全 文 ：·药品质量及检验·
高效液相色谱法测定半边旗抗肿瘤有效成分 5F的含量
梁统1 ,覃燕梅2 ,邓亦峰1 ,梁念慈2(1.广东医学院广东天然药物研究开发实验室 ,广东湛江 524023;2.广东医学院生化教研室 ,广东
湛江 524023)
摘要:目的　建立半边旗抗肿瘤有效成分 11α-羟基-15-氧-16 烯-对映贝壳杉烷-19-酸(5F)的 HPLC 定量测定方法。方法　流
动相由乙腈-甲醇-50 mmol·L -1醋酸盐缓冲液(30∶5∶65 , pH4.1)组成;流速 1.0 mL·min-1 , 检测波长 242 nm。结果　5 ～ 150
mg·L-1范围内呈线性(r=0.999 7), 日内 、日间 RSD 1.8%～ 4.8%, 回收率 95.5%。结论　该方法精密度高 、专一性好 、能
准确检测半边旗 5F 含量。
关键词:半边旗;高效液相色谱;药物分析
中图分类号:R917.770.1 文献标识码:A 文章编号:1001-2494(2002)03-0209-03
Determination of an antitumor component 5F in Pteris semipinnata by HPLC
LIANG Tong
1 ,QIN Yan-mei2 , DENG Yi-feng1 , LIANG Nian-ci2(1.Guangdong Laboratory for Research and Develop-
ment of Natural Drugs , Guangdong Medical College , Zhanjiang 524023 , China;2.Department of Biochemistry , Guangdong
Medical College , Zhanjiang 524023 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To develop a HPLC method for the determination of ent-11α-hydro xy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic- acid
(5F), an antitumor component from Pteris semipinnata L..METHODS　Acetonitril-methanol-phosphate buffer(30∶5∶65 , pH 4.1)
w as used as the mobile phase , the flow rate was 1.0 mL·mL-1 with detection waveleng th at 242 nm.RESULT　The linear range of
5F w as over 5～ 150 mg·L -1 with a correlation coefficient of 0.999 7.The variation within-day and between-day were 1.8%～ 4.
8%, the recovery of the method was 95.5%.CONCLUSION　This me thod provides an exact and precise way to determine 5F in
Pteris semipinnata L.
KEY　WORDS:Pteris semipinnata;HPLC;assay
基金项目:国家自然科学基金资助项目(39870900) 作者简介:梁统 ,男 ,副教授 Tel:(0759)2388581-1 , Fax:(0759)2284104
　　半边旗(Pteris semipinnata L.)为凤尾蕨科凤
尾属植物 ,民间用于治疗菌痢 、肝炎 、肠炎 、蛇伤 、外
伤出血等 ,具有化湿消肿 、清热解毒的功能[ 1] 。我
们在筛选抗肿瘤化合物时发现半边旗的提取物具有
显著的抗肿瘤活性 ,并从中分离出 11α-羟基-15-氧-
16烯-对映贝壳杉烷-19-酸(简称 5F)等几种抗肿瘤
活性较强的二萜类化合物[ 2～ 4] 。为进一步开发利
用半边旗的药用价值 ,建立半边旗抗肿瘤有效成分
的定量检测方法 ,对原药材质量的检查以及生产工
艺过程的监控很有必要。本文首次报道半边旗中
5F 的高效液相色谱定量检测方法 ,并对不同产地半
边旗 5F 含量进行探讨。
1　材料和方法
1.1　仪器和试剂
高效液相色谱仪(法国 Gilson 公司), 反相
Spherisorb C18色谱柱 , 250 mm×4.6 mm , 5 μm(大
连依利特公司 ,前加保护柱), 8000α型液-质联用
仪(岛津公司);5F 对照品(本实验室兰柳波教师提
供);半边旗(分别采自广西 、广州郊区 ,廉江);乙腈 、
甲醇为色谱纯 ,其余试剂为分析纯。
1.2　样品预处理
称取半边旗全草(地上部分)过 40 目筛的粉末
各 3份 ,每份约 2 g(准确称量),用 25 mL 75%乙醇
加热回流提取2次 ,每次 2 h ,合并两次提取液 ,冷却
