全 文 ：药物分析杂志 Ch i n J Ph amr A n al 20() 6
,
26 ( 10 ) 一 14 0 1 一
RI,
一 H P L C法测定 白花丹参中丹参酮 n 、 和 隐丹参酮的含量 ’
刘春晓 ’ , 王建华 ` * , 李宗新 2 , 赵爱红 ’ , 宋志刚`
( 1
. 山东农业大学药用植物研究室 , 泰安 27 or 1 8 ;2 . 山东省农科院玉米研究所 ,济南 25 01 0 )
摘要 目的 : 建立测定白花丹参中丹参酮 n * 和隐丹参酮含量的方法 。 方法 : 高效液相色谱法 , 采用 iD a m on isl C l: 色谱柱 ( 150
m示 义 4 . 6 m m , 5 协m ) , 流动相为甲醇 一 水侣 5 : 1 5 ) , 流速 0 . 8 m L · m in 一 ` , 柱温 3 5 ℃ , 检测波长为 2 69 n m 。 结果 : 丹参酮 fl A 在
0
.
07
一
0
.
75 此 范围内线性关系良好 ( : = 0 99 98 ) , 平均回收率为 98 . 5% , R S D 为 2 . 0 % (n = 5 ) ;隐丹参酮在 0 . 04 一 0 . 43 此 范
围内线性关系良好 ( : 二 0 . 9 99 4 ) , 平均回收率为 or 2 . 1% , R SD 为 1 . 7% ( n = 5 ) 。 结论 :本法简便 、可靠 、准确 。 为白花丹参的质
量评价提供了依据 。
关键词 : R P 一 H P L ;C 自花丹参 ;丹参酮 n 、 ;隐丹参酮
中图分类号 : R g 17 文献标识码 : A 文章编号 : 02 54 一 1 7 9 3 《2 0 0 6 ) 1 0 一 14 0 1 一 0 3
R P 一 H P L C d e t e r m in a t i o n o f at n s h i n o n e l
`
a n d
2 、
i n r o o t o f S a vl 勿 m i l瓦。叮h iaz B g e
.
L
c r y P t o 扭n s h i n o n e
a lb a
*
L IU Ch u n 一 x i a o w AN G Ji a n 一 h u a “
’ ,
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o n g 一 、 in Z , z H AO A i 一 h o n g SO N G Z h i 一 g a n g
( 1
.
L
a
l
〕o o t o州 o f M ed i e i o al lP a n t , hS an d o n g A罗 e u l t o arl U n j v o i r y , aT i ,an 2 7 10 18 , C h j n 。 ;
2
.
M a i z e R
e s e
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s t i t u t e
,
S h an d o n g A
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e m y o f A ,
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l t u r al S
e i e n e e s
,
J i n a n 25 0 1X()
,
Ch i n
a
)
A b s t r a c t O bj e e t i v e : T o d e
v e l o p a n e w m e t h o d of r t h e d e t e rm i
n a t io n o f t a n s h i n o n e l
人 a n d e叮 p t o t a n s h i n o n e in or o t
o f S a加ia m i lt i o hr is a B g e
.
f
.
a l b a
.
M e t h
o d s : R P 一 H PL C w a s e o n d u e t e d o n a D i a m o n s i l C l : e o l u m n ( 1 50 rn m x 4
.
6
m m
,
5 协m ) , w i th m o b il e p h a s e m e t h a n o l 一 w a t e r ( 8 5 : 一5 ) , fl o w r a te 0 . 5 m L · m i n 一 ’ , d e t e e t i n g a t 2 6 9 n m a n d e o l -
u m n t e m p e ar tu r e a t 3 5 ℃ . R e sul st : T h e l i n e a r r a n g e w a s 0 . 0 7 二 0 . 7 5 协g ( r = 0 . 9 9 9 8 ) , t h e a v e r a g e r e e o v e叮 w a s
9 8
.
5%
,
R SD = 2
.
