以 30%乙醇定容于 100 ml容量瓶中 ,过滤 。精
密吸取续滤液 1 ml定容至 25 ml,得样品液 。吸取
各种品液 5 ml,按 2.2项下方法处理 ,测定吸光度
值 ,代入方程 ,计算总黄酮含量 。
 表 1  因素水平
水平 A提取温度(℃) B提取时间(h) C提取次数(t) D乙醇浓度(%)
1 55 1.0 1 30
2 70 1.5 2 50
3 85 2.0 3 70
4 100 2.5 4 90
2.5 正交试验设计及结果 按 L16(45)正交表对
竹叶柴胡提取并测定 ,结果(见表 2):提取次数(C)
对总黄酮提取影响最大 ,提取温度(A)、提取时间
(B)次之 ,乙醇浓度(D)影响最小。经方差分析(见
表 3):最优水平组合为 A4B3C3D2 ,即以 50%乙醇 、
100℃水浴 、回流提取 3次 、每次 2.0h。
 表 2  正交设计及试验结果
实验号 A B C D 含量(%)
1 1 1 1 1 2.86
2 1 2 2 2 4.79
3 1 3 3 3 5.76
4 1 4 4 4 3.40
5 2 1 2 3 4.87
6 2 2 1 4 2.97
7 2 3 4 1 5.81
8 2 4 3 2 5.05
9 3 1 3 4 5.91
10 3 2 4 3 3.81
11 3 3 1 2 4.63
12 3 4 2 1 5.88
13 4 1 4 2 5.42
14 4 2 3 1 5.53
15 4 3 2 4 5.52
16 4 4 1 3 4.96
Ⅰ 16.81 19.06 15.42 17.24
Ⅱ 18.70 17.10 21.06 21.47
Ⅲ 20.23 21.72 22.25 20.03
Ⅳ 21.43 19.29 18.44 18.43
R 1.26 1.16 1.71 1.06
 表 3  方差分析结果
因素 偏差平均和 SS 自由度df 均方 F Sig.
提取温度 2.990 3 0.997 3.719 0.155
提取时间 2.688 3 0.896 3.344 0.174
提取次数 6.898 3 2.299 8.579 0.055
乙醇浓度 2.561 3 0.854 3.184 0.183
Error 0.804 3 0.268
  RSquared=0.950(AdjustedRSquared=0.748)
2.6 样品回收率 精密称取样品 5共 4份 ,其中 3
份加入一定量的标准品芦丁 ,按上述方法提取后测
定含量 ,求算回收率为 98.6%(RSD=0.84%)。
3 讨论
·454· 中药材第 28卷第 6期 2005年 6月
3.1  以总黄酮含量为指标 ,用乙醇提取竹叶柴胡
有利于黄酮类化合物的溶出 ,提高溶剂乙醇的浓度
及水浴温度 、提取次数 ,可加快竹叶柴胡中总黄酮的
溶解扩散速度 ,使溶出量增加。但乙醇浓度 >50%,
溶出量下降 。
3.2 结合正交设计优选的最佳因素水平为 50%乙
醇溶剂 , 100℃水浴回流提取 3次 ,每次 2.0h。正交
统计结果分析 ,乙醇浓度对总黄酮含量影响较小 ,从
生产成本 、溶剂回收等因素考虑 ,提取与测定中采用
50%乙醇浓度为佳 。
3.3  柴胡历来在中药中占有很重要的地位。近年
来 ,随着国内外对柴胡研究的深入 ,柴胡的应用更加
广泛。目前市场需求量已超过每年一万吨 ,预计还
将会逐年增大 ,虽药典规定柴胡药用为地下部分 ,但
各地入药部位历来有所不同 ,有用根者 ,有用全草
者 。本测定结果:竹叶柴胡总黄酮含量明显高于南
柴胡 、北柴胡 、银州柴胡 、秦岭柴胡 、烟台柴胡 〔3、4〕。
这充分证明历来柴胡以全株入药确有其科学之处。
3.4  柴胡地上部分的主要活性成分为黄酮类 。上
世纪 80年代本所以北柴胡的变型烟台柴胡 B.
chinensef.vanheurcki的地上部分总黄酮为原料开
发出治疗小儿肺炎的新药 “柴酮片”,由金陵制药厂
生产上市 ,疗效甚好 。但根据药典规定 ,其原料必须
采用烟台柴胡 ,由于烟台柴胡资源量太小 ,影响了这
一药物的生产 。竹叶柴胡分布广泛 ,易栽培 ,是一极
为丰富的资源 ,有待继续对其地上部分黄酮类成分
作进一步研究 ,以扩大药源。
  *通讯联系人
参 考 文 献
1 中药辞海编委会 .中药辞海 .北京:中国医药科技出版
社 , 1996∶2035
2 冯煦 ,等 .北柴胡茎叶总黄酮抗流感病毒作用的研究 .
植物资源与环境学报 , 2002, 11(4)∶15
3 冯煦 ,等 .北柴胡与烟台柴胡黄酮成分的比较研究 .中
草药 , 1990, 21(8)∶5
4 韩强 ,等 .四种柴胡地上部分黄酮成分比较 .西北药学
杂志 , 1996, 8(4)∶154
(2004-12-06收稿
2005-01-03修回)
·鉴别·
蛇葡萄的性状与显微鉴别
宋 波 解树彬 宋文耆
(吉林省白山市药品检验所 ,吉林白山 134300)
  摘要 本文对蛇葡萄 Ampelopsisbrevipedunculata的根 、茎与叶组织的显微特征以及根 、茎的性状进行了鉴别研
究。
关键词 蛇葡萄;性状与显微特征
  蛇葡萄 Ampelopsisbrevipedunculata(Maxim.)
Trautv.为葡萄科蛇葡萄属植物 ,别名为狗葡萄 、蛇
白 、过山龙 、见肿消等 ,民间常以根 、茎 、叶入药 。
其茎 、叶有利尿 、消炎 、止血的功效 ,可治疗慢性肾
炎 、肝炎 、小便涩痛 、胃热 、呕吐 、风疹 、疮毒 、外伤出
血等;根有清热解毒 、祛除风湿 、散瘀破结的功效 ,用
以治疗肺痈 、肠痈 、瘰疬 、风湿 、肿瘤等 〔1〕。近几年
来常见到蛇葡萄属植物的提取物有抗肿瘤作用 〔2〕
以及体内抗氧化和减少组织损伤作用的系列报
导 〔3、 4〕。为进一步有效开发利用这一资源 ,本文对
地产蛇葡萄的根 、茎 、叶进行了性状与显微特征的鉴
别研究 。
1 实验材料
2003年 7月采集于吉林省白山市八道江区 ,由
作者鉴定为蛇葡萄 Ampelopsisbrevipedunculata(Max-
im.)Trautv.的全株 。
2 根与茎性状特征
2.1 根性状 呈不规则圆柱形 ,常多条根簇生在
一起 ,不规则的向外延伸 ,或末端呈截断状 。直径
0.5 ~ 1.5 cm,长短不定。表面灰棕色至深棕色 ,有
众多未脱落或将脱落的栓皮附着 ,呈翘起状。表面
有纵皱纹及横裂纹 ,横裂纹常断裂至木部。皮部厚 ,
有时木栓层及皮部全部断裂而露出木部 ,木部黄白
色 ,表面有纵纹。质坚硬难折断 ,断面不整齐 ,类白
·455·中药材第 28卷第 6期 2005年 6月