全 文 ：作者简介:徐世霞(1976-),女 ,正攻读药物分析专业的硕士学位。
＊通讯联系人(Correspondent author), E-mai l:chaorb@163.net
RP-HPLC测定海金沙藤中咖啡酸的含量
徐世霞 ,晁若冰＊
(四川大学华西药学院 , 四川 成都 610041)
摘要:目的　建立海金沙藤中咖啡酸的含量测定方法。方法　采用反相高效液相色谱法测定 , Kromasil 100-5 C18色谱柱(150
mm×4.6 mm),以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(11∶89∶1.5∶0.3)为流动相 , 检测波长 320 nm , 流速 1.0 ml·min-1 , 柱温 35℃。结
果　咖啡酸与其他成分达到基线分离 ,线性范围为进样量 0.005～ 0.500 μg(r=0.9999), 平均回收率为 97.7%, RSD=1.7%。
结论　所建方法准确 、简便 , 可用于海金沙藤的质量控制。
关键词:海金沙藤;咖啡酸;含量测定;反相高效液相色谱法
中图分类号:R917　 文献标识码:A 　 文章编号:1006-0103(2005)06-0552-02
Determination of caffeic acid content in Lygodium japonicum by RP-HPLC
XU Shi-xia , CHAO Ruo-bing＊
(West China School of Pharmacy , Sichuan University , Chengdu 610041 , China)
Abstract:OBJECTIVE　To determine caffeic acid in Lygodium japonicum.METHODS　An RP-HPLC was performed on a Kromasil
100-5 C18 column(150 mm×4.6 mm), with a mixture of methano1-water-acetic acid-triethy lamine(11∶89∶1.5∶0.3)as mobile
phase .The detective wavelength was set at 320 nm and the flow rate was 1.0 ml·min-1.Column temperature was 35℃.RESULTS　Caffeic
acid could be separated from other components completely.The linear range of caffeic acid was 0.005-0.500 μg(r=0.9999)and the aver-
age recovery of caffeic acid was 97.7%with RSD of 1.7%.CONCLUSION　This method is accurate , simple and can be used for the quali-
ty control of Lygodium japonicum.
Key words:Lygodium japonicum;Caffeic acid;Assay;RP-HPLC
CLC number:R917 Document code:A Article ID:1006-0103(2005)06-0552-02
　　海金沙藤为海金沙科植物海金沙的干燥带叶藤
茎 ,是民间常用药材 。其性甘 、寒 ,具有清热解毒 、利
水通淋之功效 ,主治尿路感染 、尿路结石等症 。海金
沙藤中含氨基酸 、黄酮 、咖啡酸及对香豆酸;其中咖
啡酸具有广泛的抑菌作用和抗病毒作用 ,为海金沙
藤的有效成分[ 1] 。其含量测定方法仅有薄层色谱扫
描法[ 2] 。为此 ,我们建立了 HPLC 法测定海金沙藤
中咖啡酸的含量 ,并未见报道 ,所建方法准确 、简便 ,
适用于常规分析 。
1　实验部分
1.1　仪器与试药
高效液相色谱仪包括 LC -6AD 泵 , SPD-10A
vp紫外检测器 ,C -R7Ae 色谱数据处理机(日本岛
津)。甲醇和乙腈为色谱纯(Fisher);水为纯净水(乐
百氏);其他试剂为分析纯。咖啡酸对照品(中国药
品生物制品检定所);海金沙藤(市售)产地为四川 ,
经四川大学华西药学院王曙教授鉴定为海金沙科植
物海金沙 Lygodium japonicum (Thunb.)Sw.的干燥
带叶藤茎 。
1.2　方法与结果
1.2.1　色谱条件　采用 Kromasil 100-5 C18色谱柱
(150 mm×4.6 mm);流动相为甲醇-水-冰醋酸-
三乙胺(11∶89∶1.5∶0.3),检测波长 320 nm;流速 1.0
ml·min-1;柱温 35℃。在以上条件下 ,咖啡酸对照
品溶液和海金沙藤供试品溶液的色谱图见图 1。
图 1　对照品溶液(A)和供试品溶液(B)的色谱图
Fig 1　HPLC chromatograms of reference solution(A)and sample solu-
tion(B)
1.2.2　溶液的制备　精密称取咖啡酸对照品适量 ,
加流动相溶解并定量稀释制成 0.02 mg·ml-1的对照
品溶液。取药材粉末(过二号筛)约 2 g ,精密称定 ,
精密加入流动相 25 ml ,称定重量 ,密塞 ,浸泡过夜
华西药学杂志
W C J · P S 　2005 , 20(6):552～ 553　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
