全 文 ：2014 年 2 月第 16 卷第 1 期
February 2014，Vol. 16，No. 1
湖北中医药大学学报
Journal of Hubei University of Chinese Medicine
作者简介:凌宏斌(1968 －)，男，湖北医药学院附属东风医院主管药师，研究方向:医院药学。
通讯作者:李鹏(1968 －)，男，湖北医药学院附属东风医院副主任药师，研究方向:医院药学。
高效液相色谱法测定乌蕨中牡荆苷的含量
凌宏斌，李鹏
(湖北医药学院附属东风医院药学部，湖北 十堰 442008)
摘要:目的 建立测定乌蕨中牡荆苷含量的高效液相色谱方法。方法 采用 DIONEX － C18柱( 4． 6mm × 250mm，
5μm) ，以乙腈∶ 甲醇∶ 0． 2%冰醋酸水溶液( 23∶ 77) 为流动相，流速 1． 0mL /min，柱温 30℃，检测波长 270nm。结果
牡荆苷在 0． 009 － 0． 180mg /mL浓度范围内有良好线性关系( r = 0． 9995) ，平均加样回收率为 98． 0%，ＲSD小于 2． 0%。
结论 本方法简便、快速、准确、重复性好，可用于乌蕨中牡荆苷的含量测定。
关键词:乌蕨;牡荆苷;高效液相色谱法
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标识码:A doi: 10. 3969 / j. issn. 1008 － 987x. 2014. 01. 16
Determination of Vitexin in Stenoloma Chusanum by HPLC
Ling Hongbin，Li Peng
(Department of Pharmacy，Dongfeng Hospital Affiliated to Hubei Medical College，Shiyan 442008)
Abstracts:Objective To establish a HPLC method for the determination of vitexin in Stenoloma chusanum (L inn． )Ching． Method
The HPLC system consisted of the DIONEX － C18(4． 6mm × 250mm，5μm)column，the mobile phase consisted of acetonitrile － water
(23:77)with 0． 2% glacial acetic，the flow rate was 1． 0mL /min，the column temperature was 30℃，The UV detector was set at 270nm．
Ｒesults The linear response range was 0． 009 － 0． 180mg /mL(r = 0． 9998)． The average recovery of mangiferin was 98． 0%，and ＲSD ＜
2% ． Conclusion The method is simple，rapid，accurate and repeatable． It can be applied in determination of Vitexin in Stenoloma chusa-
num． it can provide evidence for further development and utilization of this crude drug．
Key words:Stenoloma chusanum (Linn． )Ching．;Vitexin;HPLC
乌蕨(Stenoloma chusanum(Linn． )Ching．)为真蕨目鳞始
蕨科乌蕨属多年生草本蕨类植物，又名乌韭、大叶金花草、土川
连等［1］。《中国药典》1977 年版曾将其收载。乌蕨味微苦、涩，
性寒，具有清热解毒、止血生肌、活血利湿的功效，用治烧烫伤、
痢疾、肝炎、流感、外伤出血、脾肿大。现代药理研究表明，乌蕨
具有很强抗菌活性，对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、伤寒沙门氏杆
菌有抑制作用。乌蕨总黄酮还具有抗氧化活性，能增强羟自由
基的清除率，有效抑制卵磷脂氧化产物的生成;其乙醇提取物
对酪氨酸酶的活性有一定抑制作用，此作用在临床可用于皮肤
美白和抑制恶性黑色素瘤的形成［2］。临床用于咳嗽、感冒发
热、腮腺炎、扁桃体炎、肠炎、肝炎、痢疾、农药中毒、食物中毒等，
有“万能解毒剂”之美称;外用可治皮肤湿疹、烧烫伤等。乌蕨
主要含有黄酮类、酚酸类以及挥发油等成分。其地上部分含黄
酮类成分高达 30%以上［3］。研究表明其总黄酮还原力强、还具
有清除自由基和抗脂质氧化等作用，是其主要的抗氧化作用物
质基础，乌蕨总黄酮体外抗氧化作用远优于芦丁［4］。本研究以
