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鸡矢藤环烯醚萜总苷的镇痛作用及其机制初探＊
刘　梅 ,周兰兰＊＊ ,王　璐 ,庞明群
(安徽医科大学药理教研室 ,合肥 ,安徽　230032)
　　摘　要　目的:研究鸡矢藤环烯醚萜总苷(Iridoidglycosidesofpaederiascandens, IGPS)的镇痛作用及其机制。方法:采用小
鼠福尔马林实验 、扭体实验研究 IGPS镇痛活性 ,通过小鼠竖尾实验和小鼠跳跃实验研究其成瘾性 , 通过纳洛酮拮抗实验和预先给
予一氧化氮供体左旋精氨酸(L-Arginine, L-Arg)和一氧化氮合酶抑制剂 N-硝基-L-精氨酸甲酯(N-nitro-L-argininemethy1 ester, L-
NAME)初步探讨 IGPS镇痛作用与阿片受体和一氧化氮(Nitricoxide, NO)系统的关系 。结果:IGPS(360、 180mg/kgigqd×7d)可
显著抑制福尔马林实验Ⅰ相和Ⅱ相反应;IGPS(360、180、 90mg/kgigqd×7d)可明显抑制冰醋酸导致的小鼠扭体反应;IGPS(360mg/
kgscq12h×8d)连续给药动物均未出现 S行竖尾反应及跳跃现象;纳洛酮(5 mg/kg)不能拮抗 IGPS镇痛活性 , L-Arg(400mg/kg)可
部分地抑制其镇痛作用 , L-NAME(37.5 mg/kg)可增强其镇痛作用。结论:IGPS具有明显的镇痛作用 , 且连续用药无成瘾性 ,其镇
痛作用可能与内源性阿片肽系统无关 ,而与抑制 NO的生成有关。
　　关键词　鸡矢藤环烯醚萜总苷;镇痛;成瘾性;纳洛酮;一氧化氮
　　近年来 , 环烯醚萜苷类化合物镇痛活性的研究偶有报
道 [ 1] , 使得这类化合物有望成为一种新型的镇痛药。 鸡矢藤环
烯醚萜总苷(Iridoidglycosidesofpaederiascandens, IGPS)是从
茜草科鸡矢藤属植物鸡矢藤(Paederiascandens)中提取的一类
有效成分 , 其主要活性成分为鸡矢藤苷 、鸡矢藤次苷 、车叶草苷
等。我室前期研究结果表明 , 鸡矢藤提取物对实验痛风模型具
有良好的防治作用 [ 2 , 3]本文就 IGPS的镇痛活性和机制进行了
初步的实验研究。
1　材料与方法
1.1　试验药物　鸡矢藤环烯醚萜总苷本教研室自制 , 棕黄色
粉末 , 总苷含量 >50%;吲哚美辛(Indonethacin, Ind)片 , 上海辛
帕斯制药有限公司 ,批号 060401, 规格:25mg/片;盐酸吗啡粉剂
(Morphine, Mor),青海制药厂有限公司 , 批号 20060603。
1.2　动物　 昆明种小鼠 , 体重 18 ～ 22g, 雌雄兼备 , 由安徽医
科大学实验动物中心(皖医实动准第 01号)提供。
1.3　 试剂　福尔马林(AR级 , 上海溶剂厂 , 批号 041104);冰
醋酸(aceticacid)AR级 , 无锡市亚盛化工有限公司 , 批号
050426;盐酸纳洛酮注射液(Naloxone, Nal),北京四环医药科技
股份有限公司 , 批号 200801173;L-Arginine, Amreso公司 , 批号
L0T201/08;N-nitro-L-argininemethy1 ester, sigma公司 , 批号:
107K1055。
1.4　方法
1.4.1　小鼠福尔马林实验(formalintest)[ 4]　小鼠 60只随机
分 6组:NS组 、Ind阳性对照组(7.5mg/kgigqd×3d)、Mor阳性
对照组(福尔马林实验前 30minip5mg/kg)、IGPS用药组(360、
180、90mg/kg, ig, qd×7d)。末次给药 1h后 , 用微量注射器在
小鼠右后足皮下注射 2.5%福尔马林 15μl, 立即置于 φ20cm玻
