全 文 ：实 验 研 究
半边旗提取物 5F注射液对淋巴肉瘤荷瘤小鼠
的抑瘤作用及急性毒性研究
戴滨 ,吴铁 ,崔燎 ,邓亦峰 ,吴科锋
(广东医学院药理教研室 广东天然药物研究与开发实验室 ,广东 湛江 524023)
摘　要:目的:观察半边旗提取物 5F 注射液体内抗肿瘤活性及急性毒性。方法:建立荷瘤鼠动物模型 ,
采用荷瘤小鼠瘤重 、抑瘤率观察提取物 5F注射液对小鼠移植性淋巴肉瘤抑制作用;观察 5F注射液对荷
艾氏腹水癌小鼠的生命延长率;小鼠腹腔注射不同剂量 5F 注射液 ,用药后观察小鼠 1W的反应 ,用 Bliss
计算 LD50 。结果:提取物 5F注射液对小鼠移植性淋巴肉瘤有抑瘤作用:对荷艾氏腹水癌的小鼠生命有
延长作用;提取物5F 注射液对小鼠的 LD50为 414.4mdkg 。结论:半边旗有效成分 5F 具有一定的体内抗
肿瘤活性;对小鼠的毒性作用较低 。
关键词:半边旗;二萜类化合物;小鼠移植性肿瘤;急性毒性
中图分类号:R285.5　　　文献标识码:A　　　文章编号:1002-2392(2006)03-0005-03
收稿日期:2006-1-20
基金项目:国家自然科学基金资助课题(No.39870900)和广东省科委重
大科技攻关项目(No.9622007002)
作者简介:戴滨(1969-),男 ,硕士 ,主治医师 、讲师 ,研究方向:抗肿瘤药
理学。
　　半边旗(Pteris semipininnata L , PsL)属凤尾蕨科植
物 ,广泛分布于南方各省 ,民间常用于治疗蛇伤 、外伤
出血 、菌痢 、肠炎 、肝炎等[ 1] 。本课题组在筛选抗肿瘤
植物药时发现 ,半边旗的乙醇及水提取物显示良好的
体内外抗肿瘤活性[ 2 , 3] ,随后从醇提物中分离纯化得到
5个成分:4F , 5F , 6F ,A 及 B ,经结构鉴定 , B是一个倍
半萜类化合物。其余 4个均为二萜类化合物[ 4] 。经体
外研究证明 ,5F 、6F 、A 有抗肿瘤活性 ,而 4F 、B无此作
用[ 5 ～ 8] 。本文旨在观察半边旗提取物 5F 注射液的抗
肿瘤活性及其毒性 ,为临床应用提供试验依据 。
1　材料和方法
1.1　材料
1.1.1　半边旗有效成分 5F原料药　由天然药物研究
与开发实验室邓亦峰老师提供 ,药物为白色结晶 ,其中
5F 含量 46%,其余为 4F ,药物中不含 6F。
1.1.2　半边旗有效成分的提取　半边旗全草 5kg ,洗
净风干 ,以体积分数为 95%的乙醇回流提取 3 次 ,合
并提取液 ,减压浓缩至原体积的 1 3 ,上活性碳柱 ,以
EtOH-CHCl3(10∶1)洗脱 ,减压浓缩得淡黄色固体
(120g)。取此固体 10g ,经硅胶柱层析 ,以氯仿-甲醇
系统分段洗脱 ,在CHCl3-CHCl3OH(90∶2 ～ 90∶6)洗脱
部分分别得到 6F(99.7mg), B(60mg), 4F(80.7mg), 5F
(9.5g)及A(200mg)。
1.1.3　动物和瘤株　清洁级昆明种小白鼠 18 ～ 22g ,
雌雄各半 ,购自广东医学院实验动物中心;淋巴肉瘤 、
艾氏腹水癌购自中山医科大学 ,本教研室传代 。
1.1.4　试剂　5-FU 上海旭东海普药业有限公司生
产;丙氨酸转氨酶(ALT GPT)测定试剂盒购自宁波市
慈城生化试剂厂;门冬氨酸基转移酶(AST GOT)测定
试剂盒购自宁波市慈城生化试剂厂;尿素氮测定试剂
盒购自上海名典生物工程有限公司 。
1.2　方法
1.2.1　荷瘤小鼠模型 、抑瘤作用 、白细胞数及肝肾功
能　小鼠移植瘤接种方法参考药理实验方法[ 9] ,实验
之0d ,取接种于昆明小鼠腹腔内 8 ～ 10d的含瘤细胞腹
水制成 1 ～ 2×107 ml细胞悬液 ,每只小鼠右腋下皮下
接种 0.2ml ,瘤株细胞悬液进行细菌培养。第 1d检查
瘤细胞培养情况 ,确定无污染后将小鼠随机分组 ,每组
10只 ,每日小鼠在电子天平(Acs-3D)上称重后 ,按体
重腹腔每日上午给药 1次 ,连续给药 10d。11d 小鼠称
体重 、眼球取血 、分离瘤块 、肝脏 、脾脏 、胸腺在电子天
平(JHANGPING FA21.4S)称重。
抑瘤率=(对照组瘤重-用药组瘤重) 对照组瘤
