全 文 ：海金沙提取物中香豆酸和咖啡酸的测定及稳定性研究
吕海涛 ,赵玉君1 ,邓锐1 ,陈文凭
(青岛农业大学理学院 , 山东 青岛 266109;1 青岛农业大学图书馆 ,山东 青岛 266109)
摘要:目的　建立了海金沙提取物中香豆酸和咖啡酸的测定方法 ,并研究了二者在不同条件下的稳定性。方法　选用 E-
clipse XDB-C18色谱柱 , 以甲醇-1%乙酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱;考察了光照 、放置时间等因素对咖啡酸和香豆酸
稳定性的影响。结果　香豆酸和咖啡酸得到很好的分离。以水为溶剂 , 咖啡酸和香豆酸在冷藏避光条件下储存比较稳定。
结论　为香豆酸和咖啡酸的提取 、分析及其相关制剂的生产提供参考。
关键词:海金沙　咖啡酸　香豆酸　高效液相色谱　稳定性
中图分类号:R284.2　文献标识码:A　文章编号:1672-7738(2008)05-0305-03
Study on the determination and stability of caffeic acid and coumarilic acid
extracted from Lygodium Japonicum
LV Hai-tao ,ZHAO Yu-jun1 ,DENG Rui1 ,CHEN Wen-ping
(Co llege of Science , Qingdao Ag ricultur al Univ ersity , Qingdao 266109;1.Library ,
Qingdao Ag ricultural University , Qingdao 266109)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To establish a me thod fo r determination caffeic acid and coumarilic acid ex tracted in Lygodium
Japonicum , and to investig ate their stability in different conditions.METHODS　The sepa ration w as per formed on a Eclipse
XDB C18 column with linear gr adient elution composed of me thanol and 1% acetate acid so lution.The changes of caffeic acid and
couma rilic acid content we re mainly studied along with the changes o f different condition.RESULTS　Caffeic acid and coumar ilic
acid w ere w ell separa ted.They w ere stable when sto red in refrige rato r and water w as the solvent.CONCLUSION　It provided a
reference to the extr action and analy sis of coumarilic acid and caffeic acid and production o f coumarilic acid and caffeic acid prep-
a ration.
KEY WORDS:Lygodium Japonicum;caffeic acid;coumarilic acid;HPLC;stability
　　海金沙为海金沙科植物海金沙 Lygodium japonicum
(Thunb.)Sw.的成熟孢子 , 咖啡酸和香豆酸是其的主要有
效成分[ 1 ,2] ,具有广泛的抗氧化 、抑菌和抗病毒作用[ 3] 。二者
均属于酚酸类化合物 ,而酚酸类化合物因其温度 、酸性 、放置
条件的不同 ,其稳定性会有差异[ 4] 。还可能受到化学 、生物
学等条件的影响使其稳定性降低[5] 。在制药行业中 , 酚酸类
化合物有许多被用于制作药剂 ,能否稳定存在对于该药剂的
药效起到了主要作用 ,能否稳定对新产品的研发及应用也起
到了至关重要的作用[ 6] 。目前国内外文献中关于海金沙中
香豆酸和咖啡酸稳定性的系统研究尚未见报道。本文建立
