全 文 :— 27 —现代中药研究与实践2013年第27卷第6期Chin Med J Res Prac,2013 Nov.Vol.27 No.6
竹叶柴胡不同采收期有效成份动态变化研究
蔡 华 1 ,叶 方 1,杨光义 1,杜士明 1,王 刚 1 ,杜 婷 1 ,孙荣进 2
(1. 湖北医药学院附属十堰市太和医院,湖北 十堰 442000 ;2. 湖北医药学院,湖北 十堰 442000)
摘 要:目的 以鄂西北地区房县竹叶柴胡为样本,研究柴胡总皂苷,挥发油的动态变化规律,探讨
竹叶柴胡的最佳采收期。方法 以柴胡总皂苷的含量、挥发油的吸光度为指标,采用紫外 -可见光光度法
进行分析。结果 不同采收期竹叶柴胡中的柴胡总皂苷,挥发油含量均存在明显的差异。柴胡总皂苷的含
量 8月份最高;挥发油的含量 7月份最高。结论 确定了鄂西北地区竹叶柴胡的最佳采收期,为鄂西北地
区柴胡药材的GAP 种植提供了一定的科学依据。
关键词:柴胡;柴胡总皂苷;挥发油;GAP ;动态变化
中图分类号:R282.4 文献标识码:A 文章编号:1673-6427(2013)06-0027-03
收稿日期:2013-09-18
基 金 项 目 : 科 技 部 2 0 1 0 年 度 科 技 型 中 小 企 业 技 术 创 新 基 金
(10C26214204534)地道北柴胡规范化种植
作者简介:蔡华(1965—),女,学士,副主任药师,研究方向:医院
药学。Tel:0719-8801197。E-mail:tsai1094@sina.com
*通讯作者:杨光义(1975年—),男,博士,副主任药师,主要研究方
向:中药资源开发和新药研究;E-mail:ygy996@163.com;
Tel:0719-8801393,13971908298。
析麦冬中间体总固体每提升 1mg/ml 可使参麦注射液
总固体提高 0.920mg/ml,如保持红参提取总固体不
变,则参麦注射液总固体的浮动范围为 0.001* 中间
体总固体 +1.682 约为 1.682mg/ml。
从上述分析看出,时序数据因素与控制因素成
品总固体越靠近,控制因素浮动范围越小,越有利于
产品控制。
4 讨论
4.1 虽然参麦注射液质量标准中没有麦冬的含量检
测,指纹图谱中也基本找不到来自于麦冬药材的成分
峰,但通过对清明节前后采收的麦冬药材的浸出物和
中间体总固体值的数据分析,针对参麦注射液质量而
言,清明节后采收的麦冬药材好于清明节前采收的。
4.2 参麦注射液用麦冬药材应选用清明节后采收
的,如采用清明节前采收,则参麦注射液总固体明显
下降甚至可能低于法定质量标准 20mg/ml,会影响产
品的质量,同时清明节后采收与麦冬药材传统采收期
是吻合的。
4.3 建议麦冬药材增加醇溶性浸出物的检测项目,
加强对麦冬药材的质量控制,同时进一步研究清明节
前后采收麦冬药材物质基础,以具体含量测定限度来
区分。
4.4 企业应根据具体品种的具体要求制定适用的中
药材进厂内控检验标准,避免劣质药材进入生产环
节。
4.5 呼吁麦冬 GAP 药材基地加强管理,严格控制麦
冬药材的采收期。
参考文献
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DOI:10.13728/j.1673-6427.2013.06.009
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竹叶柴胡Bupleurum marginatum Wall.ex DC. 为我
国柴胡药材三大来源之一 [1],虽然《中国药典》收载
的柴胡药材为伞形科植物北柴胡B.chinese DC. 或狭
叶柴胡B. scorzonerifolium willd. 的干燥根 [2],但竹叶
柴胡在湖北、四川、云南等地广泛使用。资源调查
结果显示,湖北省境内的柴胡品种主要为竹叶柴胡,
鄂西北地区包含神农架林区因具有良好的地理环境
和气侯特征,出产的柴胡药材以其良好的质量而畅销
国内外。但近年来由于柴胡药材用量持续增长,野生
资源却日渐减少,日益突出的供需矛盾要求大规模发
展柴胡药材的人工种植。鄂西北地区充分利用当地
的地理和气候优势,近年来以房县为中心开展柴胡
的规范化种植研究。为了规范种植地区的柴胡采收、
加工,课题组考察了不同采收季节柴胡中柴胡总皂苷
和挥发油的动态累积规律,作为本地区柴胡采收加工
的参考依据。
1 仪器与试药
TU-1901 型双光束紫外可见光光度仪(北京普析
通用仪器有限责任公司);FA2004 型电子天平(上海
精科公司)
柴胡皂苷 c(SSc)对照品(上海源叶生物科技
有限公司,批号 :20120726);
不同采收期柴胡样品采自湖北房县军店柴胡
GAP 种植基地(见表 1),经湖北中医药大学中药资
源和中药复方教育部重点实验室陈科力教授鉴定。样
品打粉,过 4 号筛备用。
甲醇为色谱醇,水为自制超纯水,其他试剂均为
分析纯。