0 % ( n = 5 ) fo r t a n s h i n o n e 1
A a n d t h e li n e a r r a n g e w a s 0
.
04
一 0
.
4 3 林g ( r = 0
.
9 9 9 4 )
,
t h e a v e r
-
a g e r e e o v e砂 w a s 10 2 . 1% , R SD = 1 . 7% ( n = 5 ) fo r e叮 p t o t a n s h i n o n e . C o n c lus i o n : T h e m e t h o d 15 a e e u r a t e , s i m p l e
a n d e fe
e ti v e
.
I t e a n b e u s e d a s a q u a l i t y e
v a l u a ti o n i n sa 而ia m i lt io hr ha B罗 . f . a lb a .
K e y w o r ds
: R P 一 H P L C ; S a lv ia m i lt i o hr 二 B g e . f . a l ba ; t a n s h i n o n e l A : e叮 p t o t a n s h i n o n e
白花丹参 ( S a l o i a m i l t i o hr 毗 B g e . f . a l ba )为唇
形科植物丹参 ( sa 俪 a m ilt io hr 哪 B ge . ) 的变型种 ,
主要分布于山东境内 , 野生资源属珍稀濒危药用植
物 [ ’ ; ,现山东省 内有 大量种植 。 通常以根部人药 ,
味苦 ,性微寒 ,具有活血化疲 、 通经止痛 、清热安神的
功效 [2 〕 。 白花丹参除具有丹参 的生物活性和用 途
外 ,对治疗血栓性脉管炎具有独特疗效 〔’ ] 。 有关丹
参中活性成分 的测定方法 已有许多文献报道 〔4 , 5 〕 ,
但白花丹参 中丹参酮 1 、 ( t a n s h i n o n e l , ) 和隐丹参
酮 ( e叮 p t o t a n s h i n o n e ) 含量的测定作者未见文献报
道 。 本研究建立 了用 R P 一 H P L C 法同时测定 白花
丹参中的丹参酮 n 、 和隐丹参酮 的含量 ,方法 简便 、
准确 , 灵敏度高 ,适用于 白花丹参中脂溶性成分的定
量分析 。
1 仪器与试药
W a te r s 液相色谱系统 (包括 W a t e r S 9 9 6 二极管
阵列检测器 , 5巧 型色谱泵 , 7 7 2 51 型手动进样器 ,美
国 ) ; e A T 一 z o A 柱温箱 ; M i zi e n n i u m , , 色谱工作站 ;
K Q5 2 OOE 型超声仪 : M i l l i 一 QA 超纯水器 。
对照品丹参酮 l A (批号 0 7 6 一 2 0 41 7 )和隐丹
参酮 (批号 852 一 9 903 )由中国药品生物制品检定所
提供 。 白花丹参采 自山东各地区 ,均为栽培品 , 由山
山东省 “ 中药材新品种规范化种植与开发 ” 项 目 ( SD G PZ 以 )4 一 5 4)
* * 通讯作者 T e l : ( 0 5 3 8 ) 82 4 8 0 7 6 : E 一 m a i l : j h w an 蔚h @ 16 3 . e o m
DOI : 10. 16155 /j . 0254 -1793. 2006. 10. 022
一 1 402 一 药物分析杂志 C hinJ P hr n a An a l20 06
,
26 ( 10 )
东农业大学张恒悦教授鉴定 ;色谱纯 甲醇 。
2
. 溶液制备
2
.
1 对照 品混合溶液 精密称取丹参酮 1 A 5 . 90
m g 和隐丹参酮 3 . 4 0 m g ,置 2 5 m L 棕色瓶中 , 加甲醇
至刻度 ,摇匀 ;精密量取 4 m L , 置 25 m L 棕色瓶中 ,
加甲醇 至刻度 , 摇 匀 , 制成浓度分 别为 37 . 36 和
21
·
76 林g
·
m L
一 ’ 的对照品混合溶液 。 .
2
.
