全 文 ：现代生物医学进展 www.shengwuyixue.com Progress inModern Biomedicine Vol.11 NO.24 DEC.2011
·药学·
HPLC法同时测定鸡矢藤中熊果酸和齐墩果酸的含量
张加雄 1 胡轶娟 2 朱 军 3
（1解放军第 42医院医学工程科 四川乐山 614100；2浙江省中医药研究院 浙江杭州 310007；
3杭州职业技术学院 浙江杭州 310018）
摘要 目的：建立高效液相色谱法同时测定鸡矢藤中熊果酸和齐墩果酸的含量。方法：色谱柱为 DiamonsilTM C18（250×4.6 mm，
5 滋m），流动相为甲醇 -0.05mol·L-1磷酸溶液（93∶7）为流动相，检测波长 210 nm，进样量 10 滋L。结果：熊果酸在 21.28 滋g·mL-1～
212.8 滋g·mL-1范围内线性关系良好（r=0.9997），平均回收率为 97.79%（RSD=1.30%）；齐墩果酸在 24.02滋g·mL-1～240.2滋g·mL-1
范围内线性关系良好（r=0.9996），平均回收率为 98.36%（RSD=1.11%）。结论：该方法简便、灵敏、准确，可用于鸡矢藤药材的质量
评价。
关键词：鸡矢藤；熊果酸；齐墩果酸；高效液相色谱法
中图分类号：R284.2，R927.2 文献标识码：A 文章编号：1673-6273（2011）24-4965-03
Determination of Ursolic Acid and Oleanolic Acid in Paederia Scandens
(Lour.) Merr. by HPLC
ZHANG Jia-xiong1, Hu Yi-juan2, ZHU Jun3
(1 Dept. of Medical Engineering，No.42 Hospital of PLA, Leshan 614100, China; 2 Zhejiang Traditional Chinese Medicine Academy，
Zhejiang，310007，China; 3 Hangzhou Vocational and Technical College, Hangzhou 310018, China)
To establish a method to detect the oleanolic acid and ursolic acid in Paederia scandens (Lour.) Merr. by
HPLC. Oleanolic acid and ursolic acid were separated on DiamonsilTM C18 column（250×4.6mm, 5滋m）with a mobile phase
of methanol-0.05mol·L-1 phosphoric acid (93:7) with the flow rate of 0.8mL·min-1. The detected wavelength was 210nm, and the injec-
tion volume was 10 滋L. The calibration curves of ursolic acid and oleanolic acid had a good linearity in the range of 21.28滋g·
mL-1-212.8滋g·mL-1 (r=0.9997) and 24.02 滋g·mL-1-240.2 滋g·mL-1 (r=0.9996), respectively. The average recovery was 97.79% (RSD=1.
30%) and 98.36% (RSD=1.11%), respectively. The method is simple, sensitive and accurate, and can be used in the quality
assessment of Paederia scandens (Lour.) Merr.
Paederia scandens (Lour.) Merr.; Ursolic acid; Oleanolic acid; HPLC
作者简介：张加雄（1978-），男，硕士学位，副主任药师，主要研究方
向：中药质量标准及物质基础研究。电话：13981318796,
E-mail: bmfz@163.com
（收稿日期：2011-06-06 接受日期;2011-06-30）
前言
鸡矢藤是茜草科鸡矢藤属多年生蔓性草质藤本植物鸡矢
藤 Paederia scandens (Lour.) Merr.的全株。鸡矢藤为民间传统中
草药，性平，味甘微苦，归脾、胃、肝、肺经，具祛风利湿，止痛解
毒，消食化积，活血消肿功效，用于风湿痹痛、腹泻、腹痛、气虚
浮肿、头昏食少、肝脾肿大、小儿疳积、黄疽、烫火伤、湿疹，疮伤
肿痛等症[1]。鸡矢藤主要含有熊果酸、齐墩果酸、鸡矢藤苷等环
烯醚萜类化合物[2]。熊果酸具有确切的抗肿瘤作用[3]，齐墩果酸
除有抗肿瘤作用外，还具有确切的护肝、抗胃溃疡作用[4]，这与
鸡矢藤的功效主治具有共同之处。因此，本文对鸡矢藤中熊果
酸和齐墩果酸的含量测定方法进行研究，为鸡矢藤药材的质量
评价提供依据。熊果酸和齐墩果酸作为齐墩果酸、熊果酸同为
三萜类化合物，互为同分异构体，极性相近，均含有酸性基团，
故要把二者很好的分开，且要防止色谱峰拖尾，色谱条件尤为
重要。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
LC-10ATVP高效液相色谱仪及色谱工作站（日本岛津公
司）；DiamonsilTM色谱柱（C18，5滋m，250×4.6mm）；紫外可见
分光光度计（Varian）；BP221S电子天平（Sartorious，万分之一、
十万分之一）；熊果酸、齐墩果酸对照品均由中国药品生物制品
检定所提供（批号分别为 110742-200516，1107090-200505）。鸡
矢藤经浙江省中医药研究院胡轶娟鉴定为茜草科鸡矢藤属植
物 Paederia scandens (Lour.) Merr.的全株。甲醇、乙腈为色谱纯，
水为注射用水；其余试剂均为分析纯；
1.2 方法
1.2.1 色谱条件 DiamonsilTM C18 色谱柱（5 滋m，250×4.6
mm）；流动相为甲醇 -0.05mol·L-1 磷酸溶液（93：7）；流速
4965· ·
现代生物医学进展 www.shengwuyixue.com Progress inModern Biomedicine Vol.11 NO.24 DEC.2011
Compound No.