表 1不同采收期柴胡总皂苷、挥发油含量(n=3)
Tab. 1 Content of total saponins,volatile oil of Bupleurum
in different collection periods (n=3)
样品编号 生长方式 采集时间 总皂苷含量 % 挥发油吸光度
1 人工种植 2012 年 5 月 30 日 2.1401 0.332
2 人工种植 2012 年 7 月 1 日 1.8544 0.426
3 人工种植 2012 年 7 月 31 日 2.0697 0.527
4 人工种植 2012 年 8 月 30 日 2.8508 0.313
5 人工种植 2012 年 10 月 7 日 2.0917 0.356
6 人工种植 2012 年 10 月 30 日 2.5291 0.266
7 人工种植 2012 年 11 月 30 日 2.6211 0.221
8 人工种植 2012 年 12 月 30 日 2.6428 0.204
2 方法与结果
2.1 总皂苷的含量测定 [3]
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取 SSc 9.4mg,
加甲醇定容至 100mL 容量瓶中,制成 0.094mg·ml
的 SSc 对照品溶液,摇匀,即得。
2.1.2 供试品溶液的制备 分别精密称取不同采
收期的柴胡粉末 2.0g,置具塞锥形瓶中,加入 40 ml
2%KOH 的甲醇溶液水浴回流提取 1 小时,重复操作
一次,滤过,合并滤液至 100 ml 容量瓶中,加甲醇
定容至刻度。精密量取提取溶液 20 ml 水浴上蒸干,
残渣加水溶解后以 30 ml 水饱和正丁醇萃取 2 次,合
并正丁醇部分,水浴蒸干后加甲醇将残留物溶解至
50 ml 容量瓶中,即得。
2.1.3 线性关系考察 精密量取“2.1.1”项下 SSc
对照品溶液 1、2、3、4、5、6 ml 置具塞试管中,水
浴蒸干,精密加入 1% 对二甲氨基苯甲醛的乙醇溶
液 0.2ml,再次蒸干后向试管中精密加入 8 ml 磷酸,
70℃水浴中加热 30min,充分冷却后,以水为空白在
Study on Dynamic Change of Active Ingredients from Bupleurum marginatum in
Different Collecting Periods
CAI Hua1,YE Fang1, YANG Guang-yi1,DU Shi-ming1,WANG Gang1, DU Ting1, SUN Rong-jin2
(1.Department of Pharmacy,Taihe Hospital Affi liated with Hubei University of Medicine, Shiyan 442000,China;2.
Hubei University of Medicine ,Shiyan 442000,China)
Abstract: Objective To study the dynamic change of total saponins,volatile oil from Bupleurum
marginatum at Fangxian region in Northwest area of Hubei Province, and to explore the optimal harvest period
of Bupleurum marginatum. Methods The experiment determined the content of total saponins and absorbance
of volatile oil in Bupleurum by visible spectrophotography and ultraviolet spectrophotometry.Results There are
obvious differences among the contents of total saponins and volatile oil in various collecting periods sample,
the content of total saponins was the highest in August, the absorption of volatile oil was the highest in July.
Conclusion The optimal harvest period of Bupleurum marginatum at Fangxian region in Northwest area of Hubei
Province is identifi ed, which can provide scientifi c basis for GAP of Bupleurum.
