全 文 ：China Pharmacy 2016 Vol. 27 No. 24 中国药房 2016年第27卷第24期
益亦具有重要意义。
参考文献
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（收稿日期：2016-01-14 修回日期：2016-06-16）
（编辑：申琳琳）
＊主管药师，硕士。研究方向：药物标准及质量控制。电话：
0771-5828498。E-mail：26785128@qq.com
HPLC法测定溪黄草药材中迷迭香酸的含量
吴桂凡＊，黄清泉，谢培德，罗 轶（广西壮族自治区食品药品检验所，南宁 530021）
中图分类号 R927.2 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2016）24-3422-03
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.24.34
摘 要 目的：建立测定溪黄草药材中迷迭香酸含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为 Inertsil ODS-SP C18，流动相
为乙腈-0.4％磷酸（梯度洗脱），流速为1.0 ml/min，检测波长为327 nm，柱温为25℃，进样量为10 μl。结果：迷迭香酸的检测质量
浓度线性范围为 5.039～100.776 μg/ml（r＝0.999 6）；精密度、稳定性、重复性试验的 RSD＜3％；迷迭香酸的加样回收率为
99.53％～104.86％（RSD＝2.06％，n＝9）。结论：该方法操作简单、重复性好、准确度高，可用于测定溪黄草药材中迷迭香酸的含量。
关键词 溪黄草；高效液相色谱法；迷迭香酸
Determination of Rosmarinic Acid in Herba Rabdosiae Serrae by HPLC
WU Guifan，HUANG Qingquan，XIE Peide，LUO Yi（Institute for Food and Drug Control in Guangxi Zhuang Au-
tonomous Region，Nanning 530021，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish a method for rosmarinic acid in Herba Rabdosiae Serrae. METHODS：HPLC method
was performed on the column of Inertsil ODS-SP C18 with mobile phase of acetonitrile-0.4％ phosphoric acid（gradient elution）at a
flow rate of 1.0 ml/min，the detection wavelength was 327 nm，column temperature was 25 ℃，and injection volume 10 μl. RE-
SULTS：The linear range of rosmarinic acid was 5.039-100.776 μg/ml（r＝0.999 6），RSDs of precision，stability and reproducibility
tests were lower than 3％；recovery was 99.53-104.38％（RSD＝2.06％，n＝9）. CONCLUSIONS：The method is simple with good
reproducibility and high accuracy，and can be used for the content determination of rosmarinic acid in Herba Rabdosiae Serrae.
KEYWORDS Herba Rabdosiae Serrae；HPLC；Rosmarinic acid
􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭􀤭
溪黄草俗称熊胆草、血风草、黄汁草、香茶菜、手擦黄等，
生长于山谷溪旁潮湿处，新鲜叶片揉搓有棕黄色液汁而得
名。其主要分布于长江以南的湖南、湖北、广东、广西、江西、
福建等地。溪黄草在南方各地临床应用普遍，具有清热利湿、
退黄、凉血散瘀的功效，可用于治疗湿热黄疸、湿热泻痢、急性
胆炎、急性胆囊炎、痢疾、肠炎、癃闭、跌打瘀肿等疾病[1]。但溪
黄草来源复杂，《中华本草》中溪黄草来源为唇形科植物溪黄
草和线纹香茶菜的全草[2]；《广西中药材标准》（第二册）中溪黄
草植物来源为唇形科植物线纹香茶菜的干燥地上部分 [3]；而
《广西中药材标准》（第二册）将来源为溪黄草的药材命名为蓝
花柴胡[3]，分为线纹香茶菜和溪黄草两个不同的药材来源；《广
东中药材标准》（第二册）将溪黄草来源分为线纹香茶菜以及
其变种纤花香茶菜或溪黄草[4]。现主要栽培的品种为线纹香
茶菜 Isodon lophanthoides（Buch.-Ham.ex D.Don）H.Hara、纤花
香茶菜 I. lophanthoides（Buch.-Ham. ex D.Don）H.Hara var. gra-
ciliflorus（Benth.）H.Hara和溪黄草 I. serra Maxim.，此 3个品
种在野外也有分布。随着中药发展及中成药生产规模的不断
扩大，溪黄草的应用也越来越广泛，但地方标准只有显微鉴别
和薄层鉴别，未制定含量测定指标。为此，笔者以溪黄草主要
栽培的 3个品种为对象，采用高效液相色谱法（HPLC）测定其
迷迭香酸的含量，以期为溪黄草药材的质量控制提供参考。
1 材料
1.1 仪器
1260 型 HPLC 仪，包括二极管阵列（DAD）检测器、
G1329B型自动进样器（美国Agilent公司）；CP224S型万分之
一分析天平（德国Sartorius公司）；XP205型十万分之一分析天
平（瑞士Mettler-Toledo公司）；MILLI-QA10型超纯水仪（美国
Millipore公司）
1.2 试剂
迷迭香酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号：
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111871-201203，纯度＞98.8％）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为
分析纯，水为高纯水。
1.3 药材
溪黄草药材经笔者实地采集，以及自广东、广西、福建、河
南、河北等地购买，经广西食品药品检验所中药民族药室主管
药 师 黄 清 泉 鉴 定 分 别 为 线 纹 香 茶 菜 I. lophanthoides
（Buch.-Ham. ex D. Don）H. Hara（编号：XW-1～10）（10份）、纤
花香茶菜 I. lophanthoides（Buch.-Ham. ex D.Don）H.Hara var.