DOI :10.13375/j.cnki.wcjps.2005.06.034
(16 h),超声处理 15 min ,放冷 ,再称定重量 ,用流动
相补足减失的重量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液作为供试
品溶液。
1.2.3　线性范围　分别精密吸取咖啡酸对照品溶
液(1)(0.005 μg·μl-1)1 、5 、10 μl ,咖啡酸对照品溶
液(2)(0.050μg·μl-1)2 、4 、6 、8 、10μl ,注人液相色谱
仪 ,测定峰面积值 ,以峰面积对进样量(μg)进行线性
回归 ,得回归方程为:Y =4.667×106 X -4.591×103
(r=0.9999),进样量在0.005 ～ 0.500μg 范围内 ,咖
啡酸峰面积与进样量的线性关系良好。
1.2.4　精密度试验　取对照品溶液和供试品溶液 ,
于同日 0 、2 、4 、6 、8 h各进样 1次 ,记录峰面积 ,测得
对照品溶液和供试品溶液日内的平均峰面积分别为
1.7233×106 和 2.2300×106 , RSD 分别为 0.73%和
0.67%。取对照品溶液和供试品溶液 ,于 0 、1 、2 、3 d
各进样1次 ,记录峰面积 ,测得两溶液的日间平均峰
面积分别为 1.7303×106和 2.2313×106 , RSD 分别
为0.73%和 0.72%。结果表明:日内精密度 、日间
精密度均好 ,两溶液在 3 d内稳定。
1.2.5　重复性试验　取同一批海金沙藤药材 ,按
“1.2.2”项下方法配制 6份供试品溶液。取此溶液
和对照品溶液各 20 μl进样 ,测定咖啡酸的峰面积 ,
以外标法计算含量。咖啡酸的平均含量为 0.287 mg·
g
-1 , RSD=1.8%。
1.2.6　加样回收率试验　精密称取已知含量的同
一批药材粉末(过二号筛)0.8 g ,分别精密加入咖啡
酸对照品 100.4 、200.8 、301.2μg , 按“1.2.5”项下方
法测定 , 计算回收率 ,测得平均回收率为 97.7%,
RSD =1.7%(n=9)。
1.2.7　耐用性试验　按“1.2.1”项下条件 ,使用 4
种色谱柱[Kromasil 100-5 C18柱(150 mm×4.6mm),
Hypersil ODS2 5 μm 柱(250 mm×4.6 mm), Luna 5 μ
C18(2)柱(150 mm ×4.6 mm), Shim-pack VP -ODS
柱(150 mm×4.6 mm)]分别对海金沙藤供试品溶液
进行分离。在 4种色谱柱上咖啡酸都可以与相邻的
组分分离 ,说明方法的耐用性好。在 Kromasil 100-5
C18柱(150 mm×4.6 mm)和 Hypersil ODS2 5 μm 柱
(250 mm×4.6 mm)上咖啡酸的分离效果及峰形最
好。
1.2.8　样品的测定　按“1.2.5”项下方法测定样品
含量 ,4批海金沙藤中咖啡酸的含量分别为 0.101 、
0.284 、0.383 、0.018 mg·g-1 , RSD 分别为 0.89%、
1.78%、0.93%、0.91%。
2　讨论
曾试验了乙腈-水 、乙腈-水-冰醋酸-三乙
胺 、乙腈-水-四丁基铵硫酸氢盐 、甲醇-水-冰醋
酸-三乙胺 4个系统 ,结果以甲醇-水-冰醋酸-
三乙胺系统的分离效果较好 ,当甲醇和水的配比为
11∶89时 ,咖啡酸的保留时间适中 ,与其他成分基本
达到基线分离 ,峰形也较好 。因此 ,选其为流动相。
在流动相中加入少量冰醋酸可以抑制酸性物质
的离解 ,有利于咖啡酸的分离。所以 ,分别往甲醇-
水-三乙胺(11∶89∶0.3)溶液中加入比例为 0.5 、
1.0 、1.5 、2.0的冰醋酸 。当流动相中冰醋酸的比例
为1.5%时 ,咖啡酸峰与相邻的其他组分峰可以完全
分离。所以 ,流动相中冰醋酸的比例定为 1.5%。
在对流动相中三乙胺的量进行考察时发现 ,在
流动相中加入三乙胺可以改善峰形 ,使咖啡酸峰更
锐 。所以 ,分别往甲醇-水-冰醋酸(11∶89∶1.5)溶
液中加入比例为 0.2%、0.3%、0.4%的三乙胺 。当
三乙胺的比例为 0.3%时 ,咖啡酸的峰形最好。因
此 ,流动相中三乙胺的比例定为 0.3%。
取咖啡酸对照品溶液 ,在 200 ～ 400 nm 范围扫
描 ,结果咖啡酸在 320 nm 处有最大吸收 ,所以采用
320 nm为测定波长。
根据咖啡酸易溶于水和醇的性质 ,分别以甲醇-
水-冰醋酸(50∶50∶1)、甲醇 -水(50∶50)和流动相
为溶剂进行提取 。结果表明 ,用流动相为提取溶剂
时 ,咖啡酸的提取率最高。以流动相为溶剂 ,将样品
分别浸泡1 、4 、16 h后 ,超声处理 15 min ,进样分析。
结果表明 ,浸泡 16 h 样品的含量最高 。因此 ,将浸
泡时间定为 16 h。将浸泡过夜的样品分别超声处理
10 、20 、30 min ,测定结果显示 ,在浸泡 16 h 后 ,超声
处理的时间对咖啡酸的提出量无明显影响 ,所以将
超声处理的时间定为 15 min。
4批海金沙藤药材中咖啡酸的含量相差很大 ,
可能是采收年限 、采收季节和生长环境不同的原因。
因此 ,采用 HPLC 法测定咖啡酸的含量对海金沙藤
药材的质量评价具有重要意义。
参考文献:
[ 1] 　 江苏新医学院.中药大辞典[M] .下册.上海:上海科学技术出
版社 , 1985.1948
[ 2] 　 王春根 ,刘训红 ,常亚萍 ,等.海金沙根及草的鉴定研究[ J] .
中药材 , 1989 ,12(1):25
收稿日期:2005-09
553第 6期 徐世霞 , 等。 RP-HPLC 测定海金沙藤中咖啡酸的含量