全 文 ：— 6 — 现代中药研究与实践2012年第26卷第5期Chin Med J Res Prac,2012 July.,Vol.26 No.5
产干品 12 134.19 kg，较种植 2 年生云木香（B 处理）
的增产 38.25%，较种植 1 年生云木香（A 处理）的
增产 446.40% ；种植 2 年生云木香（B 处理）的产量
较种植 1 年生云木香（A 处理）的增产 295.22%。
结合田间观察，种植 1 年生云木香经济产量和折
干率，均低于种植 2 和 3 年生木香 ；种植 2 年生云木
香高于 1 年生，低于 3 年生的产量 ；折干率高于 1 和
3 年生，其主要原因是 2 年生木香根茎较坚实无空心；
种植 3 年生云木香产量最高，折干率稍低于种植 2 年
生云木香，究其原因，主要是 3 年木香根茎有部分形
成空心，对产量有一定影响。从经济产量和折干率综
合考虑，种植 3 年收获为最佳收获年限。
Tab.4　Test of SSR of the yield of Aucklandia lappa Decne．
收获期 ( 代号 ) 小区平均产量 (kg)
差 异 显 著 性
5% 5%
三年（C） 18.27 　　a 　　A
二年（B） 11.90 　　　　b 　　　B
一年（A） 4.18 　　　　　　c 　　　　 C
结果表明，C 处理的产量最高，极显著高于 B 和
A 处理 ；其次是 B 处理的产量极显著高于 A 处理。
3　结论
种植 3 年生云木香（C 处理）的产量最高，公顷
槲 蕨 愈 伤 组 织 的 诱 导 研 究
李娟 *1,2 ，全健 1,2 ，韩凤 1,2 ，曹厚强 1,2 ，秦静 1 ，杨成前 1,2
（1. 重庆市药物种植研究所，2. 重庆市中药良种选育与评价工程技术研究中心，
重庆 南川 408435）
摘　要 ： 目的　对槲蕨愈伤组织诱导条件和增殖培养条件进行了探讨。方法　以槲蕨幼嫩根茎、孢子
叶片和叶柄为外植体，进行了愈伤组织的诱导和增殖培养，并对愈伤组织生长量和培养过程中的褐化问题
进行了初步统计分析。结果　1/2MS+2,4-D 1.0 mg/L + NAA 0.5 mg/L + 6-BA 0.3 mg/L + Vc 10 mg/L 为
诱导槲蕨愈伤组织的较优培养基，1/2MS + 2,4-D1.0 mg/L + 6-BA0.5 mg/L + Vc 10 mg/L 为槲蕨愈伤组织
增殖培养的较优培养基。结论　槲蕨幼嫩根茎能成功诱导出愈伤组织，但诱导率和增值率较低 ；添加 Vc 能
较好地控制培养过程中的褐化问题，诱导培养 20 d 转移继代亦能较好地控制褐化的加重。
关键词 ：槲蕨 ；根茎 ；愈伤组织 ；激素 ；褐化
中图分类号 ：Q943.1 文献标识码 ：A 文章编号 ：1673-6427(2012)05-0006-05
Research on Callus Induction of Drynaria fortunei (Kunze) J.Sm.
LI Juan1,2, QUAN Jian1,2, HAN Fen1,2, CAO Hou-qiang1,2, QIN Jing1, YANG Cheng-qian1,2
(1. The Research Institute of Medicine Plantation of Chongqing, Nanchuan 408435, China; 2. Chongqing
Engineering Technology Research Center of Improved Variety Selection and Appraisal, Nanchuan 408435, China)
Abstract: Objective To research the condition of Drynaria fortunei (Kunze) J.Sm. callus induction.
Methods The young rhizome, sporophyll and petiole were used as explants to research on callus induction, and
收稿时间：2012-01-04
基金项目：重庆市药物种植研究所项目基金
作者简介：李娟（1980-），女，助理研究员。主要研究方向为中药材的生
理生化及育种。
表 4　云木香收获年限试验产量比较的新复极差测验
DOI:10.13728/j.1673-6427.2012.05.008
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the optimum hormone constitution for callus growth and the browning in callus subculture were also studied.
Results The results indicated that 1/2MS+2,4-D 1.0mg/L + NAA 0.5mg/L + 6-BA 0.3mg/L + Vc 10mg/L was
the optimum medium for inducing callus, and 1/2MS + 2,4-D1.0 mg/L + 6-BA0.5 mg/L Vc 10mg/L the optimum
medium for proliferation. Conclusion The callus of Drynaria fortunei (Kunze) J.Sm. young rhizome could be
successful inducted, but the induction rate and multiplication rate was low. The browning in subculture could be
inhibited by the medium with Vc (10 mg/L), and the subculture in the twentieth could be also inhibited.