重×100%
光镜下计算白细胞数 ,按试剂盒要求检测丙氨酸
转氨酶(ALT GPT);门冬氨酸基转移酶(AST GOT);尿
素氮 。
1.2.2　腹水瘤模型及生命延长作用观察　小鼠移植
瘤接种方法参考药理实验方法[ 9] ,实验之 0d ,选择腹
腔接种艾氏腹水癌细胞后 8d 的小鼠 ,抽取含瘤腹水 ,
·5·中医药学报 2006 年第 34卷第 3 期
用生理盐水配制成 1.5×107 ml瘤液 ,在无菌条件下于
小鼠腹腔接种 0.2ml瘤细胞悬液 ,液瘤细胞悬液做细
菌培养。实验第 ld ,检查瘤细胞培养情况 ,未见污染 ,
动物随机分成 5组。每日腹腔注射给药 1次 ,共 10d。
给药结束后停药 ,每日观察记录小鼠一般药理反应及
死亡情况 ,对未见瘤株生长的动物给予剔除。
生命延长率=(用药组生存时间-对照组生存时
间) 对照组生存时间×100%
1.2.3　5F 注射液的 LD50测定　分为预试验和正式试
验 ,预试验找到大致剂量范围后 ,进行正式试验 ,正式
实验将小鼠随机分成 6组 ,每组 10只 ,雌 、雄各半 ,药
物浓度按等比递增 ,分别为:(96.04 、137.2 、196 、280 、
400 、570)mg·kg-1 ,一次性腹腔注射给药 ,给药后立即
观察动物反应情况 ,在24h内多次观察 ,以后每天观察
1次以上 ,连续观察 7d ,记录动物毒性反应情况和死亡
动物分布 ,死亡动物及时进行尸检 ,记录病情变化具体
指标参照药理实验方法学要求 ,结果用 Bliss统计方法
计算 LD50值。
2　结果
2.1　提取物 5F对荷瘤小鼠的抑瘤作用　表 1结果显
示 ,提取物 5F 注射液对荷瘤小鼠肿瘤生长有抑制作
用 ,3个剂量组的 5F 溶液对淋巴肉瘤的抑瘤率分别是
44.8%、38.8%、31.8%,差异有显著性。
表 1　提取物 5F对淋巴肉瘤荷瘤小鼠的抑瘤作用　( x±SD)
组别 N 剂量(mg kg) 初次体重(g) 末次体重(g) 瘤重(g) 抑瘤率(%)
对照组 10 20.3±1.32 27.6±1.65 1.31±0.45 -
5-FU 10 10 20.6±1.45 25.3±1.43＊＊ 0.630±0.25＊＊ 51.9＊＊
5F 10 50 20.9±1.35 27.4±1.56 0.723±0.28＊＊ 44.8＊＊
5F 10 25 21.0±1.40 26.8±1.64 0.802±0.27 38.8＊
5F 10 12.5 20.5±1.38 27.5±1.53 0.893±0.35 31.8＊
　　＊P<0.05;＊＊P<0.01VS cont rol
表 2　提取物 5F对荷艾氏腹水癌
小鼠的生命延长作用　( x±SD)
组别 N 剂量(mg kg) 生存时间(d) 生命延长率(%)
对照组 10 10 13.5±1.60 -
5FU 10 50 28.1±6.83 108.1＊＊
5F 10 50 23.3±8.65 72.6＊＊
5F 10 25 18.2±3.40 34.8＊
5F 10 12.5 15.8±1.49 17.0＊
　　＊P<0.05 , ＊＊P<0.01 VS control
2.2　提取物 5F对荷艾氏腹水癌小鼠生命延长作用　
表2结果显示 ,提取物 5F对荷艾氏腹水癌的小鼠生命
有延长作用 ,3个剂量组的 5F 溶液对荷艾氏腹水癌小
鼠的生命延长率是 72.6%、34.8%、17.0%,差异有显
著性 。
2.3　提取物 5F 注射液对荷瘤小鼠白细胞数 、肝肾功
能的影响　表 3 显示荷瘤小鼠在 5F 注射液治疗 10d
结束后 ,与阳性对照药 5-FU相比较 ,5F 注射液组白
细胞数没有降低 ,尿素水平正常 , 3个剂量组荷瘤小鼠
ALT 、AST均有不同程度的增高 ,与阳性对照药 5-FU
基本相似 。
表 3　提取物 5F注射液对荷瘤小鼠白细胞 、肝肾功能的影响　( x±SD)
组别 剂量(mg kg) 白细胞数(×109 L) ALT(国际单位) AST(国际单位) 尿素(mmol L)
对照组 11.5±2.32 23.4±0.271 105.6±27.5 6.50±0.963