了海金沙提取物中香豆酸和咖啡酸的测定方法 , 研究了光
照 、温度 、酸度 、溶剂等因素对提取物中咖啡酸和香豆酸稳定
性的影响 ,为香豆酸和咖啡酸的提取 、分析及其相关制剂的
生产提供一定的参考。
1　实验材料
1.1 仪器　高效液相色谱仪 LC-10AVP、紫外检测器 SPD
-10AVP(岛津仪器有限公司)、N2000 色谱工作站(浙江大
学智达信息工程有限公司)、CASCADA 超纯水系统(Pall
Corpo ration)。
1.2 样品　海金沙粉末(购于本地药店);咖啡酸 、香豆酸标
准品(购于 Sigma公司)。
1.3 试剂　甲醇 、冰乙酸 、磷酸 、甲酸均为分析纯。
2　海金沙中香豆酸和咖啡酸的提取及 HPLC 测定方法的建
立
2.1 海金沙中香豆酸和咖啡酸的提取　称取海金沙粉末 5g ,
量取 40m L 70%甲醇 , 一起加入到 250mL 的烧瓶中 ,加热回
流 3h , 冷却后用 0.45μm 的微孔滤膜过滤 ,定容至 50mL 。放
入冰箱中冷藏 、待用。
提取液分别换用 30%甲醇和水 ,重复以上操作。
2.2 色谱条件 　Eclipse XDB -C18 分析柱 (150mm ×
4.6mm , 5μm),检测波长为 310nm , 进样量为 20μL , 流动相:
流速为 1.0mL ·min-1 。流动相:A 甲醇溶液 , B 1%乙酸水
溶液(V/ V), 梯度为:溶剂 A 在 20min 内由 25% 上升到
40%。图 1 为在此条件下分离实际样品的色谱图 , 尽管实际
样品很复杂 , 杂质峰很多 ,但不影响咖啡酸和香豆酸的分离 、
测定。
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1.咖啡酸　2.香豆酸
图 1　实际样品的分离色谱图
2.3 香豆酸和咖啡酸标准曲线的绘制　准确称取一定量的
酚类物质 ,溶于少量水 , 在棕色容量瓶中定容至 10m L , 咖啡
酸的浓度为 32.0mg· L-1 ,香豆酸的浓度为 60.0mg · L -1 ,
摇匀 ,放入冰箱 4℃避光储存备用。
分别配制上述咖啡酸 、香豆酸标准品溶液浓度的 1/2 ,
1/4 , 1/8 , 1/ 16 , 1/ 32 和 1/ 64 的溶液 , 依次按给定的方法进
行分离测定。以咖啡酸和香豆酸标准品溶液的浓度 C 对峰
面积 A 作图 ,得香豆酸的回归方程为 A =1.89×10 -5C -
0.685 , r =0.9996(n =6);咖啡酸的回归方程为 A =3.95
×10-4C +0.0756 , r =0.9995(n =6)。
2.4 精密度和回收率试验　取两份相同的提取液 ,其中一份
加入标准物质 ,按确定的色谱条件进行分离 , 每一个样品平
行测定 7 次 ,由标准曲线计算样品的浓度并与实际标准比
较 ,咖啡酸和香豆酸的回收率分别为 103%和 98%, 精密度
分别为 1.0%和 0.8%。
3　海金沙中香豆酸和咖啡酸的稳定性实验
3.1 光照和溶剂对海金沙提取物中香豆酸 、咖啡酸稳定性的
影响　取 9 份各 2m L的海金沙提取液 , 分别于自然光照射 、
室内阴暗处 、冰箱中冷藏放置 0h 、2h 、4h 、6h 、12h 、24h 、48h 、
一周和两周 ,分别用高效液相色谱法测定其含量的变化。
3.1.1 以 70%甲醇为溶剂 , 提取液中咖啡酸和香豆酸的含量
变化见图 2。
图 2　70%甲醇提取液在不同条件下咖啡酸(a)和香豆酸(b)的含量变化图
随着保存时间的增加 , 咖啡酸和香豆酸的含量都明显降
低。光照会加速咖啡酸和香豆酸的不稳定性 , 放置 24h 后 ,
咖啡酸的含量下降了约 60%, 避光保存效果能好一些。 随
着光照时间的增加 , 溶液中香豆酸的含量下降幅度变化不
大 , 放置两周约下降了 15%。在避光 、冷藏条件下降的程度
与光照相近。
3.1.2 以 30%甲醇为溶剂 ,提取液中咖啡酸和香豆酸的含量
变化见图 3。
图 3　30%甲醇提取液在不同条件下咖啡酸(a)
和香豆酸(b)的含量变化图
　　随着光照时间的增加 , 溶液中咖啡酸的含量明显下降 ,
放置 24h 后 , 含量下降了近 90%。由此可见 , 日光的照射对
咖啡酸的稳定性有非常不利的影响。 在避光阴暗处咖啡酸
稳定 , 24h 以内分解的量较少 , 但一周以后也很不稳定大量
分解。在冰箱中冷藏时 , 最为稳定性 ,两周后仅分解了 15%
左右。溶液中香豆酸的含量在 12h 以内较稳定 , 48h 后明显
