全 文 ：HPLC法测定溪黄草配方颗粒中咖啡酸、
牡荆苷和迷迭香酸的含量
陈向东1，朱德全1，张光大1，何文江1，刘法锦2，魏 梅1
(1. 广东一方制药有限公司，广东 佛山 528244;2. 广东省中医研究所，广东 广州 510095)
摘要 目的:建立 HPLC法同时测定溪黄草配方颗粒中咖啡酸、牡荆苷与迷迭香酸的含量。方法:色谱柱为
Dikma Diamonsil C18柱(250 mm ×4. 6 mm，5 μm) ;流动相为乙腈(A)-1. 0%冰醋酸溶液(B) ，梯度洗脱;柱温为 30
℃;体积流量为 1. 0 mL /min;检测波长为 330 nm。结果:咖啡酸、牡荆苷和迷迭香酸对照品分别在 0. 0252 ～ 0. 3150
μg(r1 = 1. 0000)、0. 0348 ～ 0. 4350 μg(r2 = 0. 9998)和 0. 0608 ～ 0. 7600 μg(r3 = 1. 0000)范围内，线性关系良好，平均
回收率(n = 6)分别为 98. 15%、102. 32%、99. 92%;ＲSD 分别为 1. 11%、1. 14%、1. 32%。结论:该测定方法简单快
捷，灵敏度高，稳定、重复性好，为溪黄草配方颗粒的质量控制和评价提供了依据。
关键词 溪黄草;配方颗粒;咖啡酸;牡荆苷;迷迭香酸;HPLC
中图分类号:Ｒ284. 2 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2013)09-1530-03
收稿日期:2013-03-05
基金项目:广东省科技创新平台建设专项(2011A091000005)
作者简介:陈向东(1975-) ，男，高级工程师，主要从事中药配方颗粒研究工作;Tel:0757-85603332，E-mail:chenxd66@ 126. com。
溪黄草为唇形科植物线纹香茶菜 Isodon striatus
(Benth. )Kudo或溪黄草 Isodon sorra (Maxim. )Kudo
的干燥地上部分〔1〕。溪黄草为我国南方常用中药
材，含有黄酮苷、酚类、氨基酸、有机酸、壳杉烯二萜
类、线纹香茶菜酸等多种成分，具有清热利湿、凉血
散瘀等功效，临床用于湿热黄疸、腹胀胁痛、湿热泄
泻、热毒泻痢、跌打损伤〔2〕。
溪黄草配方颗粒采用水提取制备而成，临床经
调配组成复方汤剂使用，主要以水溶性成分为主，由
于多数萜类成分水溶性不佳，在产品中的含量较低，
建立含量测定方法的意义不大，通过方法摸索，本实
验首次采用 HPLC法，在同一波长下，同时测定溪黄
草配方颗粒中的咖啡酸、牡荆苷与迷迭香酸的含量，
由于这 3 种成分水溶性相对较好，在溪黄草配方颗
粒中含量较高，因此，对全面控制产品质量具有较高
的现实意义。
1 仪器与材料
Agilent1260 系列液相色谱仪(G1311C 四元泵，
G1129B自动进样器，G1314B 紫外检测器，Chemsta-
tion色谱工作站) ，ABT-5DM 十万分之一电子天平
(德国 KEＲN 公司) ，BS110S 万分之一天平(北京赛
多利斯科学仪器有限公司) ，BS200S-WEI 千分之一
电子天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司) ，CQ-
25-6 超声波清洗器(上海音波声电科技公司)。
咖啡酸(批号:110885-200102)、牡荆苷(批号:
111687-200602)、迷迭香酸(批号:111871-201001)
对照品由中国食品药品检定研究院提供;溪黄草配
方颗粒(广东一方制药有限公司，批号:1008267、
1108224、1205432、1209252)。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱:Dikma Diamonsil C18色谱
柱(250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ;流动相:乙腈(A)-
1. 0%冰醋酸(B) ，梯度洗脱，洗脱程序见表 1;流速:
1. 0 mL /min;检测波长:330 nm;柱温:30 ℃。进样
量:10 μL。在此条件下，咖啡酸、牡荆苷和迷迭香酸
色谱峰与相邻成分均可达到基线分离，见图 1。
表 1 流动相梯度洗脱程序
时间 /min 流动相 A/% 流动相 B /%
0 ～ 28 15→17 85→83
28 ～ 45 17→38 83→62
45 ～ 50 38→65 62→35
2. 2 对照品溶液的制备 分别精密称取咖啡酸对