鄂西北产乌蕨为研究原材料，测定了其主要黄酮类药用成分牡
荆苷。对开发本地乌蕨在中医药及保健养生领域的作用，推广
本地区乌蕨的实用性提供可靠的参考。现报道如下:
1 材料
Dionex － U3000 液相色谱仪(Dionex公司，Dionex Chemeleon
色谱工作站);KQ －100DB超声波清洗机(昆山分析仪器有限公
司);AEU －210 型电子天平(d = 0． 1mg，日本岛津)。牡荆苷对
照品(供含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号:111687 －
200602);甲醇(天津大茂，色谱纯);水为双蒸水;其他试剂均为
分析纯。乌蕨(采自湖北郧西县)，经湖北省十堰市药品检验所
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2014 年 2 月第 16 卷第 1 期
February 2014，Vol. 16，No. 1
陈银华副主任中药师鉴定为真蕨目鳞始蕨科乌蕨属乌蕨 Stenol-
oma chusanum(Linn． )Ching．的干燥全草。
2 方法与结果
2． 1 对照品溶液的制备
取经硅胶减压干燥器中干燥至恒重的牡荆苷对照品适量，
精密称定，加甲醇制成 0． 18mg /mL的溶液，即得。
2． 2 供试品溶液的制备
取本品粉末(过 30 目筛)1． 0g，精密称定，置平底烧瓶中，
精密加入 70%甲醇 50mL，称定重量，回流提取 30min，再称定重
量，用 70% 甲醇补足减失的重量。滤过，精密吸取续滤液
20mL，过聚酰胺柱(60 目，约 2g，装于 1． 5cm 的玻璃柱中)，以
70%甲醇洗脱，收集洗脱液约 100mL，挥干溶剂，残渣用 70%甲
醇溶解并完全转移至 10mL 量瓶中，70%甲醇定容至刻度，摇
匀，即得。
2． 3 色谱条件［5 － 6］
采用 Dionex － C18(4． 6mm × 250mm，5μm)色谱柱;流动相:
乙腈 － 0． 2%冰醋酸水溶液(23 ∶ 77);流速:1． 0mL /min;柱温:
30℃;进样量:10μL;检测波长 270nm。在此色谱条件下，牡荆
苷峰理论板数不小于 3000，分离度大于 1． 5。对照品与供试品
的色谱图见图 1。
图 1 乌蕨中牡荆苷的 HPLC图
2． 4 标准曲线与线性范围
精密吸取牡荆苷对照品溶液 0． 5、1． 0、2． 0、5． 0、8． 0、
10． 0mL分别置 10mL量瓶中，以 70%甲醇定容至刻度，摇匀，得
到浓度分别为 0． 009、0． 018、0． 036、0． 090、0． 144、0． 180mg /mL
的牡荆苷对照品溶液。分别精密吸取 10μL 注入液相色谱仪，
按上述色谱条件测定峰面积，以浓度(X)对峰面积(Y)进行线
性回归，得到回归方程为:Y = 50． 2977X － 2． 5489，r = 0． 9998。
结果表明牡荆苷在 0． 009 － 0． 180mg /mL 浓度范围内线性关系
良好。
2． 5 精密度试验
取牡荆苷对照品溶液，按照以上色谱条件，进样，平行重复
6 次，结果牡荆苷色谱峰保留时间稳定，计算 6 次峰面积 ＲSD为
1． 01%。
2． 6 稳定性试验
取供试品溶液，室温下分别在 0、2、6、12、24h 进样测定，记
录牡荆苷峰面积，计算其 ＲSD 为 1． 32%，表明处理后的乌蕨供
试品溶液在 24h内稳定。
2． 7 重复性试验
取同一乌蕨药材(采集于 20110701)，平行称取 6 份，精密
称定，制备供试品溶液，依法测定，结果牡荆苷的平均含量为
2． 13mg /g，ＲSD为 1． 43%。
2． 8 加样回收率试验
称取重复性实验测定含量的乌蕨药材，平行 9 份，每份
0． 5g，精密加入对照品储备溶液 5． 0、6． 0、7． 0mL(3 种不同水
平，各 3 份)，按 2． 2 项下的方法同法制备供试品溶液，进样
10μL。记录牡荆苷色谱峰，按外标两点法计算其含量，结果见
表 1。
表 1 加样回收率试验结果
编号 水平
取样量
(g)
原有量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
ＲSD
(%)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
低
中
高
0． 5023 1． 0699 0． 9 1． 9586 98． 8
0． 4985 1． 0618 0． 9 1． 9404 97． 6
0． 4992 1． 0633 0． 9 1． 9584 99． 5
0． 5009 1． 0669 1． 08 2． 1289 98． 3
0． 5006 1． 0663 1． 08 2． 1046 96． 1
0． 4989 1． 0626 1． 08 2． 1166 97． 6
