全 文 ：果 3 种细辛挥发性成分在数量和含有量上各有差
异，此外 3 种细辛均含有独特的挥发性成分［11-13］。
全面评价药材质量需综合多种挥发性成分及非挥发
性成分［14］。从临床用药安全考虑，建议厂家应对
细辛药材进行用药部位筛选和马兜铃酸的限量检
查，既要保证药效，又要保证毒性成分的用量在允
许范围内。
参考文献:
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HPLC法测定不同产地竹叶柴胡中柴胡皂苷 a、d
王建科， 李 玮， 林 昶， 陈敏红
(贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002)
收稿日期:2013-10-12
基金项目:贵州省科学技术厅“贵州省中药、民族药炮制技术研究平台建设”(黔科合社字 ［2009］ 5001 号)
作者简介:王建科 (1966—) ，男，高级实验师，主要从事中药炮制研究。Tel: (0851)5652239，E-mail:wjk-66@ 163． com
摘要:目的 建立 HPLC法同时测定竹叶柴胡中柴胡皂苷 a和 d并对不同产地的品种进行比较。方法 Agilent C18色谱
柱 (150 mm ×4. 6 mm，5 μm) ;流动相为乙腈-水;检测波长 204 nm;柱温 40 ℃;体积流量 1. 0 mL /min;进样量
10 μL。结果 竹叶柴胡中柴胡皂苷 a、d 的进样量分别在 0. 147 ～ 4. 41 μg (r = 0. 999 9)、0. 091 ～ 2. 73 μg (r =
0. 999 7)范围内与峰面积呈良好线性关系，加样回收率分别为 101. 6% (ＲSD为 2. 9%)、100. 4% (ＲSD 为 2. 3%)。
结论 对 10 个产地竹叶柴胡中柴胡皂苷 a的平均含有量为 0. 12%，柴胡皂苷 d为 0. 07%，其中以云南禄丰产的含有
量最高。
关键词:竹叶柴胡;柴胡皂苷 a;柴胡皂苷 d;高效液相色谱法
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2014)08-1715-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2014. 08. 033
Determination of saikoside a and saikoside b in Bupleurum marginatum from dif-
ferent growing areas by HPLC
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WANG Jian-ke， LI Wei， LIN Chang， CHEN Min-hong
(Guiyang College of TCM，Guiyang 550002，China)
ABSTＲACT:AIM To establish an HPLC method for determining saikoside a and saikoside b in Bupleurum
marginatum and to make a comparison of constituents in Buleurum marginatum from different growing areas．
METHODS Analysis was carried out on Agilent-C18 (150 mm ×4. 6 mm，5 μm)with mobile phase consisted of
acetonitrile-water． The detection wavelength was set at 204 nm ，40 ℃of the column temperature and 1. 0 mL /min
of flow rate，and 10 μL sample size were adopted． ＲESULTS A good linearity showed in the ranges of 0. 147 －
4. 41 μg (r = 0. 999 9)for saikoside a and 0. 091 － 2. 73 μg (r = 0. 999 7) for saikoside b，and their average re-
coveries were 101. 6% (ＲSD =2. 9%)and 100. 4% (ＲSD =2. 3%) ，respectively． CONCLUSION On aver-
age，0. 12% of saikoside a and 0. 07% of saikoside b in Bupleurum marginatum can be exploited from ten growing
areas，especially maximum contents from Lufeng County，Yunnan Province．
KEY WOＲDS:Bupleurum marginatum;saikoside a;saikoside b;HPLC
竹叶柴胡为伞形科植物膜缘柴胡 Bupleurum
marginatum Wall． ex． Dc． 的干燥根及全草［1］。性
