全 文 ：　　　　　　　　　　　　　　　　　中国民族医药杂志　　　　　　　　　　　　　　2009年 5月第 5期
刻度 , 摇匀。吸取上述溶液 0.0、 1.0、2.0、 3.0、4.0、 5.0、 6.
0、7.0、8.0ml分别置于 25ml容量瓶中 , 各加入 5%NaNO2
溶液 1ml摇匀 , 放置 6min, 加 10%Al(NO3)3溶液 1ml, 摇
匀 , 放置 6min,加 4%NaOH溶液 10min,用 60%乙醇稀释至
刻度 ,摇匀 , 放置 15min。以 0号作空白 , 分别在 500nm处测
定吸收度 , 绘制标准曲线 , 得回归方程 C=0.0041 +0.
1125A, r=0.9997。
2.4.3　样品含量测定:取硬毛棘豆地上部分的粗粉约 1g
于 60℃干燥 6h,精密称定 , 用 40ml70%乙醇浸泡 12h, 加热
回流提取 3次 , 每次 2h, 抽滤 , 合并滤液 , 并用少量 70%乙
醇洗涤容器 , 洗液并入滤液中 , 在浴上蒸馏 , 除去醇液。提
取液用石油醚脱脂 3次 , 水液浓缩至浆状液 ,用 60%乙醇适
量溶解 , 过滤至 100ml容量瓶中 ,洗涤 ,合并滤液与洗液 ,用
60%乙醇定溶至刻度 , 摇匀。精密量取 5ml置 25ml容量瓶
中 , 按标准曲线制备项下自 “加入 5%NaNO2”起 , 依法操作。
测得硬毛棘豆地上部总黄酮平均含量为 8.7625mg/g,见表
1。
表 1　样品含量的测定
样品号 取样量(g) 含量(mg/g) X±S RSD(%)
1 1.0020 8.7438
2 1.0018 8.6875
3 1.0021 8.8563 8.7625±0.09 0.98
2.4.4　回收率实验:取样品提取液 3份 ×2ml, 分别置于
25ml容量瓶中 , 各加入标准品溶液 2ml, 然后自标准曲线制
备项下 “各加入 5% NaNO2 溶液 1ml”起依法操作 , 求得地
下部分的平均回收率为 97.59%, RSD=0.70%,见表 2。
表 2　样品回收率的测定
样品号加入量(mg)
样品量
(mg)
测得量
(mg)
平均回收
率(%) X±S
RSD
(%)
1 0.016 0.0174 0.0325 97.31
2 0.016 0.0149 0.0300 97.09
3 0.016 0.0145 0.0300 98.36 97.59±0.68 0.70
3　讨　论
研究结果表明 ,蒙药硬毛棘豆的显微鉴别特征明显;有
效成分含有生物碱类 、皂甙类 、黄酮类化学成分等 , 其中生
物碱类 、皂甙类成分首次检出报道。
含量测定结果表明 , 总黄酮的含量为 8.7625mg/g, RSD
=0.98%, 平均回收率为 97.59%。
本项目建立的方法简便 、准确 、重复性好 , 可用于硬毛
棘豆的质量控制。
参考文献
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学技术出版社 , 1987.410.
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的测定〔J〕.中国民族医药杂志 , 1998, 2:47.
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的比较研究〔J〕.中国医药杂志 , 1998,增刊:66-67.
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社 , 1987.22-24.