0． 4997 1． 0644 1． 26 2． 3169 99． 4
0． 5010 1． 0671 1． 26 2． 2994 97． 8
0． 5004 1． 0658 1． 26 2． 2856 96． 8
98． 0 1． 14
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2． 9 样品测定
按上述色谱条件对 5 批样品进行含量测定，结果见表 2。
表 2 样品测定结果 (n = 3)
批号 牡荆苷(mg /g) ＲSD(%)
20110701 2． 13 1． 43
20110714 2． 46 2． 48
20110813 1． 95 2． 56
20110829 2． 04 1． 97
20110908 2． 06 2． 08
3 讨论
乌蕨是黄酮类成分含量较高的植物，其所含黄酮类成分众
多，目前已确定的成分有牡荆苷、木犀草素、荭草苷、牡荆素鼠李
糖苷等。现代药理研究认为牡荆苷对病毒有一定的拮抗活性、
体外抗氧化活性也较强，对缺血性心肌损伤的保护作用良好，
其作用机制与增加冠状动脉和心肌的血流量、降低血浆及全血
黏度、降低动静脉血管对射血阻力、抑制血栓形成以及提高红
细胞变形能力等有关。牡荆苷对食管癌细胞特别是 EC － 109
细胞增值有明显抑制作用，并能够诱导凋亡发生［7］。乌蕨为食
管癌治疗提供新药物具有广阔前景。
由于乌蕨中黄酮类成分众多，在含量测定时各成分相互影
响。所以为减少其他成分对牡荆苷测定时的影响，将制得的提
取液通过聚酰胺柱。聚酰胺柱主要通过其对不同化合物中所
含羟基的多少和位置来分析化合物，对黄酮类尤其是多羟基黄
酮分离效果显著。经过试验选择用 70%甲醇 100mL 能将牡荆
苷完全洗脱下来。
本研究结果表明，郧西产乌蕨中牡荆苷的平均含量为 2．
13mg /g，当地乌蕨资源丰富，但利用甚少。目前郧西产乌蕨主
要用于观赏性植物，乌蕨的药用价值和深加工产品以及附加值
还远未充分利用。建议当地农林业部门联合研究机构进行乌蕨
药学研究，进一步提高乌蕨自身价值。
参考文献:
［1］ 江苏新医学院．中药大辞典(上册)［M］． 上海:上海人民出版社，
1985:157 － 158．
［2］ 任冰如，李维林．乌蕨的研究进展［J］． 中国野生植物资源，2006，
25(2):12 － 14．
［3］ 任冰如，夏冰，李维林，等．乌韭的化学成分研究(Ⅱ)［J］．中草药，
2009，40(增刊):104 － 106．
［4］ 吴晓宁，张春椿．乌蕨不同部位总黄酮和元素的分析［J］． 浙江中
医药大学学报，2009，33(4):587 － 588．
［5］ 任冰如，夏冰，李维林，等． HPLC法测定乌韭的荭草苷和牡荆素含
量［J］．林产化学与工业，2007，27(5):103 － 106．
［6］ 李坤平，潘天玲，高崇凯，等． HPLC法测定布渣叶中牡荆苷和异鼠
李素 － 3 － O － β － D芸香糖苷的含量［J］．药物分析杂志，2010，30
(9):1746 － 1749．
［7］ 吴晓宁，余陈欢，徐静红．乌蕨总黄酮体外抗氧化活性的研究［J］．
医药导报，2010，29(3):292 － 294．
(收稿日期:2013-10-28 编辑:林飞)
作者简介:顾成刚(1975 －)，男，湖北中医药大学学院讲师，研究方向:中药制剂。
通讯作者:郑国华(1964 －)，男，湖北中医药大学教授，博士生导师，研究方向:中药新制剂、新剂型研究，E － mail:2665243804@ qq． com。
当仁通便灵颗粒提取工艺优选
顾成刚1，胡俊杰1，郑国华1，吴宁2
(1．湖北中医药大学药学院，湖北 武汉 430065;2．武汉药谷科技开发有限公司，湖北 武汉 430075)
摘要:目的 确定当仁通便灵颗粒的最佳乙醇提取工艺。方法 以阿魏酸的含量为指标，采用正交试验( L93
4 ) 优
选提取工艺条件。结果 影响醇提工艺的因素的程度依次为提取次数、乙醇体积分数、提取时间和固液比。最适工艺
条件为加 6 倍量 70%乙醇，加热回流提取 2 次，每次 1． 5h。结论 工艺稳定、可行。
关键词:当仁通便灵颗粒;正交试验;阿魏酸
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标识码:A doi: 10. 3969 / j. issn. 1008 － 987x. 2014. 01. 17
Alcohol Extract Technology of Dangrentongbianling Particles
Gu Chenggang1，Hu Junjie1，Zheng Guohua1，Wu Ning2
(1． College of Pharmacy，Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan 430065;
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