全 文 ：收稿日期:2011-11-16
基金项目:济宁医学院青年科研基金重点项目(JYQN)
作者简介:张华丽(1977-) ，男，硕士，讲师，主要从事分析化学与药物分析教学和研究工作;Tel:13082795796，E-mail:hualizhang@ 163. com。
* 通讯作者:李彦连，Tel:15953719160，E-mail:liyanlian99@ hotmail. com。
山东肿足蕨总三萜的提取工艺优化研究
张华丽1，朱 军1，高桂花1，张敏娜1，李彦连2*
(1. 济宁医学院药学院，山东 日照 276826;2. 山东济宁学院生命科学与工程系，山东 曲阜 273155)
摘要 目的:优化山东肿足蕨总三萜提取工艺。方法:以 5%香草醛-冰醋酸溶液和 72%浓硫酸为显色系统，
总三萜含量为考察指标，采用单因素和正交试验优选山东肿足蕨总三萜的提取工艺。结果:确定用 12 倍量 60 %
乙醇为溶剂，在 60 ℃条件下超声提取 60 min 为最佳提取条件。结论:优选的工艺稳定可行，可作为山东肿足蕨总
三萜的提取工艺。
关键词 山东肿足蕨;总三萜;正交试验
中图分类号:R284. 2 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2012)04-0648-03
Optimum Extraction Technology of Total Triterpenoids
from Hypodematium sinense
ZHANG Hua-li1，ZHU Jun1，GAO Gui-hua1，ZHANG Min-na1，LI Yan-lian2
(1. School of Pharmacy，Jining Medical University，Rizhao 276826，China;2. Life Science and Engineering Department，Jining Univer-
sity，Qufu 273155，China)
Abstract Objective:To optimize the extraction technology of total triterpenoids from Hypodematium sinense． Methods:With 5%
vanillin-glacial acetic acid solution and 72% sulfuric acid as chromogenic agent and the content of total tripenoids as index，using single
factor experiment and orthogonal test，the optimal extraction condition was determined. Results:The optimal conditions were solid-liquid
ratio 1∶ 12，60% ethanol concentration，and ultrasonic extraction time of 60 min at 60 ℃. Conclusion:The extraction technology is feasi-
ble and can be used as extraction process of total triterpenoids from Hypodematium sinense.
Key words Hypodematium sinense Iwatsuri;Totals triterpenoids;Orthogonal text
山东肿足蕨 Hypodematium sinense Iwatsuri 为金
星蕨科肿足蕨属植物，生长于鲁西南的山坡石缝中，
民间俗称“治晕草”，水煎服，能治疗头晕、恶心、呕
吐等症〔1〕。经实验证明，该药具有抑制肠平滑肌收
缩、降低血压、抑制中枢神经、抗乙酰胆碱和明显的
抗生育等作用〔2，3〕，对美尼尔氏综合症以及胃神经
官能症也有较高的疗效〔4〕。经实验验证〔4〕，山东肿
足蕨含有黄酮苷、三萜成分、酚性成分以及糖类、鞣
质、生物碱等化学成分。药理研究证明，三萜类化合
物具有广泛的生理活性，有保肝、抗肿瘤、抗 HIV21
及 HIV21蛋白酶活性、抗带状疱疹病毒、增加免疫