2008年 12月 8日收稿
藏药材猪殃殃质量标准研究
四川省中医药科学院(成都 610041)　陈　燕　刘倩伶　德　吉＊　刘云华　易进海＊＊
摘　要:目的:建立猪殃殃药材中绿原酸的薄层色谱鉴别与含量测定方法。方法:采用 TLC法对猪殃殃进行鉴别;采用 HPLC
法测定绿原酸含量 , 色谱条件为:色谱柱:PhenomenexLunaC18(4.6mm×150mm, 5μm);流动相:乙腈 -0.4%磷酸溶液(10:
90);检测波长:327nm;流速:1.0ml/min;柱温:35℃。结果:各批猪殃殃药材 TLC色谱中均能检出绿原酸;绿原酸 HPLC色谱
峰与其它色谱峰分离良好 ,进样量在 0.0892 ～ 0.4460μg范围内 , 呈良好线性关系(r=0.9997), 平均回收率为 96.99%, RSD
=1.17%(n=6)。结论:本法简便快捷 , 结果可靠 ,为控制猪殃殃药材的质量提供参考 。
关键词:猪殃殃;薄层色谱鉴别;绿原酸;高效液相色谱法
中图分类号:R291.4　文献标识码:B　文章编号:1006-6810(2009)05-0040-03
　　猪殃殃藏语名 “桑子嘎布”, 系茜草科 Rubiaceae植物猪
　　作者简介:陈燕(1964-),女 ,学生 , 副研究员 , 研究方向:中药新药研发工作。　＊西藏自治区藏医医院(拉萨 850000)　＊＊通讯作者:易进海(1963-),博士 ,研究员 ,研究方向:天然药物化学及新药研发工作。电话:028-85210843。 Email:yijinhai@Yahoo.com.cn
殃殃 GaliumaparineL.干燥全草 , 为藏族习用药材。猪殃殃
性寒 ,味辛 , 具有清热 ,消炎 , 利胆之功效 ,用于治疗胆病 、伤
口化脓 、骨病及脉热 、遗精等症 〔1〕。药材中主要含苯丙素
类化合物和环烯醚萜苷等化学成分 〔2 , 3〕 , 其中绿原酸为其主
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DOI :10.16041/j.cnki.cn15-1175.2009.05.017
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要活性成分之一 , 药理显示绿原酸具有良好的抗菌 、抗炎 、
解热 、抗病毒 、抗氧化剂及自由基等作用 〔4 , 5〕。这一特定成
分与猪殃殃药材的功能主治相吻合。由于猪殃殃的质量研
究尚未见报道 ,为了全面 、综合地评价这一药用植物 , 更好
地控制药材质量 , 开发传统藏药材的潜力 , 我们建立了猪殃
殃药材中绿原酸的簿层鉴别及高效液相色谱方法。
1　仪器与试药
1.1　仪器:Waters高效液相色谱仪:包括 Waters1525泵 ,
2487双通道紫外检测器 , Waters柱温箱 , Breeze液相色谱工
作站。 Brasson超声清洗仪 , KQ-100型超声波清洗仪 , 塞
多利斯 BP211D十万分之一电子分析天平。
1.2　试剂与样品:绿原酸对照品(批号 110753-200413;中
国药品生物制品检定所 , 供含量测定用)。猪殃殃药材 6
批 , 由西藏自治区藏医院提供 ,经四川省中药研究所生药室
舒光明研究员鉴定为茜草科 Rubiaceae植物猪殃殃 Galium
aparineL.干燥全草。乙腈为美国 Tedia色谱纯 , 水为超纯
水 , 硅胶 G(青岛海洋化工厂),其它试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　薄层鉴别:取 6批本品粗粉 0.2g, 加甲醇 5ml, 超声处
理 20分钟 ,滤过 , 滤液作为供试品溶液。另取绿原酸对照
品 , 加甲醇制成每 1ml含 0.2mg的溶液 ,作为对照品溶液。
照薄层色谱法(中国药典 2005年版一部附录 VIB)试验 , 吸
取上述 7种溶液各 1μl,分别点于同一聚酰胺薄膜板上 , 以
醋酸为展开剂 , 展开 ,取出 , 晾干 ,置紫外光灯(365nm)下检
视。供试品色谱中 ,在与对照品色谱相应的位置上 , 显相同
颜色的荧光斑点。见图 1。
图 1　猪殃殃药材 TLC图谱
1～ 6猪殃殃药材　7绿原酸对照品
2.2　绿原酸的含量测定
2.2.1　色谱条件:色谱柱:PhenomenexLunaC18(2), 4.6mm
×150mm, 5μm;柱温:35℃;流动相:乙腈 -0.4%磷酸溶液
(10:90);检测波长:327nm;流速:1.0ml· min-1;进样量
5μl理论板数按绿原酸峰计算应不低于 2500。 在此色谱条
件下 , 绿原酸对照品 、猪殃殃药材的 HPLC图谱见图 2。
图 2　猪殃殃药材绿原酸含量测定 HPLC图谱
2.2.2　线性关系:精密称取绿原酸对照品 11.15mg, 置
25ml棕色量瓶中 , 加 50%甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀。
精密量取 1ml, 置 10ml棕色量瓶中 , 加 50%甲醇稀释至刻
度 ,摇匀 , 即得(10℃以下保存)。分别精密吸取上述对照品
溶液(0.0446ml· min-1)2、4、6、 8、 10μl, 注入液相色谱仪中
测定。结果绿原酸在 0.0892 ～ 0.4460μg范围内呈良好线
性关系 ,以进样量(μg)为横坐标 , 峰面积为纵坐标作回归
曲线 , Y=2978884.5X-8965.9, r=0.9997。
2.2.3　供试品溶液的制备 〔6〕:取本品粉末(过三号筛)约
0.6g, 精密称定 ,置具塞锥形瓶中 , 精密加入 50%甲醇 50ml,
密塞 ,称定重量 , 超声处理(功率 100W, 频率 40Hz)30min,
放冷 ,再称定重量 , 用 50%甲醇补足减失的重量 , 摇匀 , 滤
过。精密量取续滤液 5ml, 置 10ml棕色量瓶中 , 加 50%甲醇
稀释至刻度 ,摇匀 , 即得。
2.2.4　精密度实验:取供试品溶液(批号:01), 重复测定 5
次;结果精密度好 , RSD为 0.44%(n=5)。
2.2.5　重复性实验:取样品粉末(批号:01)照 2.2.3项下
方法分别制成供试品溶液 5份 , 依法测定 ,结果重复性好 ,
绿原酸的含量为 0.6342%, RSD为 1.21%(n=5)。
2.2.6　稳定性实验:取供试品溶液(批号:01), 于室温放置
24小时后依法测定 ,结果稳定 , RSD为 0.47%(n=6)。
2.2.7　加样回收率实验:分别取已知绿原酸含量的样品
(批号:01, 0.6342%)0.3g,精密称定 , 分别准确加入 2.4、3.
