全 文 ：第20卷 第11期
Vol.20 No.11
2014年 10月
October.2014Guiding Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy
复方溪黄草颗粒由溪黄草、余甘子、布渣叶、白花蛇舌草
等中药材经加工制成，具有清热利湿，健脾消滞。可用于肝胆
湿热、脾胃失运型急性肝炎所致的黄疸，胁胀不舒或疼痛，食
欲不振，倦怠乏力等症状的改善。方中溪黄草具有抗肝炎，抗
氧化、抗菌等作用，是复方溪黄草颗粒的主要成分 [1]。溪黄草
所含有的咖啡酸具有广泛的抑菌、抗病毒，抗氧化作用，与溪
黄草的作用一致[2]。目前尚无复方溪黄草颗粒咖啡酸含量测
定的文献报道，为一步研究复方溪黄草颗粒的质量控制方
法，本文建立了HPLC法测定复方溪黄草颗粒中咖啡酸的含
量测定方法，从而为复方溪黄草颗粒质量控制提供参考。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Shimadzu LC-10AT高效液相色谱仪（日本岛津
公司），Shimadzu SPD-10AT紫外检测器（日本岛津公司），Di－
amonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μl)色谱柱；BP221D电子天平（北
京赛多利斯天平有限公司），AS5150BD-1超声仪（天津奥特
赛恩斯仪器有限公司）。
1.2 试药 复方溪黄草颗粒（市售，10 g/袋，批号：120304、
120507、120611）；咖啡酸对照品（中国药品生物制品检定所，
110885-200102）；甲醇为色谱纯、水为双蒸水，其它试剂均为
分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验 以Diamonsil C18 (250 mm×
4.6 mm，5 μL)为色谱柱；以甲醇-磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢
钠1.56 g加水使溶解成1000 mL，再加磷酸溶液调pH＝4.0，20∶80）
为流动相；流速为1.0 mL·min-1；检测波长为323 nm；柱温为
25 ℃；进样量：20 μl。按本色谱条件测定，结果供试品中咖啡
酸与邻近组分色谱峰的分离度大于1.5，理论塔板数按咖啡酸
峰计不少于3000。
2.2 对照品溶液的制备 取咖啡酸对照品适量，精密称定，
加甲醇制成每1 mL含26 μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备 取本品约0.8 g，精密称定，置具塞
锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，超声30 min，放冷，
再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，
即得。
2.4 阴性对照品溶液的制备 按处方比例和样品制备工艺
制成缺溪黄草的阴性对照品，再按“2.3”项下供试品溶液的制
HPLC法测定复方溪黄草颗粒中咖啡酸的含量
丘 玮，李芳桂
（翁源县人民医院，广东 翁源 512600）
[摘要] 目的：建立复方溪黄草颗粒中咖啡酸含量测定的方法。方法：采用HPLC法，色谱柱：Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，
5 μL)，流动相：甲醇-0.01 mol·L-1磷酸二氢钠溶液（pH值＝4.0，20∶80)，检测波长323 nm，流速：1.0 mL·min-1，柱温：25℃。结果：咖啡
酸在10.56-105.6 μg的浓度范围呈良好的线性关系，r=0.9998。平均回收率为99.95%，RSD%为1.08%。结论：该方法简便、准确、重
现性好，可用于复方溪黄草颗粒的质量控制。
[关键词] 复方溪黄草颗粒；咖啡酸；HPLC
[中图分类号] R284.1 [文献标识码] B [文章编号] 1672-951X（2014）11-0098-02
Determination of Caffeic Acid in Fufang Xihuangcao Granules by HPLC
QIU Wei, LI Fang-gui
(Wengyuan Peoples Hospital, Wengyuan Guangdong 512600)
[Abstract] Objective: To establish a high performance liquid chromatographic (HPLC) method for the determination of Caf－
feic Acid in Xihuangcao Granules. Methods: The HPLC was used; the chromatographic column was Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,
5 μL); the mobile phase was acetonitrile-0.1% phosphoric acid (80∶20)with the flow rate of 1.0 mL·min-1, and detection wave－
length was 323 nm and column temperature was kept at 25℃. Results: Caffeic Acid showed a good linearity in the range of 10.
56-105.6 μg, and the average recovery was 99.95% (RSD=1.08%). Conclusion: The method is simple and accurate with good re－
producibility, and can be used for the quality control of Fufang Xihuangcao granules.