Key words: Bupleurum marginatum Wall.ex DC.; total saponins; volatile oi; GAP; dynamic change
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546 nm 波长处测定吸光度,以对照品含量 X(mg)
为横坐标,吸光度 A 为纵坐标绘制标准曲线,得
到 SSc 的到回归方程为 : y = 1.6778x + 0.0043,R2 =
0.9939。
2.1.4 重复性试验 取同一样品(6 月采收)6 份,
按样品测定方法操作,测定吸光度。结果RSD 为
1.25%,表明方法重复性良好。
2.1.5 稳定性试验 取同一样品溶液(5 月采收)
在 0、0.5、1、2、4h 内测定吸光度,结果RSD 为 1.
73%,表明样品供试品溶液在 4h 内对检测结果无影
响,证明稳定性良好。
2.1.6 加样回收率测定 精密称取已知含量的柴
胡粉末(10 月采收)0.4g,精密加入 4mL 9.98mg 对照
品,再加入 5 mL2%KOH 的甲醇溶液水浴回流 1 小时,
重复提取一次,滤过,合并滤液蒸干,按样品测定方
法操作,测定含量,计算加样回收率,结果 SSc 的平
均回收率为为 97.76%(n= 6),RSD=2.25%(见表 2)。
表 2 柴胡总皂苷加样回收率
Tab. 2 Results of sample recovery rate tests
药材量 (g) 皂苷含量(mg)
加样量
(mg)
测得总量
(mg)
回收率
(%) 平均(%) RSD(% )
0.4096 10.36 9.98 19.98 96.40 97.76 2.25
0.4012 10.15 9.98 19.75 96.22
0.3998 10.11 9.98 20.02 99.28
0.4037 10.21 9.98 19.82 96.28
0.3937 9.96 9.98 19.62 96.83
0.4022 10.17 9.98 20.31 101.58
2.1.7 含量测定 精密吸取 2mL 供试品溶液置具
塞试管中,水浴蒸干后按“2.1.3”项下操作,测定吸
光度,计算样品中柴胡总皂苷的含量,结果见表 1。
2.1.8 柴胡总皂苷含量动态积累规律结果分析
根据总皂苷含量测定结果,结合采收时间绘制柴胡总
皂苷含量变化曲线图(图 1)。由图可知,柴胡总皂
苷的含量 8 月份最高,其后开始下降,10 月分以后
地上部分开始枯萎、根部开始发出越冬芽时总皂苷含
量趋于基本稳定。
图 1 不同采收期柴胡总皂苷含量动态变化
Fig.1 Dynamic change of total saponins of Bupleurum
in different collection periods
2.5 挥发油含量测定
2.5.1 含量测定 [4] 精密称取柴胡药材粉末 10g,
置 250mL 圆底烧瓶中,加 15% NaCl 溶液 100 mL,
电热套上加热回流 1 h 后,按 2010 版《中国药典》
的方法将回流装置改接成挥发油测量装置,连续提取
6h,收集蒸馏液于 25 mL 容量瓶中,加纯化水定容,
摇匀。精密量取 2mL 馏出液至 10 mL 容量瓶中,加
纯净水定容至刻度。另外量取馏出液 2 mL 置蒸发皿
中水浴蒸干后,将残渣加纯化水溶解至 10mL,摇匀
后作为空白。采用紫外分光光度法在 277 nm 波长处
测定吸光度,结果见表 1。柴胡挥发油吸光度变化曲
线见图 2。
2.5.2 柴胡挥发油含量动态积累规律结果分析
根据含量测定结果,结合采收时间绘制柴胡挥发油含
量变化曲线图(图 2)。挥发油含量在 5 月到 6 月之
间含量呈下降趋势,但到 7 月底含量达到最高,然后
又开始持续下降,到 12 月含量降到最低。
图 2 柴胡挥发油紫外吸收变化曲线
Fig.2 UV Change curve of Bupleurum volatile oil in different collection periods
3 讨论
