全 文 ：　　　　
状及体征改善不明显。
3.2　治疗结果　治疗 2 个疗程后 ,痊愈 40 例 , 有效 72 例 , 无
效 8 例 ,总有效率为 93%。
4　讨论
顽固性呃逆 ,主要发生于迷走神经与膈神经受到刺激的
疾病及刺激延髓的疾病。呃逆 ,古人亦称“哕” 、“呃逆”等 , 近
代称之为膈肌痉挛。 膈肌分隔于胸腔与腹腔之间 , 它的主要
部分是颈肌节的轴下部分向下转移而生 , 故受颈丛的膈神经
支配;中医学认为呃逆系胃失和降 ,胃气上逆动膈所致。也是
胃气衰败之象。足三里穴别称下陵 、鬼邪 , 位于膝下 3 寸 , 历
代医书多有记载。《针灸大全》徐凤“肚腹三里留” ,《杂病穴法
歌》“泄泻肚腹诸般疾 , 三里内庭功无比” , 《天元太乙歌》 :“腰
腹胀满治何难 ,三里瑞肠针承山” , 充分说明足三里可治疗腹
内及下肢多种疾病;现代研究报道针刺足三里对胃肠运动(唾
液分泌 、胃蠕动 、胃分泌 、肠功能 、呼吸功能 、镇痛机理具有双
向调节作用);针刺足三里 ,同时可加强胆总管的规律性收缩 ,
　　　　
对奥狄氏括约肌解痉作用明显;针刺足三里对免疫功能 、中枢
神经系统不平衡功能状态有调整作用 , 能分别加强大脑皮层
的兴奋过程和内抑制过程。
足三里穴位注射山莨菪碱是融合药物和针刺治疗作用于
一体的好方法。 654 ～ 2 能阻断 M 胆碱受体 , 松驰多种平滑
肌 ,主治腹胀 、腹痛 、泄泻呕吐[ 3] , 通过针刺腧穴以导药物 , 循
经络而治脏腑 , 收效神速且稳定;同时水针可持续针刺感应 ,
诱导经络感传 ,更大程度地提高治疗效果 , 调整人体营卫气血
和脏腑功能 , 恢复人体阴阳相对的动态平衡 , 达到治愈的目
的[4] ,具有治疗时间短 ,见效快 , 功能恢复好的特点。
参考文献:
[ 1] 管遵信.管氏针灸经验集[ M] .北京:人民卫生出版社 , 2002:341.
[ 2] 顾加乐.黑龙江中医中药大学推拿学[ M ] .长沙;湖南科学出版
社 , 2004:187.
[ 4] 温木生.穴位注射疗法治百病[ M] .北京:人民军医出版社 , 2006:
425～ 428. (收稿日期:2008-00-00。)
　■基金项目:云南省教育厅科学研究基金项目(编号:5Z0505C)
　＊通讯作者:张志信 , E-mail:zh ang zx 2002@t om.com ,副教授.从事天然药物研究。
·实验研究·
正交试验法提取迎春花总黄酮■
赵保发 , 张志信＊ , 张仕秀 , 胡　彦
(文山师范高等专科学校生化系 , 云南 文山 663000)
　　摘　要:为了从迎春花中提取总黄酮 , 采用正交试验法研
究迎春花总黄酮的提取工艺 , 考察了浸提用水的 pH 值 , 浸提
温度 ,浸提时间 , 浸提次数 , 液料比 5 个因素对迎春花总黄酮
提取率的影响。确立了迎春花总黄酮最佳提取条件为:用
pH=10的稀碱水作溶剂 , 液料比 30∶1 , 浸提温度为 95℃, 回
流提取 1 次 ,提取时间为每次 80min。
关键词:迎春花;总黄酮;提取;正交试验法
中图分类号:R965.2 文献标识码:A
文章编号:1007-2349(2008)08-0034-02
迎春花(Jasminum nudi-f lo rum Lindl.)又名金腰带 、小黄
花 ,为木犀科(Oleaceae)茉莉花属或素馨属(Jasminum Lindl.)