照品 3. 16 mg、牡荆苷对照品 4. 34 mg、迷迭香酸对
照品 7. 60 mg，置 10 mL 量瓶中，加 80%甲醇定容，
摇匀，作为对照品储备液;准确移取对照品储备液
1. 0 mL，置于 25 mL容量瓶中，加 80%甲醇定容，摇
匀，即得(每 1 mL 分别含咖啡酸 12. 6 μg、牡荆苷
17. 4 μg和迷迭香酸 30. 4 μg)。
2. 3 供试品溶液的制备 取溪黄草配方颗粒适
量，研细，取约 0. 10 g，精密称定，置 50 mL具塞锥形
瓶中，精密加入 80%甲醇 25 mL，称定重量，超声处
理(功率 200 W，频率 25 kHz)30 min，放冷，再称定
重量，用 80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取
续滤液，即得。
·0351· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 9 期 2013 年 9 月
图 1 混合对照品(A)和溪黄草配方颗
粒样品(B)HPLC色谱图
1. 咖啡酸 2. 牡荆苷 3. 迷迭香酸
2. 4 标准曲线及线性范围 精密吸取混合对照品
溶液 2、4、8、10、15、20、25 μL注入高效液相色谱仪，
按上述色谱条件测定峰面积。以进样量为横坐标
(X)、峰面积为纵坐标(Y) ，进行回归处理，计算线
性回归方程、线性范围和相关系数(r) ，结果见表 2。
2. 5 精密度试验 精密吸取同一样品(批号:
1205432)的供试品溶液，进样 10 μL，重复进样 6
次，测定峰面积，咖啡酸、牡荆苷、迷迭香酸峰面积
ＲSD值分别为 0. 57%、0. 25%、0. 76%。结果表明
仪器精密度良好。
2. 6 稳定性试验 精密吸取同一样品(批号:
1205432)的供试品溶液，分别于 0、4、8、12、18、24 h
表 2 咖啡酸、牡荆苷和迷迭香酸的标准
曲线、线性范围及相关系数
对照品 标准曲线 线性范围 /μg r
咖啡酸 Y1 = 4714. 7X1 + 0. 4495 0. 0252 ～ 0. 3150 1. 0000
牡荆苷 Y2 = 1559. 6X2 + 4. 1435 0. 0348 ～ 0. 4350 1. 0000
迷迭香酸 Y3 = 2968X3 + 3. 1901 0. 0608 ～ 0. 7600 0. 9998
进样测定，测得 3 种成分峰面积，咖啡酸、牡荆苷、迷
迭香酸峰面积 ＲSD 值分别为 1. 39%、0. 33%、
0. 74%。结果表明供试品溶液在 24 h内基本稳定。
2. 7 重复性试验 精密称取批号为 1205432 的样
品 6 份，每份 0. 1 g，照“2. 3”项下方法制得供试品溶
液，按“2. 1”项色谱条件进样，测定 3 种成分的含
量，咖啡酸、牡荆苷、迷迭香酸含量 ＲSD 分别为
1. 46%、0. 84%、0. 85%。结果表明本方法重复性较
好。
2. 8 加样回收率试验 取已知含量的同一溪黄草
配方颗粒(批号:1205432，咖啡酸含量为 0. 1323
mg /g、牡荆苷含量为 0. 2519 mg /g、迷迭香酸含量为
0. 3881 mg /g)6 份，每份 0. 050 g，精密称定，分别精
密加入咖啡酸(浓度为 0. 3160 mg /mL)、牡荆苷(浓
度为 0. 4340 mg /mL)和迷迭香酸对照品溶液(浓度
为 0. 7600 mg /mL)0. 5 mL，按“2. 3”项下方法制备
供试品溶液，计算加样回收率和相对标准偏差。结
果见表 3。
2. 9 样品的测定 取溪黄草配方颗粒 4 批，按
“2. 3”项下方法制备供试品溶液，精密吸取供试品
溶液及对照品溶液各 10 μL，按“2. 1”项色谱条件进
样，测定并计算咖啡酸、牡荆苷和迷迭香酸的含量。
结果见表 4。
表 3 加样回收试验结果
组分 取样量/g
样品含量
/mg
加入量
/mg
测得总量
/mg
回收率
/%
平均回收率
/%
ＲSD
/%
咖啡酸 0. 0504 0. 1324 0. 1580 0. 2892 99. 24 98. 15 1. 11
0. 0507 0. 1331 0. 1580 0. 2871 97. 47
0. 0506 0. 1329 0. 1580 0. 2868 97. 41
0. 0507 0. 1331 0. 1580 0. 2876 97. 78
0. 0501 0. 1316 0. 1580 0. 2893 99. 81
0. 0513 0. 1347 0. 1580 0. 2883 97. 22