璃缸中 , 记录小鼠的累计舔足时间(licking-time, LT)为疼痛指
标 ,在 0 ～ 5min及 15 ～ 30min两个时间分别段记录 , 分别代表Ⅰ
相和Ⅱ相疼痛指标。
1.4.2　小鼠扭体实验(aceticacidwrithingtest)[ 5]　小鼠分组
和给药方法同上 ,于末次给药 1h后 ,实验小鼠 ip1%冰醋酸溶
液 0.2ml,记录 15min内各组小鼠扭体次数 , 并计算各用药组的
扭体抑制率(%), 抑制率(%)=(NS组扭体均数 -用药组扭体
均数)/NS组扭体均数。
1.4.3 　小鼠跳跃实验 [ 6]　雄性小鼠 30只 , 随机均分为 3组:
43中药药理与临床 2008;24(6)
＊ 安徽省科技攻关重点项目(07010300179)　　　　＊＊通讯作者
DOI :10.13412/j.cnki.zyy l.2008.06.022
NS、Mor(100mg/kg)、IGPS(360mg/kg),每 12h皮下注射 Mor或
IGPS一次 , 连续给药 8天 , 末次注射 6h后再皮下注射纳洛酮
(Nal)6mg/kg催瘾 , 立即把小鼠放在高 35cm、直径 30cm的圆台
上 , 观察记录 Nal注射后 30min内的跳跃动物数及跳跃次数。
1.4.4　小鼠竖尾实验 [ 7]　小鼠分组和给药方法同上 ,每天分
别皮下注射 Mor(15mg/kg)或 IGPS(360mg/kg)一次 , 连续 15d。
观察每天给药后 2h内小鼠有无兴奋跑动 、是否出现 S形竖尾反
应 , 小鼠出现 S形竖尾反应记为阳性结果。
1.4.5　纳洛酮拮抗实验 [ 8] 　 小鼠 50只 , 随机均分为 5组:
NS、IGPS(360mg/kg, ig, qd×7d)、IGPS+Nal(360mg/kg+5mg/
kg)、Mor(实验前 0.5h一次性 ip5mg/kg)、Mor+Nal(5mk/kg+
5mg/kg)。 IGPS+Nal组和 Mor+Nal组在末次给药前 10min开
始 ip注射 Nal, 然后 igIGPS或 ip注射 Mor。中药给药 1h后或
Morip0.5h后 , 所有小鼠 ip注射 1%冰醋酸 0.2ml, 观察记录
15min内的各组小鼠扭体次数 ,并计算抑制率。
1.4.6　 IGPS镇痛作用与 NO系统的关系 [ 9]　 小鼠 40只 , 随
机均分为 4组:NS、IGPS(360mg/kg, ig, qd×7d)、IGPS+L-Arg
(360mg/kg+400mg/kg, L-Arg于实验前 20minip)、IGPS+L-
NAME(360mg/kg+37.5mg/kg, L-NAME于实验前 15minip)。
末次给药 1h后每只小鼠分别 ip注射 1%冰醋酸 0.2ml, 观察记
录 15min内的各组小鼠扭体次数 , 并计算抑制率。
2　结果
2.1　 IGPS对小鼠福尔马林实验的影响 　实验结果如表 1所
示 , 与 NS组相比 , IGPS3个剂量均可显著抑制Ⅱ相反应 , 高 、中
剂量对Ⅰ相反应也有抑制作用。
　　表 1　 IGPS对小鼠福尔马林实验的影响( x±s, n=10)
组别 剂量(mg/kg)
累计舔足时间(S)
0 ～ 5min 15～ 30min
NS 22.74±10.36 98.87±25.02
Ind 7.5 17.06±10.90 7.97±4.04＊＊
Mor 5 7.69±4.55＊＊ 6.65±3.55＊＊
IGPS 360 13.95±9.81＊ 41.67±20.85＊＊
IGPS 180 14.27±9.89＊ 30.25±19.29＊＊
IGPS 90 15.62±10.75 40.01±16.01＊＊
　　与 NS组相比 ＊P<0.05, ＊＊ P<0.01(下同)
2.2　 IGPS对小鼠扭体实验的影响　实验结果如表 2所示 ,与
NS组相比 , IGPS3个剂量均可显著减少小鼠扭体次数 , 最大抑
