全 文 ：收稿日期:2015-09-22; 修订日期:2016-01-20
基金项目:广西自然科学基金(No． 2015GXNSFBA139116);
广西中医药大学校级普通课题(No． P2012023);
广西中医药大学中药学博士点建设工程开放课题
(No． J13047 － 201410 － 12);
广西中医药大学 2014 年博士研究生教育发展项目
(No． 050140002)
作者简介:廖彭莹(1984 －)，女(汉族)，广西南宁人，广西中医药大学药
学院讲师，硕士学位，主要从事中药化学研究工作．
金毛狗脊脂溶性成分的气相色谱 －质谱分析
及抑制 α －葡萄糖苷酶的活性研究
廖彭莹，劳春梅，卢春雨，龙 婕
(广西中医药大学，广西 南宁 530001)
摘要:目的 分析金毛狗脊脂溶性成分的化学组成，评价其对 α －葡萄糖苷酶的抑制活性。方法 运用 GC － MS联用仪分
析金毛狗脊脂溶性成分的化学组成，采用峰面积归一化法计算各成分的相对含量，运用酶标仪法评价其对 α －葡萄糖苷
酶的抑制活性。结果 从金毛狗脊脂溶性成分中共鉴定出 38 个化合物，占流出峰总面积的 93． 29%，当浓度为 700 μg /ml
时，对 α －葡萄糖苷酶的抑制率为 93． 4%。结论 金毛狗脊脂溶性成分主要为亚油酸和棕榈酸，其对 α －葡萄糖苷酶有较
好的抑制活性。
关键词:金毛狗脊; 脂溶性成分; 气相色谱 －质谱; α －葡萄糖苷酶
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2016． 05． 026
中图分类号:Ｒ284． 2;Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2016)05-1089-02
GC －MS analysis of the Liposoluble Constituents from Cibotium barometz and the Evalu-
ation of its Inhibitory Activities against α －Glucosidase in vitro
LIAO Peng-ying，LAO Chun-mei，LU Chun-yu，LONG Jie
(Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning，Guangxi，530001，China)
Abstract:Objective To analysis the chemical constituents of the liposoluble constituents of Cibotium barometz，and to evaluate
its inhibitory activities against α － glucosidase． Methods The chemical components of the liposoluble constituents from Cibotium
barometz were analyzed by GC － MS，and the relative content of each component was determined by area normalization． The inhib-
itory activity against α － glucosidase was evaluated by micro plate spectrophotometer． Ｒesults 38 compounds were identified from
the liposoluble constituents of Cibotium barometz，accounting for 93． 29% of the total peaks． The liposoluble constituents had good
inhibitory activities against α － glucosidase，and the inhibitory rate was 93． 4% with the concentration of 700 μg /ml． Conclusion
The main constituents of the liposoluble constituents of Cibotium barometz were n － hexadecanoic acid and (Z，Z)－ 9，12 － octa-
decadienoic acid，and they could inhibit α － glucosidase effectively in vitro．
Key words:Cibotium barometz; Liposoluble constituents; GC － MS; α － Glucosidase
金毛狗脊 Cibotium barometz 为蚌壳蕨科金毛狗属植物金毛
狗的根茎，具有强腰膝、祛风湿、利关节的功效［1］。研究表明，金
毛狗脊含有类型丰富的化学成分，且活性多样，如 Wu Q．等［2］分
离出 3 个不常见的倍半萜类成分;Nguyen X． C．等［3］从生品甲醇
提取物中获得的金毛狗脊苷 B等 4 个化合物均能有效抑制破骨
细胞形成;许枬等［4］对 70%乙醇提取物进行分离纯化，获得的 3
