全 文 ：猪殃殃提取物不同极性部位抗白血病活性比较
时国庆1，2，赵文恩1，王永胜3
(1．郑州大学化工与能源学院，河南郑州 450001;2．郑州轻工业学院食品与生物工程学院，河南郑州 450002;3．河南煤化集团新乡中新化工有限
责任公司，河南新乡 453800)
摘要 ［目的］比较猪殃殃提取物不同极性部位的抗白血病活性。［方法］采用 95%乙醇对猪殃殃进行回流提取，得到浸膏再进行索氏
极性梯度分级，经白血病 K562细胞体外抗癌活性检验，以确定猪殃殃不同极性部位和生物活性的关系。［结果］猪殃殃各极性部位正丁
醇部位得率最高，其次是二氯甲烷;浸膏和各极性部位对 K562细胞的生长都具有一定的抑制作用，各部位抑制活性均优于浸膏。其中
乙醚﹑二氯甲烷、乙酸乙酯部位抑制活性较强且相差不大，正丁醇部位抑制作用较弱。［结论］猪殃殃提取物含有潜在的抗癌活性成分，
可用于开发新型抗肿瘤药物。
关键词 猪殃殃(Galium aparine L．);MTT;白血病
中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2011)20 －12149 －02
Comparison of Anti － leukemia Activity among Different Polar Parts of Galium aparine L． Extracts
SHI Guo-qing et al (School of Chemical Engineering and Energy，Zhengzhou University，Zhengzhou，Henan 450001)
Abstract ［Objective］To compare effects of different polar parts of Galium aparine L． extracts on anti-leukemia activity． ［Method］Galium
aparine L． was refluxed with 95% ethanol and the obtained extracts were separated into different polar parts by Soxhlet extractor． The relation-
ship between polar parts and biological activity was investigated through leukemia cells-K562 in vitro antitumor activity test． ［Result］The con-
tent of extractum was the highest in butanol part，followed by dichloromethane part． The extractum and polar parts had a certain inhibitory ac-
tivity on the growth of K562 cells，in which the latter was better than the former． Ether，dichloromethane and ethyl acetate polarity components
had the stronger inhibitory activity，while normal butanol phase’s inhibition was weak． ［Conclusion］Extracts of Galium aparine L． contained
some anti-cancer components that could be used in developing new anticancer drugs．
Key words Galium aparine L．;MTT;Leukemia
作者简介 时国庆(1973 － ) ，男，河南新蔡人，讲师，博士，从事功能性
食品和生物制药研究，E-mail:guoqing． s@ 163． com。
收稿日期 2011-03-28
猪殃殃(Galium aparine L．)是一种常见麦田杂草，又名
锯锯草、活血草、拉拉藤、八仙草，为茜草科 (Rubiaceae)拉拉
藤属(Galium)草本植物，作为中草药始载于《滇南本草》。传
统医学认为猪殃殃具有清湿热、散瘀、消肿、解毒功能，可用
于治疗淋浊、尿血、跌打损伤、肠痈、疖肿、中耳炎等症，现代
临床可用于肿瘤尤其是白血病的治疗［1］。现代研究表明猪
殃殃可作为治疗肿瘤的中药处方及中药方剂，在这些方剂
中，猪殃殃多为君药，说明其可能含有抑杀肿瘤细胞的祛邪
成分，有进一步开发成相关抗肿瘤新药的潜质，但目前国内
外的研究均未提及其抗肿瘤活性成分［2 －5］。鉴于此，笔者采
用 95%乙醇对猪殃殃回流提取，所得浸膏进行极性梯度分
级，并进行白血病 K562细胞体外抗癌活性检验，为阐明猪殃
殃的抗肿瘤作用及筛选出有效部位奠定基础。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。猪殃殃(Galium aparine L．)全草，2009年
5月采自郑州毛庄，经河南中医学院杨怀霞副教授鉴定为茜
草科(Rubiaceae)拉拉藤属(Galium)草本植物。
1． 1． 2 主要试剂。无水乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、
二甲基亚砜，均为市售分析纯。
1． 1． 3 主要仪器。ZFQ85A旋转蒸发器，由上海医疗专机厂
生产;电热恒温水浴锅，由上海跃进医疗器械厂生产;SHZ-D
循环水式真空泵，由巩义市英峪予华仪器厂生产;PHS3 /3C
型精密酸度计，由上海雷磁仪器厂生产。
1． 2 方法
1． 2． 1 95%乙醇回流提取。称取干燥粉碎至 40目原料 100
g，置于 1 000 ml圆底烧瓶中，用 500 ml 95%乙醇加热回流提
取 2 h，抽滤，得滤液。滤渣重复上述操作，合并滤液，减压浓
缩得浸膏，称重，计算浸膏得率。
1． 2． 2 极性溶剂梯度分级。取 5 次提取所得浸膏，用硅藻
土转出，滤纸包裹，置于索氏提取器中，石油醚脱脂，依次用