制率达 51.57%。
　　表 2　IGPS对小鼠扭体实验的影响( x±s, n=10)
组别 剂量(mg/kg)
扭体次数
(次 /15min)
抑制率
(%)
NS 60.75±13.25
Ind 7.5 19.17±4.17＊＊ 68.44
Mor 5 5.17±1.70＊＊ 91.49
IGPS 360 29.42±5.66＊＊ 51.57
IGPS 180 30.92±6.97＊＊ 49.10
IGPS 90 41.75±14.49＊ 31.28
2.3 　 IGPS对小鼠竖尾实验的影响 　结果如表 3所示 , 与 NS
组相比 , 14d内吗啡(15mg/kg)组小鼠于给药后 2h内出现兴奋
跑动及 S形竖尾反应 , 而 IGPS组小鼠均未出现兴奋跑动和 S形
竖尾反应 , 外观表现安静 、少动 。
　　表 3　 IGPS对小鼠竖尾实验的影响
组别 动物数(只) 剂量(mg/kg) 阳性反应数(只)
NS 10 0　　
Mor 10 15 10＊＊
IGPS 10 360 0　　
2.4　 IGPS对小鼠跳跃实验的影响 　结果如表 4所示 , 与 NS
组相比 , sc注射 Nal(6mg/kg)催瘾后 ,吗啡组小鼠均出现跳跃反
应 ,跳跃反应发生率为 100%, 且呼吸加快 , 活动增多 , 排稀便;
而中药组小鼠活动自如 ,均未见跳跃反应 , 说明本实验使用剂量
范围内 IGPS连续用药未见有成瘾性发生。
　　表 4　IGPS对小鼠跳跃实验的影响
组别 剂量(mg/kg)
动物数
(只)
跳跃小鼠
(只)
跳跃反应
发生率(%)
跳跃次数
(次)
NS 10 0 0　　　 0
Mor 100 10 10 100＊＊ 16.22±3.77＊＊
IGPS 360 10 0 0　　　 0
2.5　纳洛酮对 IGPS镇痛作用的影响　结果见表 5, 与 NS组
相比 ,吗啡与 IGPS均可显著减少小鼠的扭体次数;与 Mor组相
比 , Mor+Nal组小鼠扭体次数明显增加 , 差异有显著性(P<0.
01), 提示纳洛酮可完全拮抗吗啡的镇痛作用;与 IGPS组相比 ,
IGPS+Nal组小鼠扭体次数无明显变化 , 提示纳洛酮对 IGPS的
镇痛作用无明显影响。
　　表 5　纳洛酮对 IGPS镇痛作用的影响( x±s, n=10)
组别 剂量(mg/kg)
扭体次数
(次 /15min)
抑制率
(%)
NS 61.20±13.65
Mor 5 5.50±1.43＊＊ 89.60
IGPS 360 32.20±5.22＊＊ 47.38
Mor+Nal 5+5 50.00±7.06■■ 18.60
IGPS+Nal 360+5 32.40±7.34＊＊# 47.06
　　与 NS组相比 ＊＊ P<0.01;与 Mor组相比 ■■P<0.01;与 IGPS
组相比 #P<0.05
2.6 　 L-Arg和 L-NAME对 IGPS镇痛作用的影响 　结果见表
6,与 NS组相比 , IGPS可显著减少小鼠的扭体次数;与 IGPS组
相比 , IGPS+L-Arg组小鼠扭体次数明显增加 , 差异有显著性;
IGPS+L-NAME组小鼠扭体次数明显减少 , 差异有显著性 , 提示
L-Arg可减弱 IGPS对醋酸致小鼠扭体反应的抑制作用 , L-
NAME可增强其镇痛作用。
　　表 6　 L-Arg和 L-NAME对IGPS镇痛作用的影响( x±s, n=10)
组别 剂量(mg/kg)
扭体次数
(次 /15min)
抑制率
(%)
NS 60.20±14.88
IGPS 360 30.90±5.74＊＊ 48.67
IGPS+L-Arg 360+400 49.20±9.04■■ 18.27
IGPS+L-NAME 360+37.5 22.20±5.53＊＊■ 63.12
　　与NS组相比 ＊P<0.05, ＊＊ P<0.01;与IGPS组相比 ■ P<0.