牡荆苷 0. 0504 0. 2519 0. 2170 0. 4736 102. 17 102. 32 1. 14
0. 0507 0. 2534 0. 2170 0. 4726 101. 01
0. 0506 0. 2529 0. 2170 0. 4752 102. 44
0. 0507 0. 2534 0. 2170 0. 4788 103. 87
0. 0501 0. 2504 0. 2170 0. 4747 103. 36
0. 0513 0. 2564 0. 2170 0. 4757 101. 06
·1351·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 9 期 2013 年 9 月
续表 3
组分 取样量/g
样品含量
/mg
加入量
/mg
测得总量
/mg
回收率
/%
平均回收率
/%
ＲSD
/%
迷迭香酸 0. 0504 0. 3810 0. 3800 0. 7661 101. 34 99. 92 1. 32
0. 0507 0. 3833 0. 3800 0. 7611 99. 42
0. 0506 0. 3825 0. 3800 0. 7599 99. 32
0. 0507 0. 3833 0. 3800 0. 7583 98. 68
0. 0501 0. 3787 0. 3800 0. 7656 101. 82
0. 0513 0. 3878 0. 3800 0. 7637 98. 92
表 4 4 批溪黄草配方颗粒样品测定结果(n =4)
批号 咖啡酸/(mg /g)
牡荆苷
/(mg /g)
迷迭香酸
/(mg /g)
1008267 2. 6187 5. 0633 7. 6943
1108224 2. 6379 5. 1060 7. 7616
1205432 2. 6347 4. 9816 7. 7431
1209252 2. 5152 5. 0002 7. 5189
3. 讨论
3. 1 检测波长的选择 在 200 ～ 800 nm下，分别对
咖啡酸、牡荆苷、迷迭香酸进行全波长扫描，咖啡酸
最大吸收波长为 323 nm、牡荆苷为 340 nm、迷迭香
酸为 329 nm。在波长为 330 nm处，咖啡酸、牡荆苷
和迷迭香酸均有较大的吸收，故选择 330 nm为测定
波长。
3. 2 流动相条件的考察 流动相考察了甲醇、乙
腈和磷酸、甲酸、醋酸作为流动相，发现乙腈-1. 0%
冰醋酸溶液的洗脱效果最佳。初步考察了等度洗脱
分离溪黄草的咖啡酸、牡荆苷和迷迭香酸 3 种成分，
在保留时间和分离度方面的效果不理想，最后采用
乙腈-1. 0%冰醋酸溶液进行梯度洗脱。
3. 3 本实验采用 HPLC 法同时对溪黄草配方颗粒
中咖啡酸、牡荆苷和迷迭香酸进行含量测定，首次测
定了溪黄草配方颗粒中的牡荆苷成分。所建立的方
法简单快捷、重复性好，为溪黄草及其配方颗粒的质
量控制提供了实验依据。
参 考 文 献
［1］国家药典委员会 . 中国人民共和国药典［S］. 一部 . 北
京:中国医药科技出版社，2010:附录 26.
［2］广东省食品药品监督管理局 . 广东省中药材标准［S］.
广州:广东省科技出版社社，2011:
檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳
347.
·报道·
广东省药学会成立药学史专业委员会
［本刊讯］广东省药学会药学史专业委员会成立大会于 2013 年 9 月 12 日在广东省中山市召开，参加这次会议的有广东省
及香港、澳门药学界的专家学者共 80 多人。会议通过了由广州中医药大学附属中山医院梅全喜教授担任主委、香港浸会大学
赵中振教授、《中药材》杂志元四辉主编等 12 人担任副主委的委员会人员组成，确定挂靠单位为中山市中医院，至此，广东省
药学会药学史专业委员会正式成立。
广东省药学会药学史专业委员会的成立成为继上海、北京、江苏、四川后第五个成立的省级药学会的药史分会。将积极
开展具有广东地方特色的药学史研究工作，包括知名的药厂药店史、名优成药史、岭南地方药事史、药学机构史、药品监管史、
粤港澳药学交流史、优势药学学科发展史、省药学会发展史、地产药材与地道药材栽种史、药材集散史及应用历史、凉茶应用
发展史、古代药学人物、知名药厂药店创始人以及当代著名药学人物如院士、杰青、历届药学会理事长等方面的研究。
·2351· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 9 期 2013 年 9 月