植物 ,主要以其茎叶入药 , 5～ 7 月采集。据《本草纲目》记载其
性味“苦平” ,具有“解毒消肿 ,止痛止血“之功效 , 主治”跌打损
伤 、无名肿痛 、口腔炎 、外阴瘙痒“等病症[ 1] 。迎春花叶所含的
丁香苷(Sy ring in)、迎春花苷(Jasmiflo rin)及迎春花苦味质
(Jasmipierin)等成分已经有文献报道[ 2] , 据文献介绍 , 迎春花
中的黄酮含量较高[ 3] , 而有关迎春花中黄酮类物质的提取方
法还未见报道 , 因此 , 本文以迎春花中的总黄酮提取率为指
标 ,采用正交试验法 , 探讨了浸提用水的 PH 值 , 浸提温度 , 浸
提时间 ,浸提次数 , 液料比 5 个因素对迎春花总黄酮提取率的
影响 ,为迎春花的开发利用提供依据。
1　材料及方法
1.1　材料
1.1.1　实验材料　迎春花于 2007 年 3 月采于文山师专 , 荫
干备用。标准品芦丁(中国药品生物制品鉴定所)。
1.1.2　仪器　UV-2550(岛津)紫外分光光度计;回流装置。
1.2　方法
1.2.1　迎春花总黄酮含量测定方法　采用硝酸铝—亚硝酸
钠比色法测定总黄酮含量 , 即利用黄酮类化合物与铝盐反应
生成红色络合物 , 以芦丁标准品用紫外分光光度计下扫描得
到最大吸波长为 503nm[ 4] 。 ①标准溶液的配制:精密称取
120℃干燥至恒重的芦丁对照品 10mg 用 20mL 甲醇溶解后 ,
转移到 100m L容量瓶中 ,加水至刻度 ,摇匀即得(每毫升溶液
中含无水芦丁 0.1mg)。 ②标准曲线的制作:精密吸取芦丁标
准 液 0.0mL、 2.0mL、 4.0m L、 6.0m L、 8.0mL 、 10.0m L、
12.0mL。分别置于 50mL 的容量瓶中各加水 12mL , 加 5%
NaNO 2 溶液 2mL , 混匀 , 放置 6min , 加 10%Al(NO 3)3 溶液
2m L , 混匀 , 放置 6min , 加 4%NaOH 20m L , 再加水至 50m L ,
放置 15min ,以不加芦丁对照品的试剂做空白对照。按照紫外
分光光度计扫描得到的最大吸收波长为 503nm 处测定吸光
度 ,以所取标准液含有的芦丁标样量 mg数和吸光度数据经回
归处理 ,得到回归方程 ,回归方程;A=0.2067X-0.0112。 以
吸光度对标样含量 mg 数作图得到标准曲线图 , 见图 1。
34 云 南 中 医 中 药 杂 志　　　　　　　　　　2008 年第 29 卷第 8 期
图 1　芦丁标准曲线
1.2.2　迎春花总黄酮提取工艺流程图　见图 2。
迎春花粗 正交法提取 提取液 计算提取率
图 2　工艺流程图
1.2.3　正交设计　按浸提温度(A)、浸提时间(B)、浸提次数
(C)、液料比(D)4 个因素的 3 个水平[ 5] ,取 3g 迎春花按照表 1
的条件做正交实验[ 5] 。见表 1。
表 1　L9(34)因素和水平
水平 浸提温度(℃)
A
浸提时间(min)
B
浸提次数
C
液料比
D
1
2
3
60
80
95
40
60
80
1
2
3
10∶1
20∶1
30∶1
1.2.4　提取率计算方法　样品中的总黄酮提取率(以芦丁计):
提取率(mg/ g DW)=100C
W
式中:C 为 1mL 样品液含黄酮量(mg)。W 为迎春花的质量
(g)。
2　结果及分析
2.1　正交实验结果及方差分析　见表 2 , 表 3。
表 2　L9(34)正交试验结果
因素 Fact ors 指标 Index
A B C D 总黄酮提取率(mg/g DW)
试验号 1 1 1 1 1 5.05
N umbe r 2 1 2 2 2 9.86
3 1 3 3 3 7.62
4 2 1 2 3 8.87
5 2 2 3 1 9.07
6 2 3 1 2 18.29
7 3 1 3 2 11.32