Key words: Drynaria fortunei (Kunze) J.Sm.; young rhizome; callus; hormone; browning
槲蕨（Drynaria fortunei (Kunze) J.Sm．）为槲蕨科
槲蕨属植物，主要分布在长江以南各省，重庆各区
（市、县）均有分布，常附生于低山丘陵和溪边向阳
的岩石或大树干上，海拔 200 － 1 000 m 的地方。其
干燥根茎主要含柚皮苷等黄酮类化合物，常用于治疗
肾虚腰痛、耳鸣耳聋、牙齿松动、跌扑闪挫、筋骨折
伤及外治斑秃、白癜风等疾病 [1]。
槲蕨具有重要的药用价值，其干燥根茎也为常用
中药骨碎补的主要来源，但随着近年来生态环境的
变化和人为的过度采挖，致使野生资源锐减。目前，
刘闻川等 [2] 采用组织培养方法，探讨了黑暗、l 000
lx、2 000 lx 和 3 000 lx 等 4 种不同光照条件对槲蕨外
植体褐变程度的影响，得出 1 000 lx 是槲蕨的组织培
养较为适宜光照条件的结论 ；张晓燕等 [3] 研究了组
织培养中添加抗氧化剂和吸附剂对槲蕨外植体中几
种与褐化有关生理指标的影响等。鲜见槲蕨愈伤组织
诱导研究的报道。
1　材料与方法
1.1　材料及预处理
材料采自重庆市药物种植研究所标本园内，为
当年生长的槲蕨幼嫩根茎、叶片和叶柄。材料采回
试验室后，先用剪刀剪去大部分覆盖在表皮的鳞片，
然后用自来水洗涤 20~30 min，再分别用 75% 乙醇消
毒 20~30 s，0.1% 升汞消毒 8 min，无菌水漂洗 5~6
次，叶柄切成 0.5 cm 长的小段，叶片和根茎切成 0.5
cm×0.5 cm 大小的小块，备用。
1.2　培养条件
以 1/2MS 为基本培养基，附加不同浓度的 2,4-D、
NAA 和 6-BA ；培养基琼脂含量为 7.0 g•L-1，蔗糖含
量为 30.0 g•L-1，pH 为 5.6 ～ 5.7 ；于 25℃左右黑暗
培养。
1.3 　生长分析
参照参考文献 [4]，愈伤组织诱导情况用诱导率
（%）表示 ；愈伤组织的生长情况用增殖倍数表示，
增殖倍数 = 愈伤组织收获鲜质量 / 愈伤组织接种鲜质
量 ；生长情况 ：将所有愈伤组织按大小分成 5 级，分
别记为 ：+ + + + +，+ + + +，+ + +，+ +，+。
1.4　褐化分析
褐化情况用种等级表示：+ + + 表示褐化很严重，
+ + 表示褐化严重，+ 表示轻微褐化，- 表示没有褐
化 [4]。
2　结果与分析
2.1　不同激素配比对槲蕨愈伤组织诱导的影响
以叶片和叶柄为外植体，并添加了不同浓度激素
的培养基上均未能诱导形成愈伤组织，不作统计分
析。以幼嫩根茎为外植体，试验添加 2,4-D（1 mg·L-
1，2 mg·L-1，3 mg·L-1)、NAA(0 mg·L-1，0.5 mg·L-
1，1 mg·L-1)、6-BA(0 mg·L-1，0.3 mg·L-1，0.6
mg·L-1) 等三种不同浓度激素，按照 L9(34) 正交试验
设计进行愈伤组织诱导，试验重复三次，每处理接种
60 个外植体，诱导 30 d 后记录诱导情况见表 1。
由表 1 可见，不同激素配比培养基接种幼嫩根茎
后 10 d 左右开始发生愈伤组织，最早出现在第 8 d，
培养 30 d 后 30%~65% 的外植体产生了愈伤组织，3
次重复试验的结果基本一致。正交试验方差分析结果
表明 ：2,4-D、NAA 和 6-BA 在对愈伤组织的生长均
有显著的促进作用。经 SSR 检验表明，诱导槲蕨愈
伤组织的最优激素配比为 2,4-D 1.0 mg·L-1 + NAA 0.5
mg·L-1 + 6-BA 0.3 mg·L-1。
表 1 不同激素配比对槲蕨愈伤组织诱导的影响
Tab. 1 Effects of hormone composing on the callus of Drynaria fortunei
(Kunze) J.Sm induction
培养基配方
接种数
( 个 )
出愈数
( 个 )
最早出愈
天数 (d)
出愈率
(%)
愈伤组织形
态及大小
2,4-D1.0 60 23 10 38.33 疏松 ++
2,4-D1.0+NAA0.5+6-BA0.3 60 39 8 65.00 疏松 +++++
2,4-D1.0+ NAA1.0+6-BA0.6 60 34 11 56.67 致密 ++
2,4-D2.0++6-BA0.3 60 25 13 41.67 疏松 +++
2,4-D2.0+ NAA0.5+6-BA0.6 60 28 12 46.67 致密 ++
2,4-D2.0+ NAA1.0 60 24 11 40.00 疏松 ++++
2,4-D3.0+6-BA0.6 60 18 14 30.00 致密 +
2,4-D3.0+ NAA0.5 60 21 13 35.00 疏松 ++++
2,4-D3.0+ NAA1.0+6-BA0.3 60 26 12 43.33 疏松 +++