苦、辛，微寒，具解表和里、升阳解郁之功效，用
于寒热往来，胸满，胁痛，口苦，疟疾，脱肛，中
气不足，月经不调等症［2］。分布于陕西、湖北、
四川、云南、贵州、湖南等省区，为常用中药柴胡
的三大来源之一［3］，西南地区将竹叶柴胡作为柴
胡使用［4］，且使用量大。柴胡皂苷具有抗炎、抗
病毒、抗肿瘤、调节内分泌及免疫系统等作用，国
内外学者把柴胡皂苷应用于肾病、肝纤维化、肿瘤
方面，取得了可喜的成就［5］。竹叶柴胡中含有皂
苷 (a、d、b2、b4)、柴胡色原酮 A，白花前胡丙
素，木糖醇等成分［6］。《中国药典》2010 年版收载
了柴胡和狭叶柴胡的柴胡皂苷 a、d 的定量测定方
法［7］，文献报道柴胡皂苷 a、d 的测定方法也较
多［8-15］，但采用这些方法均未得到竹叶柴胡中柴胡
皂苷 a、d的良好分离，同时有关竹叶柴胡中的柴
胡皂苷 a、d 的测定方法未见报道。因此，本研究
采用高效液相色谱法建立竹叶柴胡中柴胡皂苷 a、
d的定量测定方法，并对不同产地的竹叶柴胡中的
柴胡皂苷 a、d 进行测定，为建立竹叶柴胡的质量
标准提供参考。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 高效液相色谱仪 (LC-20AT、检测器
SPD-20A，日本岛津公司)、Agilent C18 色谱柱
(150 mm × 4. 6 mm，5 μm)、全自动电子天平
(AUW220D，苏州岛津公司)、超声波清洗器
(HS10260D，天津恒奥公司)、远红外快速干燥箱
(YHG-600-S-Ⅱ，上海贺德公司)。
1. 2 试剂 氨水、甲醇、无水乙醇为分析纯，乙
腈、甲醇为色谱纯，水为纯净水。
1. 3 对照品 柴胡皂苷 a (批号 110777-200507)、
柴胡皂苷 d (批号 110778-200506)对照品，均购
自中国药品生物制品检定所。
1. 4 药材 竹叶柴胡药材购自贵州兴义、四川绵
阳、重庆等地，经我院生药教研室魏升华副教授鉴
定为伞形科植物膜缘柴胡 Bupleurum marginatum
Wall． ex DC． 的干燥根及全草。本次研究的样品
均为全草。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件及系统适应性试验 Agilent C18色谱
柱 (150 mm × 4. 6 mm，5 μm) ;流动相为乙腈
(A)-水 (B) ，进行梯度洗脱 (0 ～ 2 min，70% ～
67%B;2 ～ 10 min，67% B;10 ～ 30 min，67% ～
64%B;30 ～ 63 min，64% ～ 60% B) ;检测波长
204 nm;柱温 40 ℃;体积流量 1. 0 mL /min;进样
量 10 μL。理论塔板数不低于 3000。对照品及样品
色谱图见图 1。
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取柴胡皂苷 a、d
对照品适量，加甲醇溶解，制成含柴胡皂苷 a、d
分别为 0. 294、0. 182 mg /mL的对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备 精密称取干燥至恒定质
量的竹叶柴胡样品粉末 (过 40 目筛)0. 5 g，加
8%氨水甲醇 25 mL，超声提取 60 min，过滤，残
渣用甲醇 20 mL 分 2 次洗涤，合并滤液，滤液于
60 ℃水浴上挥干，用色谱甲醇溶解并定容至 5 mL
量瓶中，用 0. 45 μm的微孔滤膜滤过，即得。
2. 4 线性关系考察 分别精密吸取柴胡皂苷 a、d
对 照 品 溶 液 0. 5、 2. 5、 5、 7. 5、 10、 12. 5、
15 μL，按“2. 1”项下色谱条件测定峰面积，分
别以柴胡皂苷 a、d 的进样量为横坐标，峰面积为
纵坐标绘制标准曲线，得柴胡皂苷 a线性回归方程
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1． 柴胡皂苷 a 2． 柴胡皂苷 d
1． saikoside a 2． saikoside d
图 1 对照品 (A)和供试品 (B)的液相色谱图
Fig. 1 HPLC chromatogram of reference substances (A)
and Bupleurum marginatum (B)
为 y = 453 980. 8x + 7 307. 75，r = 0. 999 9，表明柴
胡皂苷 a 的进样量在 0. 147 ～ 4. 41 μg 范围内与峰
面积呈良好的线性关系;得柴胡皂苷 d线性回归方
程为 y = 665 526x － 20 788，r = 0. 999 7，表明柴胡
皂苷 d的进样量在 0. 091 ～ 2. 73 μg 范围内与峰面
积呈良好的线性关系。
2. 5 精密度试验 精密称取干燥至恒定质量的贵
州兴义产竹叶柴胡炮制样品粉末 0. 5 g，按照
“2. 3”项下方法制备供试品溶液，按 “2. 1”项下
色谱条件连续进样 6 次。结果柴胡皂苷 a、d 峰面
积的 ＲSD分别为 2. 5%、2. 7%，表明仪器精密度
良好。
2. 6 稳定性试验 取干燥至恒定质量的贵州兴义