力、抗生育等诸多功效〔5，6〕，因此有必要对山东肿足
蕨的三萜类化合物进行研究。本文采用单因素和正
交试验的方法对山东肿足蕨药材中总三萜的提取工
艺进行研究。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 BS110 S 型电子分析天平(北京塞多
利斯天平有限公司) ，KQ-500 DB 型超声仪(昆山市
超声仪器有限公司) ，FW 135 型中药粉碎机﹙天津
市泰斯特仪器有限公司﹚，RE-52 AA 型旋转蒸发仪
(上海嘉鹏科技有限公司) ，电动吸引器(上海医疗
器械工业集团公司医用吸引器厂) ，电热恒温水浴
锅(北京市长风仪器仪表公司) ，TU-1901 双光束紫
外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公
司) ，Q-4110 石英狭缝比色皿(无锡本色环保科技有
限公司)。
1. 2 材料 山东肿足蕨采集于山东嘉祥虎头山，
经济宁医学院中药学教研室鉴定为金星蕨科肿足蕨
属植物山东肿足蕨 Hypodematium sinense Iwatsuri，去
根后干燥，粉碎，留粗粉备用。齐墩果酸标准品(批
号:07099803，中国药品生物制品检定所) ;氯仿，硫
酸，冰乙酸，乙酸乙酯，95%乙醇，香兰素等均为分
析纯;蒸馏水。
2 方法
2. 1 山东肿足蕨三萜成分含量的测定方法
2. 1. 1 标准溶液的制备:精确称取烘至恒重的齐
墩果酸对照品 0. 0046 g于 10 mL容量瓶中，用乙酸
乙酯定容，即得。
2. 1. 2 显色方法:依据文献〔7〕，试验中采用的显
色方案为 5%香草醛-冰醋酸 0. 5 mL，72% 硫酸 5
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mL，65 ℃恒温水浴加热 20 min，冰水中静置 5 min。
2. 1. 3 标准曲线的绘制:分别精密量取齐墩果酸
标准溶液 0. 0、0. 1、0. 4、0. 8、1. 2、1. 6 mL 置于 10
mL具塞容量瓶中，用乙酸乙酯定容，按“2. 1. 2”项
下方法显色，以空白为参比，于 532 nm 波长处测定
各溶液的吸光度 Y。以吸光度 Y 为纵坐标，浓度 X
为横坐标，绘制标准曲线，其回归方程为:Y =
6. 578X + 0. 0037(r = 0. 9997) ，齐墩果酸在 4. 6 ～
73. 6 μg /mL范围呈良好的线性关系。
2. 1. 4 样品的测定:精密量取供试液 2. 0 mL，定容
至 25 mL，按“2. 1. 2”项下显色，以空白试剂为参比，
于 532 nm处测吸光度。以标准曲线法计算含量。
2. 2 山东肿足蕨总三萜的提取方法
2. 2. 1 单因素样品制备:精密称取山东肿足蕨样
品 5 g，在一定条件下进行超声振荡提取，对超声后
的样品进行抽滤，利用旋转蒸发仪将滤液中的乙醇
蒸出，温度在 57 ℃左右，后加 10 mL 石油醚，转移
至分液漏斗进行分液，取下层液体，用旋转蒸发仪旋
出水分，再分别向其中加入氯仿和 0. 1 mol /L 的盐
酸各 20 mL 后，于 60 ℃水浴中回流 1. 5 h，回流后
的液体转移至分液漏斗中，静置分液，取下层液体，
用氯仿洗涤两次，每次用量 10 mL，然后合并滤液，
用旋转蒸发仪蒸出氯仿，用乙酸乙酯 10 mL溶解，即
得。
2. 2. 2 正交试验样品制备:根据单因素试验结果，
选取提取温度、乙醇浓度、提取时间、料液比 4 个影
响总三萜含量的主要因素，每个因素 3 个水平设计
L9(3
4)正交试验提取，滤液抽滤，浓缩，置于 10 mL
量瓶中用乙酸乙酯定容，摇匀，即得。
2. 3 最佳工艺条件的验证 利用正交试验设计所
优化的最佳工艺条件进行验证试验(n = 3) ，测定最
佳工艺条件下的山东肿足蕨总三萜含量。
3 结果
3. 1 单因素试验结果
3. 1. 1 提取溶剂的选择:随乙醇浓度的增加，山东
肿足蕨总三萜提取率呈上升趋势，但 60%以下提取
率增加的趋势明显，60 %以后上升不明显。因此，选
择 60 %左右的乙醇浓度比较合适，结果见图 1。
3. 1. 2 提取温度的选择:提取温度越低，能耗越
少，且有效成分不易被破坏，所以如果提取率相当，
应该尽量采用较低的温度以减少能耗，防止有效成分
的破坏。由图 2 可以看出，当温度在 60 ℃以下时，随
