全 文 ：说明:(1)每次实验用白芍 100 g、茵陈 50 g;药材检测，
白芍中芍药苷的含量为 1. 72 %。(2)K1、K2、K3 为以芍药苷
转移率为指标评判结果;KⅠKⅡKⅢ为以干浸膏得率为指标评
判结果。(3)芍药苷含量测定，色谱条件与系统适用性试验，
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙睛-水(15 ∶ 85)为流动
相;柱温 30℃;检测波长为 230 nm。理论板数按芍药苷峰计
算不得低于 2000。对照品溶液的制备:精密称取芍药苷对照
品适量，加稀乙醇溶解并稀释制成每 1 ml 含 50 μg 的溶液，
即得。供试品溶液的制备:精密量取药材取提液 1 ml，转移
至 5 ml容量瓶中并以流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜
(0. 45 μm)滤过，取续滤液，即得。
测定法，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 10
μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积以外标法计算芍
药苷的含量。
表 4 白芍、茵陈水提取工艺以芍药苷转移率为指标方差分析结果
方差来源 离差平方和 自由度 平均方差 F值 P值
SA 40. 9445 2 20. 4723 3. 7749
SB 22. 5291 2 11. 2646 2. 0775
SC 178. 4441 2 89. 2221 16. 4542 ＜ 0. 10
S 10. 8446 2 5. 4223
注:F1-0. 10(2，2)= 9 F1-0. 05(2，2)= 19 F1-0. 01(2，2)= 99
以芍药苷转移率为指标进行评判时，由表 3 中 K 值可
知，A2 ＞ A1 ＞ A3、B2 ＞ B1 ＞ B3、C1 ＞ C2 ＞ C3、D2 ＞ D3 ＞ D1，故
直观分析最佳工艺为 A2B2C1D2;表 4 方差分析结果表明:各
因素对实验结果的影响为 A 、B、D 无显著性差异，C 有显著
性差异(P ＜ 0. 1) ，且从 K 值可以看出，C1、C2、结果较为接
近，从工艺条件可以看出 A2B3C2D1 更符合工业化生产的要
求，因此从生产实际及经济效益等因素考虑，应选
择 A2B3C2D1
［3，4］。
表 5 白芍、茵陈水提取工艺以干浸膏得率为指标方差分析结果
方差来源 离差平方和 自由度 平均方差 F值 P值
SA 1. 8490 2 0. 9245 1. 6742
SD 6. 5578 2 3. 2789 5. 9379
SC 68. 3058 2 34. 1529 61. 8488 ＜ 0. 05
S 1. 1044 2 0. 5522
注:F1-0. 10(2，2)= 9 F1-0. 05(2，2)= 19 F1-0. 01(2，2)= 99
以干浸膏得率为指标进行评判时，由表 3 中 K 值可知，
A3 ＞ A1 ＞ A2、B1 ＞ B2 ＞ B3、C1 ＞ C2 ＞ C3、D1 ＞ D2 ＞ D3，故直观
分析最佳工艺为 A3 B1C1 D1;表 5 方差分析结果表明:各因素
对实验结果的影响为 A 、B、D 无显著性差异，C 有显著性差
异(P ＜ 0. 05) ，且从 K 值可以看出，A2、A3，B1、B2、B3，C1、C2
结果较为接近，从工艺条件可以看出 A2B3C2D1 更符合工业
化生产的要求，因此从生产实际及经济效益等因素考虑，应
选择 A2B3C2D1
［6-9］。
3 讨论与小结
3. 1 白芍、茵陈的最佳水提工艺为:药材加 15 倍量水浸泡 1
h后，煎煮 1 h，滤过，药渣再加 10 倍量水煎煮 1 h 的提取工
艺基本合理。
3. 2 通过正交筛选法确定复方五仁醇软胶囊中白芍、茵陈
药材的最佳提取工艺，为扩大生产提供必备的技术参数，可
以更好的保证生产出产品的可重复性、稳定性。
参考文献
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量的影响中国新药杂志，1999，9(10) :23-24．
独子藤有效成分抗癌活性研究
陈铭祥
【摘要】 目的 对独子藤的根和茎的提取物分别作抗癌活性研究。方法 采用 MTT法检测两种癌
细胞存活率或抑制率。结果 随着提取物浓度的增加，其抗癌效果越显著。结论 提取物中有可能含有抗
癌活性化合物，我们有必要从中分离出来，为深入认识和合理开发独子藤植物资源提供必要的前提。
【关键词】 独子藤;抗癌活性;活性化合物
作者单位:523808 广东医学院药学院
·811· 中国现代药物应用 2012 年 4 月第 6 卷第 7 期 Chin J Mod Drug Appl，Apr 2012，Vol． 6，No． 7
DOI:10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2012.07.015
