全 文 ：S1 ～ S10. 10 批样品 R.对照指纹图谱
图 6 10 批样品匹配后 HPLC图
指纹图谱经计算机模拟相似度评价软件计算，相似度不得低
于 0. 9。
3 讨论
3. 1 检测波长的选择 根据养精种玉汤各药材所含成分的
紫外吸收特征，分别设定检测波长为 225、240、254、260、280
nm进样测定，综合比较色谱峰的数目、峰形、信号响应强弱
及基线的平稳程度，选定 225 nm为测定波长。
3. 2 流动相的选择 实验中比较了甲醇-水系统和乙腈-水
系统的分离效果，结果表明乙腈明显优于甲醇。此外，将流
动相的pH值调至酸性，可改善峰形，且酸的种类对峰形有较
大影响。分别采用了甲醇-0. 1%乙酸水、乙腈-0. 1%乙酸水、
乙腈-0. 1%磷酸水系统进行比较，最终确定流动相为乙腈-
0. 1%磷酸水系统，乙腈在 5% ～ 25%范围内梯度洗脱，检测
时间为 45 min。
3. 3 提取条件的选择 由于养精种玉汤所含成分类型较
多，一种检测方法或一张图谱不能反映其固有特性。本研究
采用溶剂萃取法，先后采用乙酸乙酯、正丁醇将养精种玉汤
水煎液分成不同极性部位，分别进行指纹图谱分析，并建立
相应部位的对照指纹图谱，可起到互相补充、双重鉴别的效
果。本实验报道其正丁醇部位指纹图谱的研究结果。
参考文献:
［1］ 何高明. 傅青主妇科校释［M］. 太原:山西人民出版社，1984:
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的探讨［J］. 中成药，2000，22(7):516.
白花丹参药材 HPLC指纹图谱研究
王福刚1，2， 高允生1， 齐永秀1， 刘 斌2， 王 伟2
(1.泰山医学院 药学院，山东 泰安 271016;2.北京中医药大学 中药学院，北京 100102)
收稿日期:2009-12-03
基金项目:山东省教育厅科技项目(J04E07);泰安市科技局课题(KY200530)
作者简介:王福刚(1978 －)，男，讲师，主要从事中药药效物质基础研究。Tel:(0538)6229751 E-mail:wfg713@ sina. com.
关键词:白花丹参;高效液相色谱法;指纹图谱
摘要:目的:建立白花丹参药材的 HPLC 指纹图谱。方法:采用高效液相色谱法，色谱柱:Diamonsil C18(4. 6 mm × 250
mm，5 μm)，流动相:甲醇-0. 1%三氟乙酸水溶液进行梯度洗脱，检测波长 270 nm，流速 1. 0 mL /min。结果:在选定的色
谱条件下，通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A)确定 14 个色谱峰构成白花丹参药材指纹图谱的特征峰。结
论:该分析方法的稳定性、精密度、重现性较好。
中图分类号:R284. 1 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2010)09-1464-04
HPLC fingerprint of Salvia Miltiorrhiza f. Alba
WANG Fu-gang1，2， GAO Yun-sheng1， QI You-xiu1， LIU Bin2， WANG Wei2
(1. Taishan Medical College，Taian 271016，Shandong，China;2. Beijing University of Chinese Medicine，Beijing，100102，China)
KEY WORDS:Salvia miltiorrhiza f. Alba;HPLC;chromatogram fingerprint
ABSTRACT:AIM:To develop an HPLC fingerprint method for the quality control of Salvia Miltiorrhiza f. Alba.
METHODS:An HPLC analysis was carried out on a Diamonsil C18 column(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)with the
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mobile phase consisting Methanol-0. 1% trifluoroacetic acid water in gradient mode. The detection wavelength was
set at 270 nm. The flow rate was 1. 0 mL·min －1 and the analytic time was 80 min. The ten batches of samples
were determined，for establishing the standard HPLC fingerprint of Salvia miltiorrhiza f. Alba. RESULTS:Under
the above chromatographic conditions the characteristic peak of fingerprint of Salvia miltiorrhiza f. Alba was com-
posed of 14 chromatographic peaks through similarity analysis. CONCLUSION:The method has good reproduc-
ibility，precision and stability.