graciliflorus（Benth.）H. Hara.（编号：XH-1～10）（10份）和溪黄
草 I. serra Maxim.（编号：XHC-1～10）（10份）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Inertsil ODS-SP C18（250 mm×4.6 mm，5 µm）；流动
相：乙腈（A）-0.4％磷酸（B），梯度洗脱（洗脱程序见表 1）；流
速：1.0 ml/min；检测波长：327 nm；柱温：25℃；进样量：10 μl。
表1 梯度洗脱程序
Tab 1 Gradient elution program
时间，min
0～10
10～50
50～70
70～71
71～80
A，％
15
15→20
20
20→15
15
B，％
85
85→80
80
80→85
85
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液 取迷迭香酸对照品适量，置于50 ml量瓶
中，加50％甲醇定容，摇匀，制成每1 ml含迷迭香酸0.201 6 mg
的溶液，作为对照品贮备液；精密量取上述对照品贮备液适
量，加 50％甲醇制成每 1 ml含迷迭香酸 40 μg的对照品溶液，
摇匀，即得。
2.2.2 供试品溶液 取样品粉末适量，过 2号筛，取约 1 g，精
密称定，置于150 ml具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50 ml，
称定质量，水浴加热回流60 min，放冷，再次称定质量，用50％
甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，经 0.45 μm微孔
滤膜滤过，即得。
2.3 系统适用性试验
取“2.2”项下对照品溶液、供试品溶液各适量，按“2.1”项
下色谱条件进样测定，记录色谱，详见图1。由图1可知，在该
色谱条件下，各成分均能达到基线分离，分离度＞1.5，理论板
数以迷迭香酸峰计为18 842，保留时间为54.029 min 。结果表
明，其他成分对测定无干扰。
2.4 线性关系考察
精密称取“2.2.1”项下对照品贮备液0.25、1.0、2.0、3.0、4.0、
5.0 ml，各分别置于10 ml量瓶中，用50％甲醇定容，摇匀，即得
不同质量浓度的系列对照品溶液。分别精密量取上述系列对
照溶液各10 μl，按“2.1”项下色谱条件进样测定，以迷迭香酸的
质量浓度（x，μg /ml）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性
回归，得迷迭香酸的回归方程为 y＝27.976x－14.797（r＝
0.999 6）。结果表明，迷迭香酸的检测质量浓度线性范围为
5.039～100.776 μg/ml。
2.5 精密度试验
取“2.2.1”项下对照品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件连
续进样测定 6次，记录峰面积。结果，迷迭香酸峰面积的
RSD＝0.68％（n＝6），表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验
取“2.2.2”项下供试品溶液适量，分别于室温下放置 0、4、
10、16、24 h时按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。
结果，迷迭香酸峰面积的RSD＝0.84％（n＝6），表明供试品溶
液在室温下24 h内稳定性良好。
2.7 重复性试验
取样品（编号：XW-10）适量，按“2.2.2”项下方法平行制备
6份供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面
积。结果，迷迭香酸峰面积的RSD＝2.39％（n＝5），表明本方
法重复性良好。
2.8 加样回收率试验
取已知含量的样品（编号：XW-10）0.5 g，共9份，分别加入
低、中、高质量的迷迭香酸对照品，按“2.2.2”项下方法制备供
试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计
算加样回收率，结果见表2。
2.9 样品含量测定
取不同编号的样品粉末各适量，按“2.2.2”项下方法制备
供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并
计算迷迭香酸的含量（按干燥品计），结果见表3。
3 讨论
3.1 含量指标的选择
溪黄草主要含酚类、酸类、萜类等[5]，3种来源的溪黄草均
70
60
50
40
30
20
10 10 20 30 40 50 60 70
t，min
A
1mA
U
70
60
50
40
30
20
10
mA
U
10 20 30 40 50 60 70
t，min
B
1
70
60
50
40
30
20
10
mA
U
10 20 30 40 50 60 70
t，min
C
1