个化合物具有较强的抗氧化活性等。关于金毛狗脊的脂溶性成
分近年来报道不多，贾天柱等［5］曾比较狗脊不同炮制品的挥发
性成分，结果表明其中含量最高的成分是棕榈酸和亚油酸;许重
远等［6］运用超临界流体萃取技术从金毛狗脊中提取精油，运用
GC － MS技术首次鉴定了 γ －松油烯等 12 个化合物。为了进一
步挖掘金毛狗脊的药用价值，本研究运用石油醚回流提取法获取
了脂溶性成分，采用 GC － MS 技术分析了化学组成，并运用酶标
仪法评价了其对 α －葡萄糖苷酶的抑制活性。
1 仪器与材料
1． 1 仪器 电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)、气相
色谱 －质谱联用仪(美国 Agilent HP6890 /5973N)、旋转蒸发器
ＲE － 52AA(上海亚荣生化仪器厂)、酶标仪(美国 Dynex Spectra
MＲ)、96 孔板(美国 True line)、pH 计(美国 Sartorius Professional
Meter PP － 20)、微量移液器(上海康敏检验设备有限公司)。
1． 2 材料 金毛狗脊于 2011 年 5 月购于广西玉林，经广西中医
药大学朱意麟实验师鉴定为蚌壳蕨科金毛狗属植物金毛狗 Ci-
botium barometz的根茎。
石油醚、无水硫酸钠、无水碳酸钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、
二甲基亚砜(DMSO)均为分析纯，α －葡萄糖苷酶(α － Glucosi-
dase)、4 － 硝基酚 － α － D － 吡喃葡萄糖苷(pNPG)(Sigma －
Aldrich公司)，阿卡波糖(阿拉丁生化科技股份有限公司)。
2 方法
2． 1 金毛狗脊脂溶性成分的提取 将金毛狗脊药材干燥后粉碎，
称取 50 g粗粉，加入 250 ml石油醚回流提取 3 次，每次 1 h，将提
取液过滤，减压浓缩，得到脂溶性成分约 0． 4 g。
2． 2 气相色谱 －质谱(GC － MS)分析条件
2． 2． 1 样品处理 称取金毛狗脊脂溶性成分 10 mg，用 5 ml乙醚
充分溶解，静置，取上清液，加入适量无水硫酸钠，静置过夜，离心
10 min，取上清液即得样品。
2． 2． 2 气相色谱分析条件 HP － 5MS 石英毛细管柱(30 m ×
0． 25 mm × 0． 25 μm);载气为高纯氦气;进样量 1 μl;分流比为
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2016 VOL． 27 NO． 5 时珍国医国药 2016 年第 27 卷第 5 期
5:1;程序升温条件:柱温 60℃，溶剂延迟 3 min，以 20℃ /min升温
至 150℃，维持 2 min，再以 6℃ /min升温至 210℃，维持 3 min，再
以 6℃ /min升温至 250℃，维持 3 min，最后升温至 280℃。
2． 2． 3 质谱分析条件 电离方式 EI，电子能量 70 eV，离子源温
度 230 ℃，接口温度 280 ℃，质量范围 50 ～ 550 amu。
2． 3 对 α －葡萄糖苷酶的抑制活性检测［7］ 精密称取脂溶性成
分用含 1%DMSO的 pH 6． 8 磷酸缓冲液进行溶解，采用二倍稀释
法将其配制成浓度为 700，350，175，87． 5，43． 85μg /ml 的溶液。
将样品加入酶标板，每浓度设三复孔，另设样品对照孔、空白反应
孔及空白对照孔，反应孔加入 α －葡萄糖苷酶，对照孔加入磷酸
缓冲液，振荡 30 s，恒温 37 ℃孵育 10 min，再在各孔中分别加入
pNPG后，振荡 30s，恒温 37℃孵育 20 min，再加入 Na2CO3 溶液终
止反应，于 405 nm处读取吸光值(OD)。样品对 α －葡萄糖苷酶
的抑制活性计算公式:抑制率% =［1 －(样品反应孔 OD 值 －样
品对照孔 OD值)/(空白反应孔 OD值 －空白对照孔 OD 值)］×
100%。
3 结果与讨论
对金毛狗脊脂溶性成分的总离子流图中的各峰进行质谱扫
描，计算机检索 NIST05a、Wiley275 标准谱库，采用峰面积归一化
法计算各成分的相对含量，结果见表 1。共鉴定出 38 个化学成
分，占流出峰总面积的 93． 29%，其中相对含量最高的成分是亚
油酸(42． 01%)和棕榈酸(38． 95%)，其他化学成分类型主要是
脂肪烃及其衍生物类(6． 69%)、芳烃及其衍生物类(5． 27%)、萜
类(0． 37%)。
金毛狗脊脂溶性成分对 α －葡萄糖苷酶的体外抑制活性测
定结果见表 2，可以看出其对 α －葡萄糖苷酶有一定的抑制活性，
在浓度为 43． 85 ～ 700μg /ml浓度范围内，抑制率与样品浓度呈线
性关系。金毛狗脊脂溶性成分含有抑制 α －葡萄糖苷酶的活性
分子。
表 1 金毛狗脊脂溶性成分的 GC － MS分析结果
序号 保留时间 /min 化合物 分子式 相对含量 /%
1 5． 98 正癸烷;Decane C10H22 0． 03
2 6． 03 (E，E)－2，4 －庚二烯醛;(E，E)－2，4 － Heptadienal C7H10O 0． 05
3 7． 31 1，2，4，5 －四甲基苯;1，2，4，5 － tetramethyl － Benzene C10H14 0． 09