后过滤 ,定容至 50 mL 。
1.3　色谱条件
流动相由乙腈-甲醇-50 mmol·L-1醋酸盐缓冲
液(30∶5∶65 , pH4.1)组成;流速 1.0 mL·min-1 ,紫
外检测波长 242 nm;液-质联用采用 APCI(大气压
电离)源 ,负离子检测;室温 ,进样体积 10μL 。
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2　结　果
2.1　5F 参照品光谱图
5F 参照品用甲醇溶解 ,进行紫外扫描 ,最大吸
收波长为 242nm ,结果见图 1。
图 1　5F光谱图
Fig 1　Spectrogr am of 5F
2.2　分析图谱
5F对照品 、半边旗提取物液相色谱图见图 2。
半边旗提取物液相色谱图中的 5F 峰经质谱鉴定 ,
分子量为 332 ,与对照品 5F 相同 ,证明无干扰。
图 2　分析图谱
A-5F 参照品液相色谱图;B-半边旗提取物液相色谱图
Fig 2　Chromato gram
A-HPLC chromatog ram of 5F contrast;B-HPLC chroma togram of Pteris semip-
innala ex traction
2.3　标准曲线的制备
精密称取 5F 参照品用甲醇溶解 ,配成 1 mg·
mL-1的储备液 , 吸取储备液用甲醇稀释成 5 , 10 ,
30 ,60 , 100 , 150 μg·mL-1系列浓度的对照品溶液 ,
按色谱条件进行测定。以峰高为纵坐标(Y),对应
的浓度为横坐标(X)作工作曲线 ,线性方程为 Y =
0.095 17X +0.079 00 , r=0.999 7。该方法在 5 ～
150μg·mL-1范围内呈良好线性关系 。
2.4　日内 、日间精密度
按“2.3”项配制3种浓度的5F 溶液 ,测定日内 、
日间精密度 。结果见表 1。
表 1　3 种浓度 5F 日内及日间精密度试验.n =6
Tab 1　P recision of 5F within-day and be tw een-day.n =6
标准溶液浓
度/μg·mL-1
测得浓度/μg·mL-1
日内 日间
RSD/ %
日内 日间
20 19.56±0.88 19.57±0.92 4.5 4.7
60 60.14±1.61 60.25±1.76 2.7 2.9
100 100.45±1.82 100.46±1.93 1.8 1.9
2.5　样品测定
取供试品按色谱条件测定 ,测得的峰高代入线
性方程计算含量 ,结果见表 2。
表 2　不同产地半边旗 5F的含量.n=3
Tab 2 　Content of 5F of Pteris semipinnata in different pro-
ducing area.n=3
样品产地 含量/mg·g-1(生药) 平均值/mg·g -1(生药) RSD/ %
广州郊区 1.069 1.005±0.061 6.1
0.947
0.998
广东廉江 0.835 0.837±0.038 4.5
0.800
0.875
广西 0.847 0.791±0.054 6.8
0.739
0.788
2.6　回收率试验
在已知含量样品中 ,精密加入一定量的 5F 对
照品溶液 ,按上法处理样品 、测定 ,结果见表 3。平
均回收率为 95.6%。
表 3　5F 回收率试验
Tab 3　Recovery of 5F
样号 样品 5F含量平 加入 5F量 测得5F 含量 平均回收率
均值/mg n=5 /mg / mg / %
1 0.250 0.984
2 0.250 0.959
3 0.750 0.250 0.897 95.6
4 0.600 1.307
5 0.600 1.245
6 0.600 1.356
3　讨　论
3.1　经紫外扫描 , 5F 的最大吸收波长为 242 nm ,
故选用 242 nm 波长测定。5F 含有一个羧基[ 4] ,流
动相缓冲液的 pH 值在 3.0 ～ 6.5范围内变化对其
保留时间有较大影响 ,在此范围内 ,pH 值降低 ,其羧
基离解程度下降 ,脂溶性增强 ,容量因子增大 ,保留
时间延长;反之 ,保留时间缩短。半边旗中的其它干
扰物在 242 nm 波长亦有吸收 ,流动相的 pH 值在
6.0时 ,5F 峰与前面干扰峰部分重叠 ,流动相的 pH
值降低 ,其它干扰峰的保留时间不受影响 ,而 5F 的
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容量因子增大 ,保留时间延长 ,因此 ,选择合适的 pH
很重要 ,在本实验的条件下 ,可使 5F 和前面的干扰
峰得到较好地分离。5F 的分子量为 332 ,经液-质联
用质量扫描证明 ,5F 峰无其它物质干扰。
3.2　中草药中的成分复杂 ,干扰物质多 ,样品不经
纯化处理 ,对色谱柱会产生污染 ,本实验采用在分析
柱前加保护柱的方法 ,定期置换保护柱 ,并经常冲洗
分析柱 ,亦可使分析柱的寿命得到较大的延长 。
参考文献
[ 1] 丁恒山.中国药用孢子植物[ M ] .上海:上海科技出版社 ,
1982:104.