70
60
50
40
30
20
10
mA
U
10 20 30 40 50 60 70
t，min
D
1
图1 高效液相色谱图
A.对照品；B.溪黄草供试品；C.线纹香茶菜供试品；D.纤花香茶菜供
试品；1.迷迭香酸
Fig 1 HPLC chromatograms
A.reference substance of rosmarinic acid；B.test sample of I. lophanthoi-
des；C. test sample of I. lophanthoides；D.test sample of I. lophanthoides；
1.rosmarinic acid
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含有酚类化合物迷迭香酸和咖啡酸[6]，这两种成分均具有抗氧
化作用，与溪黄草的抗氧化抗炎作用一致[7]。因在溪黄草中迷
迭香酸的相对含量较大，咖啡酸含量太小，故本试验选择迷迭
香酸为含量控制指标。
3.2 检测波长的选择
选择检测波长时，笔者参考相关文献[6，8]通过DAD检测器
考察，发现在327 nm波长处迷迭香酸有最大吸收，特征图谱所
得的色谱信息也较多，故选择327 nm为本试验的检测波长。
3.3 对测定结果的分析
由于溪黄草来源分为3个种，各地方习用药材也不统一[9]，
不同种间成分差异也较大 [10-12]，即使同种药材不同产地间成
分也存在差异；另外采收季节不同和干燥方法不同也对迷迭
香酸的含量有较大影响[13]。从测定的30批溪黄草中迷迭香酸
含量结果来看，线纹香茶菜含量较高（为0.394％～1.80％），纤
花香茶菜次之（为 0.150％～0.579％），溪黄草含量最低（为
0.055％～0.626％）。表明溪黄草的3个来源之间有明显差异。
综上所述，本方法操作简单、重复性好、准确度高，可用于
测定溪黄草药材中迷迭香酸的含量。
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（收稿日期：2015-08-30 修回日期：2016-06-16）
（编辑：刘 柳）
表2 加样回收率试验结果（n＝9）
Tab 2 Results of recovery test（n＝9）
取样
量，g
0.506 7
0.512 7
0.516 1
0.510 4
0.521 4
0.509 4
0.503 1
0.501 3
0.509 8
样品含
量，mg
0.679 2
0.687 3
0.678 4
0.684 2
0.698 9
0.682 8
0.674 4
0.672 0
0.683 4
加入量，
mg
0.380 9
0.380 9
0.380 9
0.761 7
0.761 7
0.761 7
1.142 6
1.142 6
1.142 6
测得量，
mg
1.072 6
1.084 9
1.057 8
1.474 2
1.472 6
1.481 5
1.847 4
1.812 4
1.820 6
加样回收
率，％
103.28
104.38
99.61
103.72
101.58
104.86
102.66
99.81
99.53
平均加样回
收率，％
102.16
RSD，
％
2.06
表3 样品含量测定结果（n＝3）
Tab 3 Results of content determination of sample（n＝3）
药材品种
溪黄草
溪黄草
溪黄草
溪黄草
溪黄草
溪黄草
溪黄草
溪黄草
溪黄草
溪黄草
线纹香茶菜
线纹香茶菜
线纹香茶菜
线纹香茶菜
线纹香茶菜
线纹香茶菜
线纹香茶菜
线纹香茶菜
线纹香茶菜
线纹香茶菜
纤花香茶菜
纤花香茶菜
纤花香茶菜
纤花香茶菜
纤花香茶菜
纤花香茶菜
纤花香茶菜
纤花香茶菜
纤花香茶菜
纤花香茶菜
编号
XHC-1
XHC-2
XHC-3
XHC-4
XHC-5
XHC-6
XHC-7
XHC-8
XHC-9
XHC-10
XW-1
XW-2
XW-3
XW-4
XW-5
XW-6
XW-7
XW-8
XW-9
XW-10
XH-1
XH-2
XH-3
XH-4
XH-5
XH-6
XH-7
XH-8
XH-9
XH-10
来源
河北
河北
河南
河南
广东翁源
广东英德
广东英德
广东英德
广东英德
广西南宁
福建武平
广东潮州
广东开平
广东清远
福建下坝
福建下坝
福建龙岩
福建龙岩
福建武平
福建武平
福建武平
福建武平
广东清远
广东清远
广东饶平
广东饶平
福建下坝
福建下坝
广东台山
广东清远
迷迭香酸含量，％
0.190
0.181
0.338
0.626
0.067
0.155
0.163
0.165
0.185
0.055
0.442
0.417
1.800
0.533
0.394
0.491
0.880
0.914
0.522
0.601
0.299
0.525
0.299
0.381
0.150
0.226
0.579
0.311
0.163
0.152
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