注 ：试验结果为诱导 30d 后的观察值。
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表 2 愈伤组织出愈率正交试验方差分析表
Tab. 2 Callus rate variance analysis of orthogonal test
变异来源 SS df MS F F0.05 F0.01
2,4-D 452.5 2 226.25 56.28* 19 99
NAA 254.35 2 127.175 31.64*
6-BA 224.74 2 112.37 27.95*
误差 8.04 2 4.02
总变异 939.63 8
注 ：*p<0.05。
2.2　不同添加物及培养时间对槲蕨根茎和愈伤组织
褐化情况的影响
2.2.1　不同添加物对槲蕨外植体褐化情况的影响
为了抑制诱导培养中外植体的褐化从而影响诱
导率，在诱导培养基中加入抗氧化剂和吸附剂进行
诱导培养，诱导培养基为 1/2MS + 2,4-D1.0 mg·L-1 +
NAA0.5 mg·L-1 + 6-BA0.3 mg·L-1，培养 30d 后记录
外植体的褐化情况，结果见表 3。从表 3 可以看出，
添加抗坏血酸的培养基能较好地控制外植体的褐化
程度，活性炭对褐化也有一定的控制作用，但添加活
性炭后因活性炭对激素的吸附作用使得出愈率相对
于对照有一定降低。
表 3 不同添加物对槲蕨根茎褐化情况的影响
Tab.3 The browning reaction of different additives
to Drynaria fortunei (Kunze) J.Sm. rhizome
添加物质及浓度
接种数
( 个 )
最早出愈
时间 (d)
出愈数
( 个 )
出愈率
(%)
褐化情况
10 mg·L-1 抗坏血酸 Vc 60 9 40 66.67 +
1000 mg·L-1 活性炭 60 11 37 61.67 ++
对照（无添加物） 60 8 38 63.33 +++
2.2.2　不同培养时间对槲蕨愈伤组织褐化情况的影
响
愈伤组织发生后及时转移继代对克服愈伤组织
褐化和提高愈伤组织的生长速度有重要意义。试验以
1/2MS + 2,4-D1.0 mg·L-1 + NAA0.5 mg·L-1 + 6-BA0.3
mg·L-1 为继代培养基，分别在培养 15 d、20 d、 25 d
和 30 d 后记录愈伤组织的褐化情况。结果表明，在
培养 20 d 后愈伤组织接触培养基处开始出现淡褐色，
随后随培养时间的延长褐化加重，愈伤组织开始由接
种时的淡黄色转为黄褐色，在 30 d 左右部分愈伤组
织整块已呈深褐色，停止生长。
2.3　不同激素配比对愈伤组织生长情况的影响
愈伤组织继代增殖培养采用 1/2MS 为基本培
养 基， 添 加 不 同 浓 度 的 2,4-D(1.0 mg·L-1，2.0
mg·L-1，
3.0 mg·L-1）、6-BA（0.5 mg·L-1，1.0 mg·L-1) 和 10
mg·L-1 抗坏血酸进行继代增殖培养，并记录愈伤组
织接种质量，增殖培养 20d 后记录收获质量，以计算
愈伤组织增殖量，结果见表 4。结果表明，槲蕨愈伤
组织的增殖比较缓慢，增殖量小，培养 20 d 后的增
殖倍数最高仅 3.1。方差分析结果显示，不同激素配
比间对愈伤组织的生长呈极显著差异（p<0.01），经
SSR 检验，以 2,4-D1.0 mg·L-1+6-BA0.5 mg·L-1L 和
2,4-D2.0 mg·L-1+6-BA1.0 mg·L-1 两种激素配比的
培养基对愈伤组织的生长优于其他四种培养基配方。
表 4 不同激素配比对愈伤组织生长情况的影响
Tab.1 Effects of hormone composing on the callus of
Drynaria fortunei (Kunze) J.Sm growth
激素配比及浓度 mg·L-1
平均接种量 /g 平均收获量 /g 增殖倍数
2,4-D 6-BA
1.0 0.5 0.113 0.353 3.1 a
2.0 1.0 0.064 0.173 2.7 b
1.0 1.0 0.036 0.087 2.4 b
3.0 1.0 0.030 0.064 2.1 bc
2.0 0.5 0.070 0.141 2.0 bc
3.0 0.5 0.058 0.103 1.8 c
注 ：每处理记录 5 个观察值。
3　结论
本试验以槲蕨幼嫩根茎为外植体，成功进行了
愈伤组织的诱导和增殖，并对愈伤组织的生长及培
养过程中的褐化问题进行了初步的对比研究，筛选
出了愈伤组织诱导和增殖的较优培养基配方，即
1/2MS+2,4-D 1.0 mg·L-1 + NAA 0.5 mg·L-1 + 6-BA 0.3
mg·L-1 + Vc 10 mg·L-1 和 1/2MS + 2,4-D1.0 mg·L-1
+ 6-BA0.5 mg·L-1 + Vc 10 mg·L-1。