5-FU 10 7.68±2.04＊＊ 43.5±4.09＊＊ 213.1±19.8＊＊ 7.58±0.686＊
5F 25 10.5±3.15 42.7±4.85＊＊ 189.2±18.1＊＊ 6.68±0.539
5F 50 12.4±2.56 39.9±0.926＊＊ 198.1±39.5＊＊ 6.34±0.856
5F 100 11.5±3.20 60.9±3.64＊＊ 250.3±38.9＊＊ 5.88±1.14
　　＊P<0.05;＊＊P<0.01 VS control
2.4　LD50测定结果　小鼠腹腔给药后立即出现兴奋 ,
活动增多 ,呼吸加快 400mg kg 、570mg kg 组动物出现缓
慢抽搐 ,最高剂量组 3只小鼠口腔有出血 , 2h 后所有
动物转入抑制状态 , 活动减少 , 瞌睡 , 呼吸减慢。
570mg kg组 24h内动物有 8只死亡 ,48h内总共死亡 9
只 ,以后未发生死亡 。400mg kg 组 24h内有 2只死亡 ,
48h内总共死亡 4 只 ,以后未发生死亡。其余组动物
均未发生死亡。死亡动物解剖 ,除 3只动物胃内有少
量血液外 ,其余动物大体标本未见明显异常 。死亡动
物分布见表4 ,PS-5F 半数致死量为414.4mg kg 。
回归方程为:Y=-16.65+8.291X(r=0.994)
置信系数α=0.05时的置信区间为:168.9mg kg≤
LD50≤990.6mg kg
表 4　提取物 5F注射液对小鼠急性毒性(LD50)
药量(mg kg) 　　　　LD50(mg kg)
96.04 137.2 196 280 400 570
实验动物数 10 10 10 10 10 10
死亡动物数 0 0 0 1 4 9 414.4
·6· ACMP.Aug , 2006 , Vol.34 , No.3
3　讨论
半边旗的抗肿瘤作用为本课题组首次发现 ,崔燎
等最早报道其乙醇及水提取物显示良好的体内外抗肿
瘤活性 ,随后在梁念慈教授的主持下对半边旗有效成
分及其抗肿瘤作用进行系统研究 ,从醇提物中分离纯
化得到 5个成分:4F , 5F ,6F ,A及 B ,经结构鉴定 , B是
一个倍半萜类化合物 。其余 4个均为二萜类化合物。
体外研究证明 ,5F 、6F 、A 有抗肿瘤活性 ,而 4F 、B无此
作用 。其中5F 含量最高 ,体外试验显示良好的抗肿瘤
活性 ,经一定的工艺将其制成注射剂 ,希望能成为临床
新药 。
从5F 注射液对荷淋巴肉瘤小鼠的抑瘤实验中可
见 ,提取物 5F 注射液对荷瘤小鼠肿瘤生长有抑制作
用 ,3个剂量组的 5F 注射液对淋巴肉瘤的抑瘤率分别
是44.8%、38.8%、31.8%,差异有显著性。本实验中
我们还能观察到 5F 注射液组荷瘤小鼠形成可触及的
瘤体时间较对照组晚 2 ～ 3d ,早期抑瘤作用明显 ,后期
形成明显肿瘤后与对照组的差异缩小 ,5F 注射液抗肿
瘤作用是肯定的 ,具有开发的价值 ,虽然抑瘤作用与阳
性药 5-FU还有差异 ,但我们还未了解其与常用抗肿
瘤药物的相互作用 ,或者作为先导药物 ,通过改变剂型
或结构提高疗效 。
在5F 注射液对荷艾氏腹水癌小鼠生命延长作用
中可见 ,3个剂量组的5F 溶液对荷艾氏腹水癌小鼠的
生命延长率是 72.6%、34.8%、17.0%,差异有显著性 ,
表明 5F注射液可以延长荷艾氏腹水癌小鼠生命。生
命延长作用好于抑瘤作用可能是因为本注射剂通过腹
腔给药 ,药物直接作用于艾氏腹水癌细胞有关 ,不同于
一般中药灌胃给药途径。
对小鼠的毒性研究显示 , 5F 注射液对小鼠的 LD50
为414.4mg kg ,毒性相对较小 ,同时观察到荷瘤小鼠用
药10d后肝功能受到一定的影响 ,与阳性对照药相似 ,
有效剂量下未观察到对肾功能有影响 。5F 注射液最
显著的优点可能是对荷瘤小鼠白细胞数没有影响 ,而
用药过程中显著降低病人的白细胞数正是目前常用抗
肿瘤药物的最常见不良反应。
本实验的结果说明 ,半边旗提取物 5F注射液对动
物移植瘤具有抗瘤活性 ,对小鼠的毒性较低 ,对荷瘤小
鼠白细胞数没有明显影响 ,是值得开发的新药或先导
药物 。
参考文献:
[ 1] 　丁恒山.中国药用孢子植物[ M] .上海:上海科学技术出版社 ,
1982.104.