Sample
/g
Content
/mg
Added
/mg
Detected
/mg
Recovery
/%
Average /% RSD/%
Ursolic acid
1 0.5047 0.9382 0.9363 1.8678 99.28 97.79 1.30
2 0.5005 0.9304 0.9363 1.8540 98.64
3 0.5027 0.9345 0.9363 1.8584 98.67
4 0.5064 0.9414 0.9363 1.8398 95.95
5 0.5032 0.9354 0.9363 1.8468 97.34
6 0.5081 0.9446 0.9363 1.8516 96.88
Oleanolic acid
1 0.5012 1.1387 1.1289 2.2303 96.69 98.36 1.11
2 0.5129 1.1653 1.1289 2.2746 98.26
3 0.5045 1.1462 1.1289 2.2629 98.92
4 0.5061 1.1499 1.1289 2.2768 99.83
5 0.5074 1.1528 1.1289 2.2555 97.68
6 0.5008 1.1378 1.1289 2.2531 98.79
表 1 熊果酸和齐墩果酸加样回收率
Tab.1 Results of recovery test of ursolic acid and oleanolic acid
0.8mL·min-1；检测波长 210nm，柱温 30℃；进样量 10滋L。
1.2 对照品溶液的制备 分别精密称取熊果酸、齐墩果酸对照
品适量，分别加甲醇溶解，制得熊果酸（1.064 mg·mL-1）、齐墩
果酸（1.201 mg·mL-1）对照品储备液。精密量取各对照品储备液
1ml，置于同一 5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每毫升
含熊果酸 212.8 滋g、齐墩果酸 240.2 滋g）。
1.3 供试品溶液的制备
取鸡矢藤粗粉约 0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入
氯仿 50 ml，超声提取两次，每次 40 min，滤过，合并滤液，水浴
挥干，残渣加适量甲醇溶解，转移至 10 ml容量瓶中，加甲醇至
刻度，摇匀，即得。
2 结果
2.1 色谱分离
对照品、供试品和阴性样品溶液的色谱图见图 1，在供试
品色谱图中，与对照品色谱相应位置上有相应保留时间的色谱
峰，而阴性对照溶液在此保留时间无干扰。
图 1 高效液相色谱图：A.对照品；B.样品；C.阴性对照；1.齐墩果酸；2.熊果酸
Fig.1 HPLC chromatograms:A. reference substance; B. sample; C. negative sample; 1. oleanolic acid；2. ursolic acid；
2.4 线性关系
精密吸取对照品溶液 1 ml、2 ml、4 ml、6 ml、10 ml分别置
于 10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取上述
对照品溶液各 10 滋L，依次注入高效液相色谱仪，按上述色谱
条件测定峰面积，以峰面积积分值 A为纵坐标，对照品溶液浓
度 C（滋g·mL-1）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为：熊
果酸 A=1.715×107C+6.021×103，r=0.9997，线性范围为 21.28
滋g·mL-1～212.8 滋g·mL-1；齐墩果酸 Y=1.637×107C+6.75×102，
r=0.9996，线性范围为 24.02 滋g·mL-1～240.2 滋g·mL-1。
2.5 精密度
精密吸取对照品溶液 10 滋L，重复进样 6次，以熊果酸、齐
墩果酸的峰面积计算，RSD分别为 0.88%，1.02%，表明仪器精
密度良好。
2.6 重复性
平行称取 6份样品，按 1.3项下制备供试品溶液，进样测
定，结果供试品中熊果酸的含量为 1.859mg/g，RSD为 1.59%，
齐墩果酸的平均含量为 2.272mg/g，RSD为 1.17%，表明重复
性良好。
2.7 稳定性
日内：精密吸取供试品溶液 10 滋L，分别于 0、2、4、6、8、10
h 进样，以熊果酸、齐墩果酸的峰面积计算，RSD 分别为
1.52%，1.35%。日间：精密吸取供试品溶液 10 滋L，分别于 5 d内
进样，以熊果酸、齐墩果酸的峰面积计算，RSD分别为 1.20%，
1.18%。表明供试品溶液在 5 d内稳定性良好。
2.8 加样回收率
取已知含量的同一批样品 6份，每份约 0.5g，精密称定，置
具塞锥形瓶中，分别精密加入 0.9363 mg熊果酸、1.1289 mg齐
墩果酸对照品，按 1.3项下方法制备供试液，测定含量，计算
回收率，结果见表 1。熊果酸和齐墩果酸的平均回收率分别为
97.79%，98.36%。
4966· ·
现代生物医学进展 www.shengwuyixue.com Progress inModern Biomedicine Vol.11 NO.24 DEC.2011
2.9 样品含量测定
取 3批样品（不同产地）各 2份，按 1.3项下方法制备供
试液，测定峰面积，以外标法计算齐墩果酸和熊果酸的含量，结
果见表 2。3批样品中，熊果酸和齐墩果酸的含量均较高（＞
1‰）。
表 2 样品含量测定结果(n=2)
Table 2 Determination of ursolic acid and oleanolic acid (n=2)
No.