近年来，利用组织和细胞培养方法生产次生代谢
产物在中药材领域的应用越来越广泛，本试验基于此
理念，通过培养产生槲蕨愈伤组织，再进一步检测其
活性成分柚皮苷的含量，从而为槲蕨在中药学中的应
用寻找替代品奠定一定的基础。而通过诱导愈伤组织
进而分化培养出槲蕨组培小苗，建立一套槲蕨无性繁
殖的组培技术，也可为槲蕨种质资源的保护和市场对
槲蕨的需求等问题提供保障。
本试验还未对槲蕨最佳培养基配方及不同添加
物对褐化的控制作用作全面细致的对比研究，或因
槲蕨自身的遗传因素，试验诱导率及增殖倍数较低，
下一步将对槲蕨愈伤组织的诱导作更全面地对比研
究，从而为槲蕨的生产和发展提供更客观、科学的试
验基础。
— 9 —现代中药研究与实践2012年第26卷第5期Chin Med J Res Prac,2012 July.,Vol.26 No.5
参考文献
[1]　中华人民共和国药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[S]．北京：
化学工业出版社，2010．239
[2]　刘闻川，俞慧娜，戎华磊，等．不同光照条件对槲蕨组织培养外植体
褐化的影响 [J]．广东农业科学，2008（8）：22-25．
[3] 　张晓燕，俞慧娜，胡禅娜，等．抗氧化剂和吸附剂对槲蕨外植体中几
种与褐化有关生理指标的影响 [J]．植物生理学通讯，2007，43（6）：
1115-1116．
[4]　胡凯，祝顺琴，谈锋，等．曼地亚红豆杉愈伤组织诱导和继代培养中
抑制褐化的研究 [J]．西南师范大学学报（自然科学版），2004，29（4）：
659-663．
瓜 蒌 采 收 期 的 初 步 研 究
韩琳娜，郭庆梅，周凤琴
（山东中医药大学中药学院，山东，济南 250355）
摘　要 ： 目的　研究不同采收时期对瓜蒌质量的影响，确定瓜蒌最佳采收期。方法　分别采用热浸法
和蒽酮比色法对不同采收期的瓜蒌进行浸出物和糖类成分含量测定。结果　延长采收期，瓜蒌中水、醇浸
出物含量较传统采收期中的含量略高，对乙醚浸出物和糖类含量影响不大，但对药材外观影响较大并会进
而造成损失。结论　为保证瓜蒌药材外观、产量及质量，确定阳历 9 月底至 10 月初为其最佳采收时间。
关键词 ：瓜蒌 ；采收期 ；质量
中图分类号 ：R282.2 文献标识码 ：A 文章编号 ：1673-6427(2012)-0009-03
Preliminary Study on Harvest Period of Fructus Trichosanthis
HAN Lin-na, GUO Qing-mei, ZHOU Feng-qin
(Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China)
Abstract: Objective To explore the different harvest periods impact on the quality of Trichosanthes and
define the suitable collecting time. Methods The extract and sugar contents of different collecting time were
determined by hot-dip method and anthrone colorimetric method. Results Extending the collecting time result in
water-soluble and alcohol extract contents increased slightly, ether extract and sugar contents changed little, the
appearance of herbs changed great to bring loss of yield and quality. Conclusion To ensure the herbs appearance,
yield and quality of Fructus Trichosanthes, the suitable collecting time of Fructus Trichosanthes was from the end
of September to the beginning of October.
Key words: Fructus Trichosanthis; harvest time; quality
收稿时间：2012-01-12
基金项目：国家科技支撑计划（2011BAI06B06）；山东省科技发展计划项
目（2011GSF11904）
作者简介：韩琳娜（1978-），女（汉族），讲师，中药学专业在读博士
*通讯作者：周凤琴（1951-）,女,教授,博士生导师,中药质量与资源的教学
与科研工作。E-mail：zfqsdzy@yahoo.com.cn