05, ■■ P<0.01
3　讨论
　　福尔马林致痛模型是一个慢性疼痛模型 , 对中枢镇痛药敏
感 ,是目前公认的一种较好的研究药物镇痛作用的模型 [ 10] , 其
特点是疼痛分为两个时相 , Ⅰ 相是由于直接刺激外周神经末梢
44 中药药理与临床 2008;24(6)
所致 , Ⅱ相则主要为炎症介质的产生 、释放引起。镇痛药如吗啡
等抑制两相疼痛 , 而外周镇痛药如吲哚美辛等药只能抑制Ⅱ相
疼痛。本实验结果表明 IGPS高 、中剂量(360、 180mg/kg)对此
模型具有良好的镇痛作用 ,可明显抑制福尔马林实验的两相反
应 , 提示 IGPS可能同时具有外周及中枢镇痛作用。扭体反应是
通过化学物质刺激导致小鼠腹膜发生炎症产生疼痛而表现歪
扭反应。本实验中 IGPS3个剂量均可显著抑制小鼠的扭体反
应 , 最大抑制率达 51.57%, 表明 IGPS对腹腔注射化学刺激物
质引发的小鼠扭体反应具有抑制作用 ,说明 IGPS在此模型上也
表现较强的镇痛作用 。
　　纳洛酮作为阿片受体拮抗剂 , 可以阻断吗啡类镇痛药与 、
、 型阿片受体的结合 , 从而消除吗啡类药物的镇痛作用。本实
验发现在小鼠扭体致痛模型上纳洛酮未能拮抗 IGPS对醋酸致
小鼠扭体反应的抑制作用 ,提示 IGPS的镇痛作用可能不是通过
内源性内啡肽系统介导的。另外 , 小鼠竖尾实验和跳跃实验的
结果表明 IGPS连续用药 ,即使较大剂量 , 也没有导致成瘾性发
生 , 这一结果与纳洛酮拮抗实验的结果相吻合 , 由此可以推断
IGPS的镇痛作用可能与阿片受体无关。
　　大量的研究表明 NO在外周及中枢的不同水平的痛觉调制
中均起重要作用 [ 11 , 12] 。 本实验发现 , L-Arg可部分地抑制 IGPS
的镇痛作用 , L-NAME可增强其镇痛作用 , 表明 IGPS的镇痛作
用可能与抑制 NO的生成有关 ,但其确切的镇痛作用机制还有
待进一步的研究。
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LiuMei, ZhouLanLan, WangLu, PangMingQun
(DepartmentofPharmacology, AnhuiMedicalUniversity, Hefei　230032)
　　Objective:TostudytheanalgesicefectofiridoidglycosidesofPaederiascandens(IGPS)anditsmechanismofaction.Methods:The
analgesicefectofIGPSwasstudiedbytheformalin, aceticacid-inducewrithingmethodsofmice.Themicetail-erectingtestandjumpingtest
wereusedtostudytheaddictionofIGPS.Theinvolvementofendorphinandnitrogenmonoxidewasstudiedbynaloxoneantagonismtestand
peritonealinjectionofL-Arginine(L-Arg)orNG-Monomethy1-L-arginine(L-NAME)inadvanceinwrithingtest.Results:IGPS(360、
180mg/kg, ig, qd×7d)couldremarkedlyinhibittheⅠ andⅡphasereactionofmiceintheformalintest, IGPS(360、 180、90mg/kg, ig,
qd×7d)couldsignificantlyinhibitaceticacid-inducewrithingresponseinmice.Straubstailandjumpingreactioninmicewouldnotbe
foundwhileadministrateIGPS(360mg/kg, sc, q12h×8d)repeatedlyandregularly.Inaddition, theanalgesiceffectofIGPScouldnotbe
antagonizedbynaloxone(5mg/kg).However, antinociceptiveefectofIGPSwaspatiallyblockedbyL-Arginine(400 mg/kg)butenhanced
byL-NAME(37.5 mg/kg).Conclusion:IGPSshowsanalgesiceffectandwithoutaddiction.Itsanalgesicactionwaymaybenotrelatedto
theendogenousopioidsystembutpartialyrelatedtoitsinhibitoryeffectontheproductionofnitricoxide(NO).
Keywords　iridoidglycosidesofPaederiascandens;analgesiceffect;addiction;naloxone;nitricoxide
45中药药理与临床 2008;24(6)