Ursolic acid
/mg·g-1
Oleanolic acid
/mg·g-1
1 1.859 2.272
2 1.368 2.258
3 1.207 2.010
3 讨论
在检测波长的选择中，笔者分别取齐墩果酸、熊果酸对照
品溶液和样品溶液在 200 nm～400 nm波长范围内进行扫描，
齐墩果酸、熊果酸的最大吸收长分别为 214 nm、210 nm，选择
210 nm作为测定波长时，基线平稳，无明显噪音，故确定检测
波长为 210 nm。
在流动相的选择中，由于熊果酸和齐墩果酸均含羟基和羧
基活性基团，为保证较好的峰形，在流动相中加入适量的酸以
减少拖尾现象。本实验按照参考相关文献[5-7]中的色谱条件进行
对比实验，均未取得理想的分离效果，笔者重点考察醋酸和磷
酸作为调节酸时，在不同流动相条件下待测成分色谱峰分离效
果，结果表明流动相为甲醇 -0.05mol/L磷酸溶液（93：7）时熊果
酸和齐墩果酸峰形对称，分离度佳，阴性对照液在二者保留时
间处无干扰。
在供试品溶液的制备中，笔者分别比较了加热回流提取、
超声提取和微波提取，结果三种提取方式对齐墩果酸和熊果酸
的含量测定结果影响不大，而超声提取方式操作简便，故确定
采取超声提取法制备供试液。
参考文献(References)
[1] 贵州省药品监督管理局.贵州省中药材、民族药材质量标准[S].贵
阳:贵州科技出版社,2003:208-209
Guizhou Food and Drug administration. Quality Criterion for
Guizhou Chinese medical material and Traditional medical material
[S].GuiYang science and technology press, 2003:208-209
[2] 邹旭,梁健,丁立生,等.鸡屎藤化学成分的研究[J].中国中药杂志,
2006,31(17):1436-1441
Zou Xu, Liang Jian, Ding Li-Sheng, et al. Studies on chemical con-
stituents of Paederia scandense[J], China Journal of Chinese Material
Medical, 2006,31(17):1436-1441
[3] 于海涛,张巍于,英君.熊果酸药理机制的研究[J].中国健康月刊 ,
2010,29(4):26-28
Yu Hai-tao, Zhang Wei-Yu, Yin Jun. Studies on Pharmacological
Mechanism of ursolic acid [J]. Chinese Journal of Health, 2010,29(4):
26-28
[4]周志勇,袁丁.齐墩果酸药理作用研究进展[J].中国医院药学杂志,
2008,28(23):2031-2033
Zhou Zhi-Yong, Yuang Ding. Research progress in pharmacological
activities of oleanolic acid[J]. Chinese Journal of Hospital Pharmacy,
2008, 28(23):2031-2033
[5] 杨新河,刘仲华,黄建安,等.HPLC法测定苦丁茶中熊果酸和齐墩果
酸的含量[J].药物分析杂志,2007,27(10):1627-1629
Yang Xin-he, Liu Zhong-hua, Huang Jian-an, et al. HPLC determina-
tion of oleanolic acid and ursolic acid in llex Kudingcha C. J. Tseng
[J]. Chinese Journal of Pharmaceutical Anyaysis, 2007,27 (10):
1627-1629
[6] 杜丰玉,陈钧,许月明,等.高效液相色谱法测定枇杷叶中熊果酸和齐
墩果酸的含量[J].中国医院药学杂志,2008,28(1):21-23
Du Feng-yu, Chen Jun, Xu Yue-ming, et al. Determination of ursolic
acid and oleanolic acid in Eriobotrya japonica by HPLC [J]. Chinese
Journal of Hospital Pharmacy, 2008,28(1):21-23
[7] 刘小兰,周剑波,陶燕铎,等.高效液相色谱法测定翼首草中熊果酸和
齐墩果酸的含量[J].中国医院药学杂志,2008(7):546-548
Liu Xiao-lan, Zhou Jian-bo, Tao Yan-Duo, et al. Determination of
oleanolic acid and ursolic acid in Yishoucao by HPLC [J]. Chinese
Journal of Hospital Pharmacy,2008(7):546-548
4967· ·