4 7． 79 辛酸;Octanoic acid C8H16O2 0． 10
5 7． 91 十二烷;Dodecane C12H26 0． 07
6 8． 97 反式 －2，4 －癸二烯醛;(E，E)－2，4 － Decadienal， C10H16O 0． 49
7 9． 88 正癸酸;Decanoic acid C10H20O2 0． 08
8 10． 14 2 －十四烯;(E)－2 － Tetradecene， C14H28 0． 11
9 10． 99 肉桂酸;trans － Cinnamic acid C9H8O2 0． 18
10 11． 77 正十五烷;Pentadecane C15H32 0． 40
11 12． 18 2，4 －二叔丁基苯酚;2，4 － bis(1，1 － dimethylethyl)－ Phenol C14H22O 0． 18
12 12． 81 2 －甲基 －十五烷;2 － methyl － Pentadecane C16H34 0． 03
13 12． 94 3，4 － dihydro － 8 － hydroxy － 3 － methyl － 1H －2 － Benzopyran － 1 － one C10H10O3 0． 24
14 13． 31 2 －十四烯;(E)－2 － Tetradecene C14H28 0． 13
15 13． 43 正十六烷;Hexadecane C16H34 0． 18
16 13． 55 邻苯二甲酸二乙酯;Diethyl phthalate C12H14O4 0． 84
17 13． 91 柏木脑;Cedrol C15H26O 0． 11
18 14． 17 烟叶酮;Megastigmatrienone C13H18O 0． 07
19 14． 55 ［Ｒ －［Ｒ
* ，Ｒ* －(E)］］－4 －(3 － hydroxy － 1 － butenyl)－3，5，
5 － trimet － hyl － 2 － Cyclohexen － 1 － one
C13H20O2 0． 10
20 15． 14 正十七烷;Heptadecane C17H36 0． 17
21 16． 36 肉豆蔻酸;Tetradecanoic acid C14H28O2 0． 37
22 16． 74 十八烯;1 － Octadecene C18H36 0． 10
23 16． 84 正十八烷;Octadecane C18H38 0． 07
24 17． 00 植烷;2，6，10，14 － tetramethyl － Hexadecane C20H42 0． 09
25 18． 03 十五烷酸;Pentadecanoic acid C15H30O2 0． 18
26 18． 25 环十四烷;Cyclotetradecane C14H28 0． 07
27 18． 51 正十八烷;Octadecane C18H38 0． 08
28 18． 98 棕榈酸甲酯;Hexadecanoic acid，methyl ester C17H34O2 0． 51
29 19． 36 3 －(3，5 －二叔丁基 －4 －羟基苯基)丙酸甲酯;3，5 － Bis(1，1 － dimethylethyl)－4 － hydroxy － benzenepropanoic acidmethyl ester C18H28O3 0． 12
30 19． 39 9 －十六烯酸;9 － Hexadecenoic acid C16H30O2 0． 07
31 19． 44 14 －十五烯酸;14 － Pentadecenoic acid C15H28O2 0． 06
32 19． 50 1 －二十烯 1 － Eicosene C20H40 0． 03
33 19． 69 邻苯二甲酸二丁酯;Dibutyl phthalate C16H22O4 2． 38
34 19． 89 棕榈酸;n － Hexadecanoic acid C16H32O2 38． 95
35 23． 83 亚油酸;(Z，Z)－9，12 － Octadecadienoic acid C18H32O2 42． 01
36 28． 16 己二酸二异辛酯;Diisooctyl adipate C22H42O4 2． 30
37 30． 05 Hexadecanoic acid，2 － hydroxy － 1 －(hydroxymethyl)ethyl ester C19H38O4 1． 38
38 30． 64
邻苯二甲酸单乙基己基酯;1，2 － Benzenedicarboxylic
acid，mono(2 － ethylhexyl)ester
C16H22O4 0． 87
表 2 金毛狗脊脂溶性成分对 α －葡萄糖苷酶的抑制率
样品浓度
/μg·mL －1
金毛狗脊石油醚
提取物抑制率 /%
700 93． 4
350 83． 8
175 68． 4
87． 5 41． 4
43． 85 23． 5
4 结论
从金毛狗脊脂溶性成分中共检出 38 个化学成分，其中亚油
酸和棕榈酸含量最高，这与贾天柱等［5］对狗脊挥发油成分的研究
一致，从挥发油中也检出十五烷酸［5］，而从其超临界流体萃取物
中检出的共有成分有棕榈酸、亚油酸、9 －十六烯酸、邻苯二甲酸
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二乙酯［6］，其余化学成分均为首次从该植物检出。α －葡萄糖苷