卫矛科植物大多具有抗肿瘤、抗菌、免疫抑制、杀虫及细
胞毒活性，是寻找天然活性产物的重要来源［1］。独子藤是卫
矛科南蛇藤属常绿藤本植物，分布于广东、广西、海南、云南、
贵州及印度等地［2］。研究表明独子藤中主要含有生物碱和
三萜类成分，其中木栓烷型三萜类化合物具有显著的抗癌活
性［3］。为了寻找独子藤里面更多的具有生物活性的物质特
别极性比较低的活性化合物，探索独子藤中更多的抗癌活性
成分，本文采用甲醇来提取其中的有效成分，得出的浸膏先
对其进行药理活性测试，然后对其中的有效成分进行分离鉴
定。本文对得到的浸膏进行抗癌活性测试，以便为后来的分
离和筛选活性化合物提供实验基础和理论依据，为更有效更
合理地开发独子藤资源提供必要的前提。
1 仪器与试剂
予华 SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵，RE-52C旋转蒸发器，
SB-5200 超声波清洗机，天平，BIO-RAD 酶标仪，1000 ml锥型
瓶，甲醇，独子藤药材(2008 年 9 月采自广东阳春) ，A549 人
肺腺癌细胞和 HepG-2 人肝癌细胞均够于中山大学动物实验
中心，DMEM(高糖)培养基，TBD优级胎牛血清，四甲基偶氮
唑蓝(MTT) (北京鼎国生物技术公司) ，96 板(GREINER 公
司)。
2 实验步骤
2. 1 提取 分别称取独子藤根 50 g、茎 50 g，各自加入 400
ml甲醇，超声提取 1 h，浓缩提取液分别得浸膏 2. 8 g 和
3. 6 g。
2. 2 抗癌活性测试 采用 MTT 法检测细胞存活率或抑
制率［4］。
2. 2. 1 A549 人肺腺癌细胞和 HepG-2 人肝癌细胞接种:用
含 10%胎牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔 105 个
细胞接种到 96 孔板，5%CO2 培养 24 h。
2. 2. 2 独子藤根部甲醇提取物和独子藤茎部甲醇提取物均
以培养基配制成 5 mg /ml，以 0. 22 μm滤膜过滤除菌，然后倍
比稀释成浓度为:2. 5 mg /ml，1. 25 mg /ml，0. 625 mg /ml，
0. 375 mg /ml，0. 1875 mg /ml，每个浓度设 3 个复孔，加入细胞
中培养 24 h。
2. 2. 3 每孔加 MTT 溶液(5 mg /ml，用 pH = 7. 4 的 PBS 配
制，避光保存)10 μl。37℃继续孵育 4 h，终止培养，小心吸弃
孔内培养上清液。
2. 2. 4 每孔加 150 μl DMSO，振荡 10 min，使结晶物充分
融解。
2. 2. 5 以 Bio-rad酶标仪选择 490 nm波长测定吸光度。
3 实验结果
3. 1 根浸膏不同浓度对 A549 人肺腺癌细胞的杀灭作用(见
表 1)。
表 1 浓度不同的根浸膏对 A549 人肺腺癌细胞的杀灭作用
浓度 mg /ml 空白 0. 1875 0. 375 0. 625 1. 25 2. 5 5
抑制率 - 2. 10 2. 18 2. 19 3. 79 7. 50 15. 09
3. 2 根浸膏不同浓度对 HepG-2 人肝癌细胞的杀灭作用(见表 2)。
表 2 不同浓度的根浸膏对 HepG-2 人肝癌细胞的杀灭作用
浓度 mg /ml 空白 0. 1875 0. 375 0. 625 1. 25 2. 5 5
抑制率 - 2. 62 2. 53 2. 77 3. 06 6. 18 13. 22
3. 3 茎浸膏不同浓度对 A549 人肺腺癌细胞的杀灭作用(见表 3)。
表 3 浓度不同的茎浸膏对 A549 人肺腺癌细胞的杀灭作用
浓度 mg /ml 空白 0. 1875 0. 375 0. 625 1. 25 2. 5 5
抑制率 - 1. 31 1. 47 2. 55 2. 58 4. 76 9. 14
3. 4 茎浸膏不同浓度对 HepG-2 人肝癌细胞的杀灭作用(见表 4)。
表 4 不同浓度的茎浸膏对 HepG-2 人肝癌细胞的杀灭作用
浓度 mg /ml 空白 0. 1875 0. 375 0. 625 1. 25 2. 5 5
抑制率 - 2. 06 2. 61 2. 63 4. 07 8. 90 10. 40
4 结论与分析
MTT细胞存活率检测法显示癌细胞株的抑制率随独子
藤根部甲醇提取物和独子藤茎部甲醇提取物的浓度增高而
增大，表明提取物中含有很可能含有对抑制癌细胞生长的物
质，因此有必要进行进一步对其中的抗癌活性成分进行分
离，找出其中的抗癌活性成分，本实验为后续的抗癌活性成
分的筛选分离提供实验基础和理论依据，为更有效更合理地
开发独子藤资源提供必要的前提。
参考文献
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·911·中国现代药物应用 2012 年 4 月第 6 卷第 7 期 Chin J Mod Drug Appl，Apr 2012，Vol． 6，No． 7