丹参为唇形科植物丹参 Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根
及根茎，具有祛瘀止痛，活血通经，清心除烦之功效。现代药
理学研究证明，丹参具有增加冠状动脉血流量、调节血脂、抑
制血栓形成和改善微循环等作用［1-2］。白花丹参 Salvia milt-
iorrhiza f. Alba是丹参的变型，它主要分布在山东章丘、莱芜
等地的山区地带。白花丹参除具有丹参的作用和用途外，对
治疗血栓闭塞性脉管炎具有独特疗效，临床应用前景十分广
阔［3］。近年来关于白花丹参化学、药理等方面的研究很多，
为进一步综合开发利用白花丹参，本实验采用高效液相色谱
法对白花丹参药材指纹图谱进行了研究，可为其鉴别、质量
评价以及质量标准制定提供依据。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 Waters 600 高效液相色谱仪，2996 DAD 检测
器;Sartorious BT 25S 型 1 /100000 电子分析天平(北京赛多
利斯仪器有限公司);KQ-500DE型超声波清洗器(昆山超声
仪器有限公司)。
1. 2 药品与试剂 丹参酮ⅡA(批号:110766-200417)、丹酚
酸 B(批号:111562-200504)、丹参素钠 (批号:110855-
200405)、丹参酮Ⅰ(批号:0867-200502)均购自中国药品生
物制品检定所;甲醇(Sigma 公司，色谱纯);纯净水(杭州娃
哈哈集团有限公司出品);其他试剂均为分析纯。
1. 3 供试药材 白花丹参药材:其中 S1、S3、S4 于 2006 年
10 月采自山东泰安，S2、S5、S8 于 2006 年 11 月采自山东莱
芜，S6、S7、S9、S10 于 2007 年 10 月采自泰安，经泰山医学院
药学院中药学教研室高红莉副教授鉴定为唇形科植物白花
丹参 Salvia miltiorrhiza flalba. Alba的干燥根。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱:Diamonsil C18(4. 6 mm × 250 mm，5
μm);采用梯度洗脱;流动相:甲醇(A)-0. 1%三氟乙酸水溶
液(B)，洗脱剂 A在 0 ～ 5 min为 10%，在 5 ～ 15 min由 10%
增至 40%，在 15 ～ 50 min 由 40%增至 70%，在 50 ～ 70 min
由 70%增至 100%，在 70 ～ 80 min为 100%。流速:1. 0 mL /
min;检测波长:270 nm;分析时间:75 min。
2. 2 供试品溶液的制备 取白花丹参药材 10 g，万能高速
粉碎机粉碎，均过 40 目筛。取粉末约 1 g，精密称定，置具有
冷凝回流装置的圆底烧瓶中，精密加入 50 mL水，称定重量，
煎煮 30 min，放冷，再称定重量，用水补足减失重量。再向烧
瓶中精密加入 50 mL 甲醇，称定重量，超声处理 30 min，放
冷，称定重量，用 50%的甲醇补足减失的重量，6 000 r /min
离心 10 min，取上层溶液过 0. 45 μm 微孔滤膜，用于 HPLC
进样分析。
2. 3 对照品溶液的制备 精密称取丹参素钠、丹酚酸 B、丹
参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA对照品适量，置 10 mL量瓶中，加 50%甲
醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 精密度试验 取供试液，连续进样 5 次，选择各共有
峰进行比较，结果表明，各共有峰相对保留时间 RSD <
1. 35%，相对峰面积 RSD < 2. 03%，表明进样的精密度良好。
2. 4. 2 重现性实验 取同一批白花丹参药材 5 份，按 2. 2
项方法平行制备供试液，进行测定。结果表明，各共有峰相
对保留时间 RSD < 1. 82%，相对峰面积 RSD < 2. 90%。表明
其重现性较好。
2. 4. 3 稳定性实验 取同一批白花丹参药材，分别于制备
后 0、2、4、8、12、24 h进样测定。结果表明，各共有峰相对保
留时间 RSD < 1. 43%，相对峰面积 RSD < 2. 32%，表明供试
品溶液在 24 h内稳定性良好。
2. 5 指纹图谱的建立及技术参数
2. 5. 1 指纹图谱的建立及共有指纹峰的标定 按照 2. 1 项