乙醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇等溶剂索氏抽取极性分级
(正丁醇用电热套加热，其余用水浴锅) ，每种溶剂处理 12 h，
所得抽取液分别旋转蒸发，蒸去溶剂，所得干物质称重，计算
得率，分别记为产物 A、B、C和 D。
1． 2． 3 定性检测。分别对产物 A、B、C、D 进行糖类、酚类、
黄酮类、醌类、内酯和香豆素类、生物碱、鞣质类、氨基酸多肽
和蛋白质类、有机酸、甾体，三萜及其苷类的化学定性分析。
1．2．4 抗肿瘤活性分析。分别称取产物 A、B、C、D和未分级
浸膏各 0． 05 g，用 200 μl二甲基亚砜溶解，0． 22微孔滤膜过滤
除菌。各取 10 μl分别加入 5 ml培养基稀释，放入 4 ℃冰箱待
用。取处于对数生长期的 K562细胞，以 2 × 105 个 /ml密度接
种于 96空板中，100 μl /孔，设空白对照组，浸膏组和乙醚、二氯
甲烷、乙酸乙酯、正丁醇部位组。待测样品组每孔加入 100 μl
药液，空白对照组加入培养基，每组设置 6个平行。各组细胞
于 37 ℃，5% CO2 的条件下培养 72 h，MTT用 PBS溶解后，加
入到每孔使最终浓度为 0． 5 mg /ml。继续培养 4 h后，小心去
掉孔内培养基，每孔加入 150 μl DMSO使结晶充分溶解，用酶
标仪(Bio-Rad 3350 microplate reader)于570 nm波长测吸光值，
不加细胞液的培养基调零。按下式计算细胞活力:细胞活力 =
(试验组吸光值 /对照组吸光值)×100%。
2 结果与分析
2． 1 浸膏极性分级 猪殃殃 95%乙醇回流提取所得浸膏质
量为 1． 69 g，得率为 1． 69%，极性分级结果见表 1。由表 1可
知正丁醇部位得率最高，其次是二氯甲烷。
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2011，39(20):12149 － 12150 责任编辑 侯美灵 责任校对 况玲玲
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2011.20.177
2． 2 定性检测 不同极性部位定性分析结果见表 2。由表
2可知，乙醚部位主要含有机酸、生物碱、强心苷、甾体或萜类
化合物;二氯甲烷相含有还原糖、酚类、黄酮类、生物碱、有机
酸、强心苷、甾体或萜类化合物;乙酸乙酯相含有还原糖、酚
类、黄酮类、醌类、生物碱、有机酸、强心苷、甾体或萜类化合
物;正丁醇部位含有还原糖、酚类、黄酮类、醌类、生物碱、有
机酸、甾体或萜类化合物成分。
表 1 浸膏极性分级
Table 1 Different polar parts of extractum
试剂名称
Reagent
分级产物
Graded products∥g
得率
Extraction rate∥%
乙醚 Diethyl ether 0． 98 0． 20
二氯甲烷 Dichloromethane 1． 59 0． 32
乙酸乙酯 Ethyl acetate 1． 32 0． 26
正丁醇 Normal butanol 2． 12 0． 38
表 2 不同极性部位定性试验结果
Table 2 Qualitative analysis results of different polar parts
待测成分
Test components
定性试剂
Qualitative
reagent
乙醚
Diethyl
ether
二氯甲烷
Dichloro-
methane
乙酸乙酯
Ethyl
acetate
正丁醇
Normal
butanol
糖类 Saccharides α-萘酚－硫酸 － + + +
斐林试剂 － + + +
三氯化铁 － + + +
酚类 Phenols 铁氰化钾 －
三氯化铁
+ + + +
黄酮类 Flavonoids 盐酸 － 镁粉
试剂
－ + + +
三氯化铝试剂 － + + +
醌类Quinones Borntrager 试剂 － － + +
菲格尔(Fei-
gl)试剂
－ － + +
生物碱 Alkaloid 改良碘化铋钾 + + + +
碘化汞钾 + + + +
碘 －碘化钾 + + + +
鞣质类 Tannins 氯化钠－明胶 － － － －
有机酸Organic acid 溴酚蓝试剂 + + + +
甾体，三萜及其苷
Steroidal，terpene and
nucleotides
硫酸 － 甲醇
试剂
+ + + +
碱性苦味酸 + + + －
内酯、香豆素 Lac-
tone，coumarin
开 环、闭 环
试剂
－ － － －
氨基酸、多肽、蛋白质
Amino acids，peptide
and protein
茚三酮 － － － －
注:“+”表示阳性反应;“－”表示阴性反应。
Note:“+”represented positive reaction;“－”represented negative reaction．
2． 3 抗肿瘤活性分析 按照“1． 2． 4”进行抗肿瘤活性分析，
结果见图 1。由图 1可知，浸膏和各极性部位对 K562细胞的
生长都具有一定的抑制作用，各部位抑制活性均优于浸膏，
其中乙醚﹑二氯甲烷、乙酸乙酯部位抑制活性较强且相差不
大，正丁醇部位抑制作用较弱。
图 1 不同极性部位对 K562细胞活力的影响
Fig． 1 Effects of different polar parts on K562 cell viability
3 结论与讨论
乙醚﹑二氯甲烷、乙酸乙酯部位都含有有机酸、生物碱、
甾体或萜类化合物，这些成分是潜在的抗癌活性成分，其活
性接近，可能是猪殃殃的抗白血病有效成分在这几个极性段
中含量分布比较接近。正丁醇部位仅有微弱的抑制作用，原
因可能是其含抗癌活性成分较少，也可能抗癌活性成分是热
敏性物质，在索氏抽提的过程中被破坏。猪殃殃提取物对白
血病细胞 K562的生长具有一定的抑制作用，其活性成分可
能是有机酸、生物碱、甾体或萜类化合物，对其进行深入研究
对于寻找新的抗癌活性先导化合物，进而开发新型抗肿瘤药
物具有重要意义。
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05121 安徽农业科学 2011 年