酶体外抑制活性测定结果表明，该提取物有较高的抑制率，浓度
为 700 μg /ml时可以达到 93． 4%，其中有报道肉桂酸对 α －葡萄
糖苷酶有较高的抑制活性，IC50值为 286． 22 μg /ml
［8］，其他成分
则未见有相关报道。从植物中获得 α －葡萄糖苷酶抑制剂类药
物的备选单体是当前糖尿病治疗药物研发的重点之一，如 Yin Z．
等［9］综述了已经从药用植物中获得的有较强 α －葡萄糖苷酶抑
制活性的单体化合物共 411 个，类型包含萜类、生物碱类、醌类、
黄酮类、酚类、苯丙素类、甾体等。金毛狗脊脂溶性成分在 α －葡
萄糖苷酶抑制活性方面的潜在应用价值有待进一步探讨，这可为
全面综合利用该植物提供更多理论依据。
致谢:感谢国家中医药管理局科研三级实验室中(壮)药化
学与质量分析实验室、广西高校中药提取纯化与质量分析重点实
验室提供实验仪器及场所。
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收稿日期:2015-09-25; 修订日期:2016-01-03
作者简介:熊世红(1976-)，男(汉族)，湖北黄冈人，湖北省中西医结合医
院主治医师，主要从事医疗临床工作．
* 通讯作者简介:林传俊(1966-)，男(汉族)，湖北大冶人，湖北省黄石市
中心医院副主任技师，主要从事医疗临床工作．
健脾清化方对 Smad7 /TGF － β1 / ILK信号通路的影响
熊世红1，张祖隆2，龚 娜1，林传俊3*
(1．湖北省中西医结合医院，湖北 武汉 430015; 2．贵阳医科大学附属医院，贵州 贵阳 550004;
3．湖北省黄石市中心医院 435000)
摘要:目的 评价健脾清化方对肾间质纤维化(ＲIF)的作用，初步探讨其作用的可能机制。方法 成年 SD 大鼠 54 只，随
机分为 3 组，即假手术对照组(C 组)、UUO 模型组(M 组)和健脾清化方治疗组(T 组)，每组各 18 只。每组于术后第 3、7
和 14 天分批处死又分为 N3、N7 和 N14 三组，每组各 6 只。T 组术后立即给予健脾清化方每日灌胃，C 组、M 组则分别予
同体积生理盐水灌胃。术后第 3、7 和 14 天处死各组大鼠，分别取出左肾的 1 / 2 制作切片，行 HE 和Masson 染色，观察肾
脏病理学动态改变;免疫组化法检测肾间质组织内 TGF － β1 和 Smad7、α － SMA 蛋白的表达。半定量两步法 ＲT － PCＲ测
肾小管上皮细胞整合素连接激酶 mＲNA。结果 HE 染色及Masson 染色显示:M 组术后随时间延长肾小管间质病变加重，
程度同期最重，高于同期 T 组及 C 组;T 组病变程度介于同期 M 组及 C 组之间;C 组基本正常，结果有统计学意义(P ＜
0． 05)。免疫组化及 ＲT － PCＲ结果:M 组 TGF － β1、α － SMA 蛋白、ILK mＲNA表达随时间延长逐渐上调，程度同期最高，
高于同期 T 组及 C 组;T 组蛋白表达程度介于 M 组及 C 组之间;C 组表达最低，结果有统计学意义(P ＜ 0． 05);M 组肾间
质 Smad7 的表达随时间延长逐渐下调，程度同期最低，低于同期 T 组及 C 组;同期 T 组肾间质 Smad7 表达明显上调，低于
同期 C 组，但高于M 组，结果有统计学意义(P ＜ 0． 05);M 组与 T 组各组内肾小管间质损害指数与 TGF － β1 、α － SMA蛋
白及 ILK mＲNA表达呈正相关，Smad7 蛋白表达与上述各指标呈负相关，结果有统计学意义(P ＜ 0． 05)。结论 健脾清化
方对大鼠 ＲIF 有抑制作用，其机制可能通过增加大鼠 UUO 模型中 Smad7 蛋白的表达抑制 TGF － β1 /ILK 信号转导，发挥
抗大鼠 ＲIF 的作用。
关键词:健脾清化方; 肾间质纤维化; 整合素连接激酶; 信号通路
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2016． 05． 027
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2016)05-1091-05
肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis，ＲIF)几乎是各种慢性
肾脏疾病(chronic kidney disease，CKD)进展到终末期肾衰竭(end
－ stage renal disease，ESＲD)的共同途径和主要病理基础［1］，最终
导致肾纤维化，进展为终末期肾衰竭。且 ＲIF程度与肾功能减退
的相关性，较肾小球硬化与肾功能减退的相关性更为密切［2］。
健脾清化方临床应用于慢性肾功能衰竭的治疗，可改善患者蛋白
尿、肾功能并调节脂代谢，具有一定的抗肾纤维化作用［3，4］，但其
具体作用机制如何，国内外鲜有报道。本研究采用较成熟的单侧
输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction，UUO)模型为实验模
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2016 VOL． 27 NO． 5 时珍国医国药 2016 年第 27 卷第 5 期