方法操作，制备 10 批白花丹参供试液，通过比较 10 批供试
品 HPLC 色谱图的检测结果，选定其中 14 个共有的色谱峰
为共有指纹峰，建立白花丹参药材的 HPLC 色谱指纹图谱，
图 1。经对照品定性，1 号色谱峰鉴定为丹参素钠，5 号色谱
峰为丹酚酸 B，11 号色谱峰为丹参酮Ⅰ，14 号色谱峰为丹参
酮ⅡA，见图 2。其中丹酚酸 B峰面积约占总峰面积的 15%，
比较稳定，因此选其为参照峰，标为 S。样品 S1 至 S10 色谱
图出峰总数依次为 36、38、27、37、38、32、37、23、29、35，共有
峰面积占总峰面积的比值依次为 91. 41%、90. 43%、
96. 74%、91. 32%、90. 83%、91. 21%、90. 59%、94. 24%、
92. 27%、90. 56%。
图 1 白花丹参供试品 HPLC图谱
2. 5. 2 共有峰的相对保留时间及相对峰面积 将各色谱峰
保留时间与同一图谱中丹酚酸 B的保留时间比较，其比值为
各色谱峰的相对保留时间;将各色谱峰峰面积与同一图谱中
丹酚酸 B的峰面积比较，其比值为各色谱峰的相对峰面积。
10 批样品中各共有峰相对保留时间见表 1，各共有峰相对峰
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面积见表 2。由表 1、2 可知，10 批样品基本均一、稳定。
表 1 10 批样品指纹图谱共有峰的相对保留时间
峰号
样品号
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10
均值 RSD%
1 0. 479 0. 481 0. 475 0. 478 0. 476 0. 479 0. 479 0. 479 0. 478 0. 479 0. 478 0. 36
2 0. 587 0. 590 0. 581 0. 587 0. 586 0. 586 0. 587 0. 594 0. 587 0. 587 0. 587 0. 56
3 0. 891 0. 892 0. 890 0. 891 0. 891 0. 891 0. 893 0. 895 0. 892 0. 891 0. 892 0. 16
4 0. 950 0. 951 0. 950 0. 951 0. 951 0. 950 0. 951 0. 951 0. 950 0. 950 0. 950 0. 10
5 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 0
6 1. 079 1. 079 1. 079 1. 080 1. 078 1. 077 1. 078 1. 078 1. 079 1. 078 1. 078 0. 10
7 1. 130 1. 130 1. 131 1. 131 1. 129 1. 102 1. 102 1. 102 1. 104 1. 102 1. 116 1. 31
8 1. 405 1. 403 1. 386 1. 412 1. 402 1. 401 1. 401 1. 399 1. 394 1. 404 1. 401 0. 49
9 1. 939 1. 945 1. 926 1. 946 1. 942 1. 930 1. 938 1. 944 1. 945 1. 934 1. 939 0. 36
10 1. 991 1. 998 1. 976 1. 999 1. 995 1. 982 1. 992 1. 999 1. 998 1. 986 1. 992 0. 40
11 2. 072 2. 080 2. 056 2. 083 2. 078 2. 061 2. 074 2. 083 1. 896 1. 894 2. 038 0. 37
12 2. 095 2. 103 2. 080 2. 105 2. 100 2. 086 2. 097 2. 106 2. 104 2. 091 2. 097 0. 42
13 2. 144 2. 152 2. 129 2. 155 2. 149 2. 135 2. 146 2. 157 2. 153 2. 138 2. 146 0. 43
14 2. 193 2. 203 2. 176 2. 205 2. 200 2. 182 2. 195 2. 205 2. 203 2. 187 2. 195 0. 47
表 2 10 批样品指纹图谱共有峰的相对峰面积
峰号
样品号
