全 文 ：第 3 期
收稿日期：2010－09－20
基金项目：韩山师范学院青年基金项目（LQ200812）
作者简介：林燕如（1982－），女，广东揭阳人，实验师，硕士，从事天然产物提取与纯化研究，（电话）0768－2318515（电子信箱）lyrhuaxue＠163．com；
通讯作者，曹迁永，副教授，博士，（电子信箱）cqyong＠ncu．edu．cn。
第 50 卷第 3期
2011 年 2 月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 50 No.3
Feb．，2011
金毛狗脊（Cibotium barometz（L）J．Sm．）又名金
毛狗，为蚌壳蕨科（Dicksoniaceae）金毛狗属植物，广
泛分布在我国南方和西南地区，其根茎为常用中药
狗脊［1］。
据前人研究， 金毛狗脊嫩叶具有清热凉血、利
尿通淋等功效，可治疗肠炎、痢疾等症［2］。 金毛狗脊
叶也含有丰富的活性物质， 主要为黄酮类物质 ［3，4］。
黄酮类化合物广泛分布于植物药中，其主要作用有
抗菌、抗突变、降压、消热解毒、镇静、利尿、抗氧化、
抗癌，以及降血糖、降血脂、抗病毒、抗衰老等［5］。 但
金毛狗脊叶却常常被丢弃，造成资源浪费，为了更
好地开发金毛狗脊叶的药用价值，笔者对金毛狗脊
叶总黄酮的分离纯化工艺进行了初步研究。
大孔吸附树脂是近十几年来发展起来的一类
有机高分子聚合物吸附剂， 它的物理化学稳定性
高，吸附选择性独特，不受无机物存在的影响，再生
简便，解吸条件温和，使用周期长，易于构成闭路循
环，节省费用等被广泛用于生化物质的分离纯化［6，7］。
本试验选择了 4 种大孔吸附树脂对金毛狗脊
叶中总黄酮粗提物进行静态吸附解吸，从中筛选出
选择性好、吸附率高、易解吸的适合金毛狗脊叶总
黄酮粗提物分离纯化的大孔树脂，并对其纯化的方
法和条件做了进一步的研究，为今后工业化研究和
开发金毛狗脊叶黄酮类产品奠定了基础。
大孔树脂纯化金毛狗脊叶黄酮的工艺研究
林燕如 1，2，曹迁永 1
（1．南昌大学化学系，江西 南昌 330031；2．韩山师范学院化学系， 广东 潮州 521041）
摘要：比较 4 种大孔树脂纯化金毛狗脊叶总黄酮的性能及工艺，结果表明，DA－201 树脂对金毛狗脊叶总
黄酮有良好的吸附及解吸性能。其静态分离纯化工艺的最佳参数为 DA－201 大孔树脂与提取液的比例为
1∶5（W∶V，g∶mL）、提取液 pH 值为 3、恒温振荡时间 2 h、解吸液为 60％的乙醇。 动态分离纯化工艺的最佳
参数为吸附和解吸最佳流速均为 1 mL ／ min、解吸液体积为 4 倍柱体积。
关键词：大孔树脂；金毛狗脊叶；总黄酮；纯化
中图分类号：R284．2 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2011）03－0583-04
Study on the Purification of Flavonoid from the Leaves of Cibotium barometz（L）J. Sm.