下降 , 放置两周约下降了 50%。但在避光 、冷藏条件比较稳
定 , 下降的程度很小。因此对于 30%甲醇提取液 , 咖啡酸冷
藏保存最为稳定 , 香豆酸避光 、冷藏保存都较为稳定。
3.1.3 以水为溶剂 ,提取液中咖啡酸和香豆酸的含量变化情
况见图 4。
·306· 齐鲁药事 Qilu Pharmaceuti cal Af f airs 2008 Vol.27 , No.5
图 4　水提取液中咖啡酸(a)和香豆酸(b)的含量变化图
　　在光照约 2h 后 , 咖啡酸的含量明显下降。 分解了约
80%。光照两周后 , 含量下降很大 , 基本完全分解。但是在
避光和冷藏条件下放置时 , 其含量随着时间的增加变化较
小 ,仅有少量分解。提取液中香豆酸的含量在开始的 12h 以
内下降速度较快 , 以后趋于稳定 , 放置两周约下降了 60%。
但在避光 、冷藏条件比较稳定 , 下降的幅度小 ,其中以避光保
存最好 ,含量减小的最少。
由图 2、3和 4 , 还可以看出 , 以水为提取剂 , 从海金沙中
提取的咖啡酸和香豆酸量最高。
3.2 温度对海金沙提取液中咖啡酸和香豆酸稳定性的影响
　分别从 3 份海金沙提取液中取等量的溶液 , 分别置于常
温 、40℃、50℃、60℃、70℃的水浴锅中加热 30min , 用高效液
相色谱法进行测定其含量的变化情况。
3.2.1 以 70%甲醇为溶剂 , 温度的增加对咖啡酸的稳定性有
不利的影响 ,随着温度的增加 , 溶液中咖啡酸的含量明显下
降。而香豆酸的含量随温度的增加呈先上升后下降的趋势 ,
在 50℃时含量最高。因此 ,咖啡酸适宜在常温下储存 , 香豆
酸适宜在 50℃储存。
3.2.2 以 30%甲醇为溶剂 , 温度的增加对咖啡酸和香豆酸的
稳定影响较小 ,随着温度的增加 ,溶液中咖啡酸的含量稍有
变化 ,而香豆酸的含量随温度的增加基本不变 。
3.2.3 以水为溶剂所得提取液 , 温度的增加对咖啡酸的稳定
性明显不利的影响 ,随着温度的增加 , 溶液中咖啡酸的含量
明显下降 , 70℃时比常温下降了近 80%, 而香豆酸随温度的
增加比较稳定 ,含量基本没有变化。
3.3 酸度对海金沙提取液中香豆酸 、咖啡酸稳定性的影响　
取 2mL 水提取液 3 份 ,向其中分别加入 0.1%冰醋酸 、0.1%
甲酸和 0.1%磷酸 ,再将此溶液放置于 60℃的水浴锅中加热
30min。在溶液中加入三种酸后 , 咖啡酸的含量明显上升 , 约
增加了 200%,可能是由于在酸性 、加热的条件下 , 提取液中
的其它成分 , 如绿原酸等 , 发生水解 , 生成的咖啡酸稳定 , 使
其含量上升。而香豆酸的含量有所下降 , 加酸不利于香豆酸
的稳定 , 使其稳定性下降。
4　结论
4.1 光照是影响咖啡酸和香豆酸稳定性的主要因素 , 二者见
光都有分解 、转化的现象 ,应避光保存。
4.2 以水为溶剂 ,避光冷藏 , 咖啡酸和香豆酸稳定性较好。
4.3 咖啡酸的含量随着温度的升高大幅度下降 ,咖啡酸适宜
常温保存 , 温度升高对于香豆酸的稳定性影响相对较小。
4.4 在溶液中加入酸后 ,由于提取液中的其它成分发生水解
生成咖啡酸 , 使咖啡酸的含量明显上升。香豆酸的含量有下
降趋势 , 但变化不明显。
4.5 本实验中使用了 70%甲醇 、30%甲醇和水三种提取溶
剂 , 水提取的咖啡酸和香豆酸量远高于 30%甲醇和 70%甲
醇提取的量 , 提取效率最高。
总之 , 提取溶液中咖啡酸和香豆酸在光照 、温度 、酸度 、
溶剂等变化的条件下含量变化很大 , 待测样品应该用水配
制 , 避光冷藏保存。尽量现配现用 , 制备好后的样品应尽快
检测 , 即使避光冷藏保存也不能时间过长。
参考文献
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　·简讯 ·
山东省药品不良反应监测中心网站正式开通
　　2008年 5月 1日 ,山东省药品不良反应监测中
心网站(网址:www.sdadr.gov.cn)经过半年多的
试运行后正式开通。该网站的开通 ,是我省加强药
品不良反应和医疗器械不良事件监测工作的重要举
措 ,对提高我省药品不良反应和医疗器械不良事件
信息传播的及时性和可利用性 ,建立全省药械安全
预警体系 ,保障公众用药用械安全具有重要意义 。
(省药品不良反应监测中心)
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