2 供试品溶液 取样 品粉末 (过 60 目筛 ) 0 . 巧
g
,精密称定 ,置 10 0 m L 具塞锥形瓶 中 , 精密加人甲
醇 50 m L ,密塞 , 称定重量 , 常温超声提取 l h ,放冷
后用甲醇补足损 失重量 ,摇匀 , 过滤 , 取续滤液作为
供试品溶液 。
3 色谱条件
D i a m o n s i l C
18 色 谱柱 ( 15 0 m m x 4 . 6 m m , 5
林m ) , 流动相为甲醇 一 水 ( 8 5 : 15 ) , 流速为 0 . 8 m L ·
im
n 一 ’ ,检测波长为 269 n m , 柱温 35 ℃ 。 在该色谱
条件下 ,将制备的对照品混合溶液进样 or 林L ,隐丹
参酮的保留时间为 7 . 05 m in , 丹参酮 n A的保留时间
为 10 . 0 4 m in , 丹参酮 n 、 和隐丹参酮对照品及丹参
样 品色谱图见图 1 。
一 J 七一 J 、一—r es es es es es es , r es es es es es es es F es es es es es es es r es es es es一一 - - - 「 -0 4 一 2A
4
.
2 精密度试验 精密吸取按 “ 2 . 2 ” 项方法制备
的白花丹参 (泰安角峪镇产 )供试品溶液 , 重复进样
5 次测定色谱峰面积 , 结果丹参酮 n 、 、 隐丹参酮 含
量的 R SD 值均为 1 . 6% 。
4
.
3 重复性试验 取泰安角峪镇产白花丹参样品
粉末 (过 6 0 目筛 ) ,按 “ 2 . 2 ” 项方法平行制备 5 份供
试品溶液 , 按上述方法测定 , 结果丹参酮 n 、 、 隐丹参
酮含量的 R SD 值分别为 1 . 0% 和 1 . 4% 。
4
.
4 加样回收率试验 精密称取已测知含量 的泰
安角峪镇产 白花丹参样品粉末 (过 60 目筛 ) 0 . 10 9 ,
共 5 份 ,分别置 10 m L 具塞锥形瓶中 ,精密加 人用
甲醇配制的 2 13 . 1 林g · m L 一 ’丹参酮 n A对照品溶液
5 m L
、
1 12
.
7 卜g · m L 一 `隐丹参酮对照品溶液 5 m L ,
再用甲醇补足至 50 m L ,按 “ 2 . 2 ” 项下方法制备所需
溶液并测定 , 计算回收率 。 结果 ( n 二 5) 丹参酮 n A
为 9 8 . 5% ( R S D 二 2 . 0% ) ; 隐丹参 酮 为 102 . 1%
( RS D = 1
.
7% )
。
4
.
5 稳定性实验 取同一份供试 品溶液 , 分别在
0
,
2
,
4
,
6
,
8
,
2 4
,
3 2
,
4 8 h 进样测定 , 结果表明供试品
溶液在 24 h 内稳定 , 丹参酮 n A及隐丹参酮峰面积
的 R S D 分别为 1 . 5% 和 1 . 8% 。
4
.
6 样品测定 取不同产地白花丹参样品 (过 60
目筛 ) ,按 “ 2 . 2 ” 项下方法制备所需的供试品溶液 ,
精密吸取上述各供试品溶液 or 林 L 、对照品混合溶
液 4 林L ,注人高效液相色谱仪中 , 按外标法计算百
分含量 。 结果见表 1 。
表 1 样品中丹参酮 l A和隐丹参酮含量测定结果 ( % , n = 3)
T a b 1 T h e c o n te n st o f at 璐 h i n o n e 1 A an d
c r y Pot 妞ns h i n o n e i n sam P l es
8 1 2 t丫功i n
B
白花丹参产地
(
s o
cur
e s
)
丹参酮 n A
(恤坛 no n e l A )
隐丹参酮
(
e卿 t o at n s h i n o n e
图 1 对照品 ( A )及泰安角峪镇产白花丹参样品 ( )B 的 H PCL 色谱图
F ig 1 H p L C e hor
m a t o asr m
s 。, f er fe er n e e s u b s t a n e e s ( A ) a n d S a lv i a
m i l t i
o
hr 毗 B g e a l ba s a呷 l e for m aT i ’ an J u e y u ( B )
1
. 隐丹参酮 ( c yr p t o tan s h i n o n e ) 2 . 丹参酮 l A ( t an s h i n o n e l * )
4 方法学考察
4
.