by Macroporous Resin
LIN Yan－ru1，2，CAO Qian－yong1
（1． Department of Chemistry，Nanchang Normal University，Nanchang 330031，Jiangxi，China；
2． Department of Chemistry，Hanshan Normal University，Chaozhou 521041，Guangdong，China）
Abstract： The characteristics and technology of four types of macroporous resins were compared to separate tota l flavonoids
extracted from Cibotium barometz （L）J. Sm． The results showed that DA－201 resin with good absorbability and desorption
properties was the best for purifying the total flavonoids in C． barometz （L）J. Sm． The best technical parameters of its static
adsorption were： the ratio of resins and extracts at 1∶5 （W∶V，g∶mL）， pH value at 3， shake at constant temperature for 2h，
and 60％ alcohol as eluant． In dynamic desorption， the best technical parameters were： both the absorption and desorption
eluant flow speed were at 1 mL ／ min and the volume of the eluant was 4 times of the resin bed．
Key words： macroporous resin； Cibotium barometz（L）J. Sm.； flavonoid； purification
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2011.03.051
湖 北 农 业 科 学 2011 年
图 3 金毛狗脊叶的黄酮得率
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0
得
率
//%
FL-1 FL-3 AB-8 DA-201
树脂型号
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 金毛狗脊叶与试剂 金毛狗脊叶采于潮州
市西湖山上，洗净，自然晾干，60℃烘干，粉碎，备用。
芦丁对照品 （国药集团化学试剂有限公司）；FL－1、
FL－3、AB－8、DA－201 大孔吸附树脂（天津欧瑞生物
科技有限公司）；其他试剂均为分析纯。
1．1．2 主要仪器设备 752S 紫外可见分光光度计
（上海棱光技术有限公司）；格兰仕电脑型烧烤微波
炉（顺德市格兰仕电器实业有限公司）；BT－100B 数
显恒流泵 （上海泸西分析仪器厂）；ET－Q 型气浴恒
温振荡器 （常州荣冠实验分析仪器厂）；PHS－3C 精
密酸度计。
1．2 方法
1．2．1 标准曲线的绘制 参照文献［8］中的方法，
以吸光值（A）为纵坐标，芦丁质量浓度（C）为横坐
标，绘制标准曲线，得到芦丁质量浓度（C）与吸光值
（A）关系曲线的回归方程为 A＝8．454 1C＋0．009 5，
r＝0．998 8。
1．2．2 树脂的预处理［9］ 新购吸附剂含有未聚合单
体、致孔剂、分散剂等残留的杂质成分，使用前必须
加以处理。 具体操作如下：用足量的 95％乙醇浸泡
24 h，抽滤，再用大量去离子水洗涤至无乙醇味即可。
处理完毕后装入广口瓶中，用去离子水浸泡，备用。
1．2．3 金毛狗脊叶总黄酮粗提液的制备及含量测
定 称取 5．0 g 金毛狗脊叶样品，加入 20.0 mL 去离
子水，微波 1 min 后，冷却至室温，加入 110.0 mL 去
离子水及 90.0 mL 95％乙醇，混合均匀后，于 90℃恒