0、3.6ml的绿原酸对照品溶液(0.6232ml· min-1), 照 2.2.
3项下方法制成供试品溶液。依法测定 ,结果见表 1。
2.2.8　样品含量测定:样品 6批 , 分别依 2.2.3项下方法
制成供试品溶液 ,依法测定 ,绿原酸含量测定结果见表 2。
3　小结与讨论
3.1　供试品溶液制备中 , 曾对甲醇 、 50%甲醇提取溶剂进
行优选 ,结果发现甲醇提取样品中绿原酸含量为 0.48%
(01), 其提取效果大大低于 50%甲醇提取 , 故选择 50%甲
醇为该样品的提取溶剂。
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表 1　加样回收率测定结果(n=6)
样品称量
(g)
样品中绿原酸量
(mg)
添加对照品
(ml)
相当于绿原酸量
(mg)
测出绿原酸量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
0.3026 1.9191 2.4 1.49568 3.3859 98.07
0.3255 2.0642 2.4 1.49568 3.5022 96.14
0.3379 2.1430 3.0 1.8696 3.9241 95.27 96.99 1.17
0.3069 1.9464 3.0 1.8696 3.7691 97.49
0.3282 2.0814 3.6 2.24352 4.2829 98.13
0.3156 2.0015 3.6 2.24352 4.1742 96.84
表 2　猪殃殃药材中绿原酸含量测定(n=3)
编号 绿原酸含量(%) RSD(%)
01 0.6342 1.21
02 0.5220 1.33
03 0.3359 1.09
04 0.5593 1.19
05 0.4037 1.22
06 0.5632 1.12
3.2　猪殃殃的薄层色谱鉴别 , 曾以 2005年版一部金银花
药材的 TLC展开条件对样品进行鉴别 , 发现 Rf值太低 , 斑
点间分离度较差 , 经反复试验 , 采用聚酰胺薄膜板 , 以醋酸
为展开剂 , 展开后效果较好 , 薄层斑点清晰 、明确。此法方
便 、快捷。
3.3　首次测定了猪殃殃药材中绿原酸的含量 , 方法简便 、
准确 、重复性好 , 可作为猪殃殃药材质量控制的参考方法。
参考文献
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海:上海科学技术出版社 , 2001.309.
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2008年 12月 15日收稿
StudyonQualityControlofGaliumaparine
ChenYan, LiuQian-ling, Deji, LiuYu-hua, YiJin-hai
SichuanAcademyofChineseMedicineSciences(Chengdu610041)
Abstract:Objective:ToestablishmethodsfordeterminationandtheTLCidentificationofchlorogenicacidinGa-
liumaparine.Methods:TLCandHPLCwereadoptedtoidentifyanddetermineGaliumaparine.Thechromato-
graphicconditionswere:PhenomenexLunaC18(2), (4.6mm×150mm, 5μm)columnasanalyticcolumn;Acetoni-
trile-0.4%H3PO4 watersolution(10:90)asmobilephase;detectionwavelengthat327nm;columntemperature
at35℃;flowrateat1.0ml· min-1.Results:chlorogenicacidwasidentifiedbyTLCanddeterminedbyHPLC.
Thelinerrangeofchlorogenicacidwas0.0892 ～ 0.4460μg, r=0.9997.Theaveragerecoverywas96.99%, RSD
=1.17%.Conclusion:Thesemethodsaresimple, accurate, reproducibleandcanbeusedtoenhancethequality
controlofthisdrug.
Keywords:Galiumaparine;TLCidentification;Chlorogenicacid;HPLC;determination
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