1 线性关系考察 精密吸取对照 品混合溶液 2 ,
5
,
10
,
15
,
2 0 卜L 进样 , 测定峰面积的积分值 。 以进
样量 (此 )为横坐标 , 峰面积积分值为纵坐标 , 绘制
工作曲线 。 得到丹参酮 n 人和隐丹参酮 的回归方程
分别为 :
Y = 7
.
1 8 5 x 10
6 X 一 1 . 3 7 8 x I O 5 r = 0
.
9 9 9 8
Y = 5
.
7 2 7 x 10 6 X 一 6
.
14 8 x 10 4 r = 0
.
9 9 9 4
线性范围分别为 0 . 07 一 0 . 75 卜g 和 0 . 04 一 0 . 43 卜g 。
泰安角峪 ( T ia ’ an Ju e y u )
山东农业大学农场 ( s h a n d o n g
A阴 e u l t u ar l U in v e玲 i ty F anrT )
莱芜苗山 ( I川 wu M ia o s han )
泰1 1一白羊坊村 ( T a is h a n B a : y a n g -
af n g )
5 讨论
5
.
1 样品提取方法 的选择 文献报道 〔’ 。」 ,丹参酮
在水存在下受热易于分解 。 在样品溶液制备过程
中 ,应避免使用含水溶剂 ,并且应控制提取温度 。 本
试验分别采用中国药典 20 05 年版 (一部 )的方法加
热 回流提取 l h 和常温超声提取 l h ,结果回流提取
与超声提取的测定结果无显著性差异 。 常温超声提
药物分析杂志 Ch i n J Ph amr A n al ZX() 6
,
26 ( 10 ) 一 1 4 0 3 一
取操作简便易行且避免高温 ,对于大量检测任务 ,可
以一次同时处理 30 个以上样品 ,具有较高的样品处
理效率 ,故提取方法确定为常温甲醇超声提取 。
5
.
2 样品提取时间的选择 本实验比较了不同提
取时间 ( 4 0 , 6 0 , 8 0 m in )对提取效率的影响 。 结果表
明 ,超声 4 0 m in 时测得的 2 种成分的含量最低 , 而
超声 60 m in 和超声 80 m in 后测得的结果无明显差
异 ,故本实验确定超声时间为 l h 。
5
.
3 流动相的选择 本文对不同比例流 动相系统
甲醇 一 水 ( 7 5 : 2 5 ) 、 甲醇 一 水 ( 8 5 : 1 5 ) , 甲醇 一 水 ( 9 0
:
10 )进行了比较 ,最后 以甲醇 一 水 ( 85 “ 巧 )作流动
相 , 能使丹参酮 n 人 、 隐丹参酮与干扰成分达到基线
分离 。 采用 35 ℃柱温使丹参酮 n 、 、 隐丹参酮保留
时间加大且稳定 ,有利 于分析 。 结果证明本方法简
单 、 准确 、 易行 。
从本实验所测定 的结果来看 , 4 个产地 白花丹
参中丹参酮 n 、 和隐丹参酮含量差异较大 ,其中以泰
安角峪镇的白花丹参质量最优 , 2 种成分含量分别
达到 0 . 89 % 和 0 . 5 10 % 。 由于药材受生长环境 、 生
长时间及加工条件等因素的影响 ,不同产地 的药材
有效成分含量差别较大 , 故在临床用药 时应对药材
的来源进行控制 。
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(本文于 2 0 0 5 年 6 月 14 日收到 )