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10
均值 RSD%
1 0. 015 0. 016 0. 013 0. 014 0. 016 0. 017 0. 007 0. 008 0. 014 0. 018 0. 014 26. 42
2 0. 007 0. 007 0. 005 0. 006 0. 011 0. 009 0. 007 0. 007 0. 006 0. 06 0. 007 24. 35
3 0. 020 0. 020 0. 021 0. 022 0. 025 0. 023 0. 026 0. 022 0. 016 0. 033 0. 023 19. 92
4 0. 052 0. 056 0. 054 0. 063 0. 096 0. 053 0. 057 0. 040 0. 062 0. 058 0. 059 24. 45
5 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 0
6 0. 043 0. 049 0. 039 0. 054 0. 054 0. 043 0. 047 0. 037 0. 050 0. 055 0. 047 13. 63
7 0. 014 0. 018 0. 013 0. 018 0. 013 0. 009 0. 013 0. 011 0. 009 0. 012 0. 013 24. 05
8 0. 018 0. 008 0. 010 0. 014 0. 018 0. 016 0. 012 0. 012 0. 017 0. 015 0. 014 24. 51
9 0. 026 0. 033 0. 013 0. 044 0. 041 0. 045 0. 048 0. 049 0. 042 0. 036 0. 041 17. 78
10 0. 015 0. 018 0. 017 0. 024 0. 015 0. 019 0. 020 0. 011 0. 014 0. 013 0. 017 22. 93
11 0. 229 0. 296 0. 215 0. 263 0. 231 0. 304 0. 334 0. 140 0. 279 0. 271 0. 256 21. 49
12 0. 067 0. 093 0. 043 0. 093 0. 100 0. 081 0. 099 0. 062 0. 100 0. 100 0. 084 23. 92
13 0. 059 0. 089 0. 042 0. 082 0. 092 0. 094 0. 089 0. 069 0. 085 0. 093 0. 079 21. 82
14 0. 174 0. 210 0. 148 0. 212 0. 270 0. 183 0. 222 0. 161 0. 206 0. 271 0. 206 20. 22
图 2 对照品 HPLC图谱
1.丹参素钠 5.丹酚酸 B 11.丹参酮Ⅰ 14.丹参酮ⅡA
2. 6 指纹图谱相似度计算 将 10 批白花丹参药材指纹图
谱数据导入中药指纹图谱相似度软件 2004A，计算均值相似
度，结果 10 批样品相似度分别为 0. 997，0. 998，0. 980，
0. 998，0. 987，0. 996，0. 997，0. 988，0. 998，0. 968。结果见图
3。
3 讨论
3. 1 提取方法的选择 通过对提取方式(超声、热提取)的
考察，发现采用超声与热回流提取相结合的提取方式，样品
色谱图的谱峰信号较多［4］。对不同提取溶剂(甲醇、50%甲
图 3 10 批白花丹参指纹图谱
醇、75%甲醇、水、先水回流后 50%甲醇超声)考察，结果表明
先水回流后 50%甲醇超声色谱图信息量最多，成分含量最
高。对不同流提取时间(30、45、60 min)进行了考察，发现水
热回流 30 min，成分数量及含量最高，实验研究发现，提取时
间过长，导致丹参酮类成分减少。故供试品溶液的制备方法
确定为以水回流提取 30 min，后 50%甲醇超声 30 min。
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3. 2 色谱条件的选择 本实验中考察了甲醇-水系统，甲醇-
0. 1%冰醋酸系统，甲醇-0. 1%三氟乙酸水溶液系统，乙腈-
0. 1%三氟乙酸水溶液系统。由各色谱图比较得，甲醇-0. 1%
三氟乙酸溶液系统出峰峰形较好，基线平稳，故选择甲醇-
0. 1%三氟乙酸溶液洗脱分离。