温槽中回流 1 h。 得到萃取液，减压抽滤，收集滤液，
备用。 按照标准曲线的方法测定总黄酮含量。
1．2．4 树脂对金毛狗脊叶黄酮吸附率的测定 ［10］
准确称取预处理好的树脂 1．0 g， 置于 50.0 mL具塞
磨口三角瓶中，加入一定浓度的金毛狗脊叶黄酮粗
提液 10.0 mL，置于气浴恒温振荡器中 （25℃ ，120
r ／ min），充分振荡 12 h，至吸附平衡，取上层清液，测
定其黄酮含量，并按照下式算出吸附率。
吸附率＝
提取液浓度-吸附平衡后溶液浓度
提取液浓度
×100%
1．2．5 树脂对金毛狗脊叶黄酮解吸率的测定 ［10］
将 1．2．4 中充分吸附后的树脂用去离子水清洗至树
脂表面无黄酮溶液残留，滤纸吸干树脂表面残留的
溶液，然后置于 50.0 mL具塞三角瓶中，加入 10.0 mL
60％乙醇，置于气浴恒温振荡器中（25℃，120 r ／ min）
振荡解吸 12 h， 至解吸平衡，取上层清液测定总黄
酮含量，并按照下式算出解吸率和得率。
解吸率＝（解吸液浓度×解吸液体积） ／ ［（提取液
浓度－吸附平衡后溶液浓度）×提取液体积］×100％；
得率＝（解吸液浓度×解吸液体积） ／ （提取液浓度×提
取液体积）。
2 结果与分析
2．1 不同树脂对金毛狗脊叶黄酮的静态吸附率和
解吸率［10］
FL－1、FL－3、AB－8、DA－201 大孔树脂对金毛狗
脊叶黄酮粗提液中金毛狗脊叶总黄酮的静态吸附
率见图 1，静态解吸率见图 2，黄酮得率结果见图 3。
从图 1～3可以看出，FL－1对金毛狗脊叶提取液
中的黄酮类物质具有极高的吸附能力，但解吸率很
低， 说明金毛狗脊叶中黄酮的极性较大，FL－1 树脂
与其的结合能力较强，不利于后续黄酮类物质的解
吸。 DA－201 对金毛狗脊叶总黄酮的吸附率和解吸
率都较高，得率可达 40．1％，而 FL－3 和 AB－8 树脂
虽有一定的吸附和解吸能力， 但效果均不如 DA－
201树脂。 因此，选用 DA－201树脂纯化金毛狗脊叶
总黄酮。
图 1 4 种大孔树脂对金毛狗脊叶黄酮的静态吸附率
100
80
60
40
20
0
吸
附
率
//%
FL-1 FL-3 AB-8 DA-201
树脂型号
80
70
60
50
40
30
20
10
0
吸
附
率
//%
FL-1 FL-3 AB-8 DA-201
树脂型号
图 2 4 种大孔树脂对金毛狗脊叶黄酮的静态解吸率
584
第 3 期
振荡吸附
静置吸附80
70
60
50
40
30
20
10
0
吸
附
率
//%
1 2 3 4 5 6 7 8
时间//h
图 4 不同吸附方式下作用时间对黄酮静态吸附的影响
2．2 DA－201大孔树脂纯化条件的确定
2．2．1 DA－201 大孔树脂静态吸附与解吸试验 按
照 1．2．4、1．2．5 的试验方法， 考察各种不同条件下，
DA－201 树脂对提取液的吸附和解吸能力。 ①不同
吸附方式下作用时间对静态吸附的影响 ［11］。 准确吸
取两份提取液 20．0 mL，各加入 4．0 g树脂，分别进行
振荡吸附与静置吸附。 每小时吸取 0．5 mL，测定其
黄酮浓度，得出吸附率，绘制静态吸附动力学特征
曲线（图 4）。图 4表明，振荡吸附的效果明显优于静
置吸附，并且当振荡吸附时间达到 2 h 时，吸附量趋
于饱和，故确定静态吸附时间为 2 h。 ②树脂用量对
静态吸附的影响［12］。 将树脂与提取液按照不同的比
例即料液比混合（1∶5、1∶10、1∶20、1∶30），并置于气浴
恒温振荡器中（摇床 120 r ／ min），充分振荡 3 h，测定
树脂的吸附效果。 结果表明 （图 5）， 料液比为 1∶5
时，树脂对黄酮的吸附率最高，可达 81．2％。 ③提取
液 pH 值对静态吸附的影响［13］。 将提取液调成不同
pH值进行静态吸附。 结果表明（图 6），提取液的 pH
值对树脂的吸附作用有很大的影响，在中性条件下
树脂的吸附率较低，在酸性（pH 值为 3）和碱性（pH
值为 12）条件下吸附率较高，分别可达到 83．2％和
81．8％。④解吸液体积浓度对静态解吸的影响。配制
一系列不同体积百分数的乙醇溶液，准确吸取一定
量体积，加入到已吸附饱和的树脂，振荡 12 h 后，测
定解吸率。 结果表明（图 7），60％的乙醇溶液对树脂
的解吸效果最好，乙醇浓度过大或过小都不能达到
最佳的解吸效果。 这是因为，黄酮类物质易溶于乙