3.1 对鄂西北地区房县种植的竹叶柴胡不同采收期
药材中总皂苷含量测定结果显示,春末、夏初时节
柴胡中总皂苷含量较低,当进入秋季种子开始成熟
后总皂苷含量最高,其后柴胡地上部分开始枯萎,
总皂苷含量有所降低 ;挥发油的含量变化曲线显示,
7 月底柴胡刚开始结种子时含量最高,其后含量开始
持续下降,直到地上部分完全枯萎降至最低。说明本
地区柴胡中的不同活性成分总皂苷和挥发油动态生
长周期有一定的差异,确定采收期应根据药用目的,
如果以保肝、护肝等用药目的应在种子成熟时采收,
如果以解热镇痛为用药目的,应在柴胡刚开始结种子
时采收。《中国药典》2010 年版规定柴胡药材的采收
期为春、秋二季,根据总皂苷和挥发油的含量测定结
果认为柴胡药材的采集时间不应在春季,而应该是进
入秋季以后再采收更合理。
(文下转第 21 页)
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的种类适当喷洒农药。每年春季施肥一次。花期不摘
蕾,果实微裂时采收果实。
牡丹常见病害为根腐病,发病时根部变黑腐烂。
叶斑病和灰霉病偶有发生。这些病害都由真菌感染,
发病初期喷洒适量杀菌剂溶液,可减少此类病害的发
生。常见虫害为蛴螬,主要咬食根部,整地时用敌百
虫拌麦麸皮做诱饵即可。
2.3 产地加工
牡丹栽培 4~6 年后可收获,其加工产品有 3 种,
只抽去内芯,不刮去外皮的为“原丹皮”或“黑丹皮”;
刮去外皮,抽去内芯的为“刮丹皮”;不刮皮和抽芯
的根须直接晒干为“丹须”。传统的加工方法是趁鲜
剪掉须根,用玻璃片或瓦片刮去外皮,凉晒变软后,
抽去内芯,晒干 [4]。目前,谯城区以生产“原丹皮”
为主,抽芯方式由纯手工化转变为半机械化,利用“抽
芯机”齿轮的旋转带动刀片的转动,从一侧剖开牡
丹,再通过人工将内芯取出,此方式不仅可以对粗细
不等的牡丹进行去芯,还保证了丹皮外观的完整性。
牡丹的脱皮方式主要通过“滚筒脱皮机”去栓皮。
3 讨论与小结
3.1 中药产业作为谯城区首位发展产业,随着亳州
中药材市场和亳州医药企业的不断发展,中药材种
植业发展迅速,目前中药材种植面积已发展到 110 万
亩。而牡丹因市场需求大,易管理,经济效益高等优
势受到企业及药农的青睐,使得其种植面积不断增
加,成为全国丹皮最大的主产区。
3.2 与传统栽培技术相比,谯城区牡丹多采用种子
直播、不摘花蕾、不修剪等,而是等到牡丹结籽后采
收种子,进行再利用。此外,谯城区牡丹的栽培历史
悠久,土地重茬现象严重,容易发生根腐病,药农为
减少该病害的发生,多次喷洒杀菌性的农药。这些栽
培管理方式是否影响丹皮药材质量有待进一步研究。
3.3 谯城区牡丹的采收时间受市场价格影响较大,
且栽培面积起伏不定,影响了丹皮的质量和生产的发
展,应规范采收时间,稳定种植面积,加快牡丹种植
的规范化和规模化。
3.4 牡丹集药用、食用和保健价值于一身,全身都
是宝。牡丹花、籽、叶、根可生产食品、花茶、食用油、
化妆品、牡丹枕、保健酒等。目前,谯城区药材丹皮
产业发展迅速,但牡丹深加工产业趋于落后。政府应
加大对丹皮资源的保护,加强与菏泽、洛阳等地区
的沟通与合作,加深对丹皮深加工产业研究的力度,
开发丹皮及其相关产业,充分发挥中国传统中医药的
优势和特色,最大限度的为人类社会服务。
参考文献
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3.2 根据对鄂西北地区野生和家种的柴胡生长周期
的观察发现,不同种植时间、不同产区柴胡的生命周
期有较大差别。比较湖北房县柴胡种植基地和城区湖
北医药学院内中草药示范园“百草园”里同期种植的
柴胡发现,由于气候条件的差别其生长周期有显著的
不同,城区的柴胡萌发、开花、结实、枯萎时间较种
植基地的柴胡提前将近一个月,所以考察采收期应明
确针对相对固定种植区域,才能根据有效成分的含量
累积变化情况结合生长周期基本确定采收期,达到规
范化种植的目的。
参考文献
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责任编辑 :王 宁