8 3 2 1 3 12.41
9 3 3 2 1 12.57
总黄酮 K 1 2.253 26.33 35.75 26.69
提取率 K 2 36.23 31.34 31.30 39.47
K 3 36.30 38.48 28.10 28.90
Ext ract ion K 1 7.51 8.78 11.92 8.89
ra te o f K 2 12.08 10.45 10.43 13.16
to tal K 3 12.10 12.83 9.34 9.63
flavono ids R 4.59 4.05 2.58 4.27
表 3　迎春花总黄酮提取率方差分析
误差来源 偏差平方和 自由度 方差 方差比 显著性
Error source s s f s F P＊
A 41.96 2 20.98 24.1 ＊＊
B 47.96 2 23.98 27.6 ＊＊
C 1.74 2 0.87 1
D 30.96 2 15.48 17.8 ＊＊
误差 E rror 1.74 2 0.87
　F1-0.1(2 , 2)=9 , F1-0.05(2 , 2)=19 , F1-0.01(2 , 2)=99
以迎春花总黄酮的提取率为考察指标 , 由表 2 的 R值可
以看出 ,各因素对实验结果影响显著的有 A , B , D;表 3 的方差
分析表明因素对指标的影响的大小顺序为:A※D※B※C , 即
提取时间影响最大 , 提取温度和液料比次之 ,浸提次数对实验
结果影响最小。从极差和方差分析的结果可以看出 , 提取工
艺条件为 A 3B3C1D3。
2.2　重现性试验　根据 2.1 的分析结果 , 依照提取工艺
A 3B3C1D3 进行提取实验 , 迎春花样品平行提取 5 次 , 实验结
果精密度良好 ,结果见表 4。
表 4　重现试验结果
提取次数 1 2 3 4 5 -x s RSD%
提取率(mg/g DW)13.58 12.96 13.73 14.02 13.86 13.63 0.408 2.995%
3　讨论
以迎春花总黄酮的提取率为考察指标 , 由表 2 的 R值可
以看出 ,各因素对试验结果影响显著的有 A , B , D;表 3 的方差
分析表明因素对指标的影响的大小顺序为:A※D※B※C , 即
浸提次数对实验结果影响最大 , 液料比次之 ,提取温度影响最
小。从极差和方差分析的结果可以看出 , 提取工艺条件
为 A 3B3C1D3 。
采用提取工艺 A 3B3C1D3 进行提取 , 迎春花中黄酮的平
均提取率为 13.63mg/ g DW ,实验的重现性较好 , 精密度高。
综合 2.1 , 2.2 , 迎春花总黄酮的提取工艺可最终确定为
A 3B3C1D3 。即用 PH =10 的稀碱水作溶剂 , 浸提温度为
95℃,液料比为 30∶1 , 浸提 1 次 , 每次 80min , 其迎春花总黄
酮的平均提取率为 13.63(mg/ g DW)。
参考文献:
[ 1] 黄泰康 ,丁志遵 ,赵守训 , 等.现代本草纲目[ M] .北京:中国医药
出版社 , 2001:1352.
[ 2] 熊辅信 ,寸树芬.现代中药研究荟萃[ M] .昆明:云南科技出版社 ,
2002:421.
[ 3] 张志信 , 张仕秀 , 宋关斌.迎春花植物茎叶中黄酮类物质初步
研究[ J] .生物技术 , 2004 , 14(4):30～ 31.
[ 4] 鲁翠涛 ,梅兴国 ,钟凡.千层塔植物茎叶中黄酮类物质的研究[ J] .
天然产物研究与开发 , 2002 , 14(3):27～ 29.
[ 5] 张志信 ,张仕秀 ,宋关斌.正交实验法优选三七茎叶中总黄酮的提
取工艺[ J] .生物技术 , 2006 , 16(5):65～ 67.
(收稿日期:2008-01-02。)
352008 年第 29 卷第 8 期　　　　　　　　　　云 南 中 医 中 药 杂志