醇，而在水中的溶解度较低，乙醇浓度的降低不利
于解吸；当乙醇浓度偏高时，解吸液的极性降低，同
样也不利于解吸。 只有当乙醇浓度适中时才可达到
较好的解吸效果［14］。
2．2．2 DA－201 大孔树脂动态吸附与解吸试验 ①
流速对动态吸附的影响［14］。 将预处理好的树脂装入
层析柱中，柱体积为 15.0 mL，通过恒流泵控制提取
液流速分别为 1、2、3 mL ／ min， 每 5．0 mL 收集一次
流分，并测定其浓度，得出吸附率。 结果表明（图 8、
图9），流速为 1 mL ／ min 时的泄漏点较晚出现，且吸
附率较高，其原因可能是流速较慢时提取液与树脂
接触的时间较长，有利于黄酮类物质从液相扩散到
树脂内部，从而提高了吸附率。 因此，动态吸附的最
佳流速为 1 mL ／ min。 ②流速对动态解吸的影响 ［9］。
将已吸附饱和的树脂装入层析柱中， 柱体积为 15.0
mL，用 60％的乙醇溶液进行动态解吸，通过恒流泵
控制乙醇流速分别为 1、2、3 mL ／ min， 每 5．0 mL 收
集一次流分，并测定其浓度。 结果表明（图 10），以
1 mL ／ min 的流速进行解吸得到的峰形最窄，峰值最
高，几乎无拖尾现象，解吸效果较好，而以 2 mL ／ min
和 3 mL ／ min 的流速解吸得到的峰值较低。 这可能
是由于流速过快时，乙醇溶液与树脂的接触时间较
短， 乙醇分子来不及与树脂充分作用就已流出，导
致解吸曲线的峰值较低，解吸效果较差。 因此，选用
1 mL ／ min 为解吸流速。 由曲线图也可看出，当解吸
液体积为 4 倍柱体积（60．0 mL）时，树脂中黄酮类物
质已基本被解吸下来。
图 7 解吸液体积百分数对静态解吸的影响
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
吸
附
率
//%
1∶5 1∶10 1∶20 1∶30
料液比
图 5 树脂用量对静态吸附的影响
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
吸
附
率
//%
3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
提取液 pH 值
图 6 提取液 pH 值对静态吸附的影响
60
50
40
30
20
10
0
解
吸
率
//%
40 50 60 70 80 90
乙醇体积百分数//%
林燕如等：大孔树脂纯化金毛狗脊叶黄酮的工艺研究 585
湖 北 农 业 科 学 2011 年
（责任编辑 田宇曦）
图 10 流速对动态解吸的影响
1.600
1.400
1.200
1.000
0.800
0.600
0.400
0.200
0.000
浓
度
//m
g/
m
L
5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75
流分体积//mL
3 mL/min
2 mL/min
1 mL/min
3 结论
考察了 4 种不同型号大孔树脂对金毛狗脊叶
黄酮的吸附和解吸能力。 结果表明，DA－201大孔树
脂对金毛狗脊叶黄酮具有良好的纯化作用。 其静态
分离纯化工艺的最佳条件为 DA－201 大孔树脂与提
取液的比例为 1∶5、提取液 pH值为 3、恒温振荡时间
2 h、解吸液为 60％的乙醇。 动态分离纯化工艺的最
佳条件为吸附和解吸最佳流速均为 1 mL ／ min、解吸
液体积为 4倍柱体积。
金毛狗脊叶植物资源分布广，黄酮类物质含量
较高，利用大孔树脂考察分离纯化金毛狗脊叶黄酮
的最佳工艺，为其在医药和食品加工中的应用提供
了理论基础。
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图 8 泄露曲线
58
57
56
55
54
53
52
51
50
49
48
吸
附
率
//%
1 2 3
流速//mL/min
图 9 流速对动态吸附的影响
12.000
10.000
8.000
6.000
4.000
2.000
0.000
浓
度
//m
g/
m
L
5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75
流分体积//mL
1 mL/min
2 mL/min
3 mL/min
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