[ 2] 　崔燎 ,梁念慈 ,陈志东 ,等.半边旗体内外抗癌作用及急性毒性研
究[ J] .中国药材 , 1996 , 19(1):29-32.
[ 3] 　张晓 ,崔燎 ,田中信寿 ,等.半边旗有效成分及抗肿瘤活性研究[ J] .
中国药学杂志 , 1997 , 32(1):37-8.
[ 4] 　张晓 ,李金华 ,何承伟 ,等.半边旗中二萜化合物的植化及抗肿瘤
活性初步研究[ J] .中国药学杂志 ,1999 , 34(8):512-514.
[ 5] 　崔燎 ,张晓 ,梁念慈 ,等.一种新二萜类化合物的体外抗肿瘤研究
[ J] .中国药理学通报 , 1998 , 14(1):50-2.
[ 6] 　何承伟 ,梁念慈 ,莫丽儿,等.半边旗提取物对 HL-60细胞的细胞
毒作用及对细胞周期的影响[ J] .肿瘤防治杂志 , 2001 , 8(4):348-
350.
[ 7] 　何承伟 ,梁念慈 ,莫丽儿,等.半边旗抗肿瘤有效成分对HL-60细
胞及淋巴细胞的体外杀伤作用及其构效关系[ J] .中草药 , 1999 , 30
(增刊):117-118.
[ 8] 　李金华 ,梁念慈 ,莫丽儿 , 等.半边旗 5种成分体外细胞毒活性比
较及构效关系分析[ J] .药学学报 ,1998 , 33(9):641-644
[ 9] 　徐叔云 ,卞如濂 ,陈修.药理实验方法学[ M] .第 2版.北京:人民卫
生出版社 , 1991.1426-8.
孔圣枕中丹对痴呆大鼠海马区神经元
GFAP 、GDNF 、GDNFmRNA 表达的影响
季旭明1 ,张鸿婷2＊
(1.山东中医药大学 ,山东 济南 250014;黑龙江中医药大学 ,黑龙江 哈尔滨 150040)
摘　要:目的:研究孔圣枕中丹对痴呆模型动物海马区神经元GFAP、GDNF 、GDNFmRNA表达的影响 。方
法:复制VD大鼠模型 ,免疫组织化学法观察GFAP、GDNF的表达 ,原位杂交技术观察 GDNFmRNA表达。
结果:孔圣枕中丹能增强 VD大鼠脑海马神经元 GFAP 、GDNF 、GDNFmRNA 表达 。结论:孔圣枕中丹通过
增强VD大鼠脑海马神经元 GFAP 、GDNF 、GDNFmRNA表达而达到神经保护作用。
关键词:孔圣枕中丹;GFAP;GDNF
中图分类号:R285.5　　　文献标识码:A　　　文章编号:1002-2392(2006)03-0007-02
收稿日期:2005-10-01
基金项目:山东省中医药管理局(2005-131)
作者简介:季旭明(1972-),女 ,内蒙古人 ,讲师 , 医学博士 , 主要从事复
方药理学研究。
＊通讯作者:张鸿婷 , 0451-82132190。
　　孔圣枕中丹出自《备急千金要方》 ,方由龟板 、龙
骨 、菖蒲 、远志组成 ,功能宁心益智 ,潜镇安神 。实验研
究已表明 ,能明显提高痴呆模型动物的学习记忆能力 ,
本文研究孔圣枕中丹对痴呆大鼠海马神经元 GFAP 、
GDNF 及其 mRNA表达的影响 ,并深入研究其神经保
护作用。现报告如下 。
·7·中医药学报 2006 年第 34卷第 3 期