产竹叶柴胡炮制样品粉末约 0. 5 g，精密称定，按
照“2. 3”项下方法制备供试品溶液，按 “2. 1”
项下色谱条件分别在 0、2、4、6、8、10、12、24
h进行测定，结果柴胡皂苷 a、d 峰面积的 ＲSD 分
别为 2. 3%、2. 9%，表明供试品溶液于室温下 24
h内稳定性良好。
2. 7 重复性试验 取干燥至恒重的贵州兴义产竹
叶柴胡炮制样品粉末 6 份，每份约 0. 5 g，精密称
定，按照 “2. 3”项下方法制备供试品溶液，按
“2. 1”项下色谱条件进行测定，结果柴胡皂苷 a、
d的 ＲSD 分别为 2. 9%、2. 5%，表明方法重复性
良好。
2. 8 加样回收率试验 取已知含有量的贵州兴义
产竹叶柴胡炮制样品粉末 6 份，每份约 0. 25 g，精
密称定，分别精密加入柴胡皂苷 a、d对照品适量，
按照“2. 3”项下方法制备供试品溶液，按 “2. 1”
项下色谱条件进行测定。结果见表 1。
表 1 加样回收率试验测定结果 (n =6)
Tab. 1 Ｒesults of recovery tests (n =6)
称样量 /
g
样品中
量 /mg
加入量 /
mg
实测值 /
mg
回收率 /
%
平均回收
率 /%
(ＲSD /%)
柴胡皂苷 a
柴胡皂苷 d
0. 250 2 0. 497 1 0. 493 0 0. 990 4 100. 1
0. 250 0 0. 496 8 0. 493 0 0. 971 3 96. 3
0. 250 2 0. 497 1 0. 493 0 1. 003 5 102. 7
0. 250 2 0. 497 1 0. 493 0 1. 010 3 104. 1
0. 250 1 0. 496 9 0. 493 0 1. 006 8 103. 4
0. 250 0 0. 496 8 0. 493 0 1. 004 5 103. 0
0. 250 2 0. 305 0 0. 315 0 0. 624 4 101. 4
0. 250 0 0. 304 8 0. 315 0 0. 631 5 103. 7
0. 250 2 0. 305 0 0. 315 0 0. 621 5 100. 5
0. 250 2 0. 305 0 0. 315 0 0. 616 1 98. 8
0. 250 1 0. 304 9 0. 315 0 0. 610 7 97. 1
0. 250 0 0. 304 8 0. 315 0 0. 622 7 100. 9
101. 6
(2. 9)
100. 4
(2. 3)
2. 9 样品测定 按照 “2. 3”项下方法制备供试
品溶液，按 “2. 1”项下色谱条件分别对 10 个不
同产地的竹叶柴胡中柴胡皂苷 a、d 进行测定。结
果见表 2。
表 2 样品中柴胡皂苷 a和柴胡皂苷 d的测定结果 (n =3)
Tab. 2 Components of saikoside a and saikoside d in Bup-
leurum marginatum (n =3)
序号 产 地 柴胡皂苷 a /% 柴胡皂苷 d /%
1 四川绵阳 0. 04 0. 01
2 重庆 0. 10 0. 07
3 贵州兴义 0. 23 0. 14
4 贵州贵阳 0. 06 0. 02
5 云南禄丰 0. 28 0. 18
6 湖北武汉 0. 14 0. 06
7 陕西西安 0. 07 0. 03
8 四川彭州 0. 05 0. 03
9 云南云县 0. 17 0. 11
10 四川阿坝 0. 09 0. 02
平均值 0. 12 0. 07
3 讨论
实验分别对甲醇、乙醇、乙腈、5% 氨水-甲
醇、7%氨水-甲醇、9%氨水-甲醇进行提取溶剂考
察，结果以 7%氨水-甲醇提取时皂苷含有量最高，
因此在正交试验中，分别选用 6%氨水-甲醇、7%
氨水-甲醇、8%氨水-甲醇进行实验，由分析可得，
3 种提取溶剂没有差异性，因此最终优选出 8%氨
水-甲醇为最佳提取溶剂。实验对索氏提取法、回
流提取法、超声提取法进行提取方法的比较，由单
因素考察实验可得出，索氏提取 3 h 与超声提取
1 h或者回流 2 h 效果相同，而且 3 种提取方法没
有差异性，考虑到提取方法的方便性与实验操作的
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简单性，因此采用超声提取法进行提取。在正交试
验中，考察超声提取时间分别为 40、60、80 min，
由分析可得，三者之间没有明显的差异性，为了实
验的操作方便性，所以采用 60 min 为最佳提取时
间。由于柴胡皂苷 a、d 在提取过程中易受植物体
中酚类或酸性成分的影响，致使环氧醚键开环，转
化为柴胡皂苷 b1 及柴胡皂苷 b2，因而通常采用弱
碱性溶剂提取［16］。
通过对 10 个不同产地竹叶柴胡生品中柴胡皂
苷 a、d测定可以看出，柴胡皂苷 a 的平均含有量
为 0. 12%，柴胡皂苷 d 的平均含有量为 0. 07%，
其中云南两个产地竹叶柴胡含有量较高，尤以云南
禄丰产的含有量最高，而四川三个产地的竹叶柴胡
含有量相对较低，造成含有量差异的原因是否与生
长环境、气候、采收季节、加工方法等因素有关，
有待进一步研究。
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