[ 2] 崔燎 ,梁念慈 ,陈志东,等.半边旗体内外抗癌作用及急性毒性
研究[ J] .中药材 , 1996 , 19(1):33.
[ 3] 张晓 ,崔燎 ,梁念慈 ,等.半边旗有效成分及抗肿瘤活性研究
[ J] .中国药学杂志 , 1997 , 32:37.
[ 4] 李金华 ,梁念慈 ,莫丽儿 ,等.半边旗 5种成分体外细胞毒活性
比较及构效关系分析[ J] .药学学报 , 1998 , 33(9):641.
(收稿日期:2001-03-05)
不同产地骆驼蓬不同药用部位中生物碱的含量分析
王长虹1 ,刘军1 ,郑立明1 ,林伊梅1 ,邹小广2 ,陈鸣1 ,孙殿甲3(1.新疆医科大学第二附属医院药剂科 ,新疆 乌鲁木齐 830028;2.
新疆喀什地区第二人民医院药剂科 ,新疆喀什 844000;3.新疆医科大学药学院药剂教研室 ,新疆 乌鲁木齐 830054)
摘要:目的　对中药骆驼蓬中的生物碱的含量分析方法进行研究 , 并测定不同产地 、不同药用部位的生物碱含量。方法　采
用 RP-HPLC 对新疆 38 个不同产地的骆驼蓬样品的不同药用部位进行测定。结果　去氢骆驼蓬碱和骆驼蓬碱含量分别在
1.18～ 23.68 和 2.099 ～ 25.19 μg·m L-1范围内呈良好的线性关系。不同产地 、不同药用部位的骆驼蓬总生物碱的含量为 0%
～ 7.68%。不同部位中总生物碱的含量分布为种子>根>种壳>茎>叶(P<0.01)。结论　骆驼蓬由于产地不同 、药用部位
不同其生物碱的含量相差悬殊。本方法为筛选优良品种和指导合理采收提供了简便易行的方法。
关键词:骆驼蓬;去氢骆驼蓬碱;骆驼蓬碱;RP-HPLC;含量测定
中图分类号:R284.2 文献标识码:A 文章编号:1001-2494(2002)03-0211-05
基金项目:新疆维吾尔自治区卫生厅青年医学基金资助项目(98Y-007)
作者简介:王长虹 ,男 ,硕士 ,副主任药师 ,博士 Tel:(0991)4695825 E-mai l:w ch cxm@sina.com
Analysis of harmine and harmaline of Peganum harmala in different parts and different local ities
WANG Chang-hong1 ,LIU Jun1 ,ZHENG Li-ming1 ,LIN Yi-mei1 ,ZOU Xiao-guang2 ,CHEN Ming1 , SUN Dian-
jia3(1.Department of Pharmacy , Second Af filiated Hospital of X injiang Medical University , Urumuqi 830028 , China;2.De-
partment of Pharmacy , Second Hospital of Xinjiang Kashi , Kashi , 844000 China;3.Department of Pharmaceutics , College of
Pharmacy , X injiang Medical University , Urum uqi , 830054 China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　The methodolog y of quantitative analysis o f harmine and harmaline in Peganum harmala was investigat-
ed and the contents of harmine and harmaline in Peganum harmala in different par ts and different localities of the plant were also
measured.METHOD　The 38 samples of Peganum harmala in Xinjiang were measured with RP-HPLC technique.RESULTS　
There were excellent linear cor relation over the range of 1.18 ～ 23.68 and 2.099 ～ 25.19 μg·mL-1 for harmine and harmaline re-
spectively.The contents of total alkaloid of Peganum harmala in different parts and different lo calities of the plant were 0%～
7.68%.The quantitative distribution of to tal alkaloid in Peganum harmala w as shown as following:seed>roo t>nutshel>stem >
leaf(P <0.01).CONCLUSION　The contents of total alkaloid w as obviously variable in different parts and different localities o f Pe-
ganum harmala.This quantita tive measurement method appears to be an easy way to select good variety and to guide reasonable col-
lection of Peganum harmala.
KEY　WORDS:Peganum harmala;harmine;harmaline;RP-HPLC;content measurement
　　骆驼蓬(Peganum harmala L.)系蒺藜科(Zy-
gophyllaceae)植物 ,是维吾尔 、蒙古族民间沿用已久
的习用药材 , 已被列入维吾尔药卫生部药品标
准[ 1] ,种子和全草均做药用 ,主治咳嗽气喘 、无名肿
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