[Key words] Fufang Xihuangcao granules; Caffeic Acid; HPLC
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DOI:10.13862/j.cnki.cn43-1446/r.2014.11.041
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2014年 10月
October.2014
备方法制成阴性样品溶液。
2.5 专属性试验 分别精密取对照品溶液，供试品溶液和阴
性对照品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，得HPLC图谱。按
“2.1”项下色谱条件测定。阴性样品在咖啡酸保留时间位置上
无干扰峰。（见图1）
A.对照品
B.供试品
C.阴性对照品
图 1 复方溪黄草颗粒 HPLC图（1-咖啡酸）
2.6 线性关系考察 精密称取咖啡酸对照品10.56 mg，置
100 mL量瓶中，加甲醇至刻度，作为对照品溶液。精密吸取上
述对照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL，分别置10 mL量
瓶中，分别加入甲醇定容至刻度。分别吸取上述对照品溶液
20 μL注入液相色谱仪，测得峰面积。以咖啡酸对照品的浓度
为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程
Y=64.591X+6.702，r=0.9998，结果表明咖啡酸浓度在10.56-
105.6 μg之间，与峰面积呈良好的线性关系。
2.7 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液，重复进样6次，
每次20 μL，按“2.1”项下色谱条件测定，结果以咖啡酸峰面积
计算，RSD%为1.6％，表明仪器精密度良好。
2.8 稳定性试验 取同一份供试液，进样，测定峰面积，然后
分别于2、4、6、8 h各进样1次，测得其咖啡酸峰面积，结果RSD%
=1.4%，表明供试品在8 h内具有良好的稳定性。
2.9 重现性试验 取同一批样品，照供试品溶液制备项下方
法，平行制备6份供试品溶液，分别测定，测得其咖啡酸含量
的平均值为2.58 mg·g-1，RSD%=0.6%，结果表明本方法重现性
良好。
2.10 加样回收率试验 取已知含量的同一批供试品（批号：
120304，含咖啡酸2.58 mg·g-1）0.4 g，精密称定，共6份，分别精
密加入咖啡酸对照品溶液，按“2.3”项下供试品溶液制备方法
提取，测定，计算回收率。结果平均回收率为99.95%，RSD%=
0.49%。（见表1）
表 1 6份样品加样回收率试验结果
样品量(g) 样品中含有量(mg) 对照品加入量(mg) 测定值(mg) 回收率(%) 平均值(%)RSD(%)
0.4032 1.04031.056 2.0863 99.05
0.4011 1.03481.056 2.0899 99.91
0.4022 1.03771.056 2.0987 100.47
0.4014 1.03561.056 2.0906 99.91
0.4002 1.03251.056 2.0895 100.09
0.4008 1.0341.056 2.0931 100.28
2.11 样品测定 取3批样品，按“2.3”项下方法制备供试品
溶液，分别精密吸取供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，
测定咖啡酸的含量。（见表2）
表 2 3批样品含量测定结果
样品批号 咖啡酸平均含量(mg·g-1) RSD（%）
120304 2.58 1.05
120507 2.32 1.11
130611 2.46 1.21
3 讨 论
提取溶剂的考察，分别用甲醇、50％甲醇、乙醇超声提取，
试验结果表明用甲醇提取较完全，咖啡酸峰形及对称性较
好。试验比较加热回流，索氏提取，超声3种提取方法的效果，
发现超声提取效率较高，峰形及对称性较好。通过对甲醇用
量和超声提取时间的考察，发现用甲醇50 mL，提取30 min，咖
啡酸提取较完全。
流动相的选择，试比较乙腈－0.3％磷酸（80∶20）和甲醇-
磷酸盐缓冲液（pH＝4.0，80∶20）作为流动相的分离效果，结果
发现以甲醇-磷酸盐缓冲液（pH＝4.0，80∶20）所得峰形较好，可
获得较高的理论塔板数，主峰、杂质峰能与基线达到分离，经
方法学试验证明，此方法简便，专属性好，回收率高，可有效
控制复方溪黄草颗粒的质量，以保证临床疗效稳定。
参考文献
[1] 广东省食品药品监督管理局.广东省中药材标准册[M].广
州：广东科技出版社，2004：204.
[2] 谢兴亮，盛艳梅.溪黄草的研究进展[J].医药导报，2011，30
(4)：494.
（收稿日期：2013-12-26 编辑：李海洋）
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