在选定的色谱条件下，以 DAD 检测器得到的三维图谱
在不同波长下切割，得到 270 nm 条件下出峰最多，峰形较
好，特征性较强，峰的分离度较好，基线也较平稳，故选择 270
nm作为检测波长。
3. 3 参照峰的选择 本品主要含有脂溶性的丹参酮类和水
溶性的丹酚酸等成分，本文确定了丹参酮 IIA(14 号峰)、丹
参酮 I(11 号峰)、丹酚酸 B(5 号峰)、丹参素钠(1 号峰)的色
谱峰位置，经 HPLC 图谱比较，丹酚酸 B峰较大，为丹参的主
要成分之一，且中国药典 2005 年版一部丹参项下采用其含
量为质量控制指标，故选择丹酚酸 B为参照峰。
3. 4 指纹图谱的评价 对采自山东泰安、莱芜市的 10 批白
花丹参药材进行了指纹图谱分析，发现收集来的不同产地白
花丹参指纹图谱中主要峰群的整体图貌基本一致，相似度计
算结果表明，10 批样品指纹图谱相似度均在 90%以上。不
同批次的白花丹参药材指纹图谱的相对保留时间也有相当
好的相似性。但是，比较不同产区药材各共有峰相对保留面
积有所差别，可能因为药材生产过程中受到土壤、气候等因
素、环境因素及采收加工过程中诸多因素的影响。
色谱指纹图谱是在研究中药指控和质量标准过程中诞
生的一种分析技术，由于色谱指纹图谱可以提供大量的信
息，而且还能提供各组分的相对含量来进行量的描述，所以
它可以为中医药的研究提供良好的分析数据［5］。本实验采
用 RP-HPLC方法，建立了白花丹参药材的指纹图谱。结果
表明该方法稳定、可靠、重现性好，可为白花丹参药材质量分
析、评价与控制提供依据。
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槲寄生药材的高效液相指纹图谱研究
于 淼1， 徐海燕1， 李 飞1， 于治国2， 赵云丽* 2
(1.沈阳药科大学高职学院，辽宁 沈阳 110026;2.沈阳药科大学药学院，辽宁 沈阳 110016)
收稿日期:2010-02-15
项目来源:国家自然科学基金资助项目(30901967)
作者简介:于 淼(1972 －)，女，主管药师，理学硕士，从事中西药品质量标准研究与药品质量检验。Tel:13940450556，E-mail:amiao_yu@
sina. com
* 通讯作者:赵云丽(1976 －)，女，讲师，理学博士，从事中西药品质量标准研究与药品质量检验。Tel:13840348017 E-mail:yanli76@ 163.
com
关键词:槲寄生;指纹图谱;高效液相色谱法
摘要:目的:建立槲寄生药材的指纹图谱研究方法并进行聚类分析。方法:采用高效液相色谱法，色谱柱为 Zorbax SB-C18
(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)，以 0. 5%冰醋酸溶液(A)和甲醇-四氢呋喃(90 ∶ 10，v /v)(B)进行梯度洗脱，程序为 0 ～ 3 min，
0%B;3 ～ 60 min，0% ～40%B;检测波长为 270 nm。结果:确定了槲寄生药材指纹图谱中的 22 个共有峰，根据聚类分析
和相似度分析结果，将槲寄生药材分为 2 类。结论:本法重复性好，专属性强，为科学评价槲寄生药材质量提供了依据。
中图分类号:R284. 1 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2010)09-1467-03
本实验为当归寄生注射液指纹图谱［1］的研究工作的一
部分。当归寄生注射液，由当归和槲寄生两味药材组成，具
有舒筋活络、祛风湿、镇痛之功效，用于风湿性关节炎、肥大
性脊椎炎、腰膝劳损、腰腿痛、痛经、坐骨神经痛、神经性头痛
等证的治疗。方中当归为血中圣药，具有补血活血、化瘀止
痛、生肌健骨之功效，槲寄生具有益肝肾、强筋骨、祛风湿、通
经络益血之功效［2］。作者曾建立当归药材的高效液相色谱
指纹图谱，为当归寄生注射液质量控制提供依据［3］。近代化
学成分和药理研究表明，槲寄生主要化学成分有黄酮类、三
萜类、苷类、甾醇类等多种化学成分，具有扩张血管、镇静中
枢等作用，同时有减少关节积液、改善关节骨端变性及骨质
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2010 年 9 月
第 32 卷 第 9 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
September 2010
Vol. 32 No. 9