着温度增加，提取率随之显著增加，但温度过高，溶剂
挥发加剧，而且提取物中三萜化合物结构可能遭受破
坏。因此，本试验提取温度选取在 60 ℃为宜。
图 1 提取溶剂对总三萜含量的影响
图 2 提取温度对总三萜含量的影响
3. 1. 3 提取时间的选择:提取时间越长，提取越彻
底，但是会降低实验的可操作性，增加工作量和能源
消耗。试验结果如图 3 所示，当提取时间达到 60
min时提取到的总三萜含量最高，所以选择的提取
时间为 60 min。
图 3 提取时间对总三萜含量的影响
3. 1. 4 提取料液比的选择:由如图 4 所示试验结
果可以看出，料液比在 1∶ 12 附近，三萜的提取率最
高，之后有所下降，随着料液比的增加总三萜提取率
上升较为缓慢，料液比太大，增加蒸馏浓缩的工作
量，且考虑到成本，因此选择最佳的料液比为 1∶ 12。
图 4 液料比对总三萜含量的影响
3. 2 正交试验结果 按“2. 2. 2”项下正交试验方
法操作，试验因素水平见表 1，正交试验结果见表
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2，方差分析见表 3。
表 1 正交试验因素水平
水平
因素
A料液比
/(g /mL)
B乙醇
浓度 /%
C提取
时间 /min
D提取
温度 /℃
1 1∶ 8 60 30 40
2 1∶ 12 70 40 50
3 1∶ 16 80 60 60
由正交试验方差结果分析表可知，各因素影响
顺序依次为 A ＞ B ＞ C ＞ D(料液比 ＞乙醇浓度
＞提取时间 ＞提取温度) ，相对于 D 因素，A 和 B 两
因素影响均为差异显著 (P ＜ 0. 05) ，C 因素影响较
小，最佳提取工艺为为 A2B1C3D3，即加 12 倍量 60%
的乙醇为溶剂，在 60 ℃条件下超声提取 60 min。
表 2 正交试验结果
编号
因素
A B C D
总三萜
含量
/‰
1 1 1 1 1 1. 385
2 1 2 2 2 1. 312
3 1 3 3 3 0. 719
4 2 1 2 2 3. 638
5 2 2 3 3 3. 273
6 2 3 1 1 1. 552
7 3 1 3 3 2. 935
8 3 2 1 1 1. 719
9 3 3 2 2 0. 875
k1 1. 139 2. 653 1. 552 1. 844
k2 2. 821 2. 101 1. 942 1. 933
k3 1. 843 1. 049 2. 309 2. 025
R 1. 682 1. 604 0. 757 0. 181
表 3 正交试验方差分析结果
方差来源 离差平方和 自由度 均方 F值 P值 显著性
A 1. 427605 2 0. 7138 87. 14 0. 01134 * P ＜ 0. 05
B 1. 328297 2 0. 6641 81. 08 0. 01218 * P ＜ 0. 05
C 0. 286608 2 0. 1433 17. 49 0. 05407
D(误差) 0. 016383 2 0. 008191
3. 3 验证试验 精密称取 3 份山东肿足蕨样品各
5 g，按 A2B1C3D3 的条件提取，按“2. 2. 1”项下方法
处理，取 2 mL溶液，按“2. 1. 2”项下显色，测定总三
萜含量。以总三萜含量为指标，考察上述优选工艺
的稳定性，结果见表 4。
表 4 验证试验结果表(n =3)
编号 总三萜含量 /‰ 总三萜含量 /‰ RSD /%
1 3. 425
2 3. 448 3. 447 0. 61
3 3. 467
4 结论
山东肿足蕨总三萜最佳提取工艺为:以 12 倍
量 60 %的乙醇为溶剂，在 60 ℃条件下超声提取 60
min。通过验证试验结果可知，采用优化的工艺提取
山东肿足蕨总三萜的提取率较稳定，且符合正交试
验结果，说明此工艺稳定可行，可作为山东肿足蕨总
三萜的提取工艺。
参 考 文 献
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［3］凌秀珍，张鸿祺，刘善庭，等 . 山东肿足蕨抗生育作用实
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［4］王家英，张其桢 . 山东肿足蕨对美尼尔氏综合症与胃神
经官能症的治疗研究［J］. 济宁医专学报，1978，(1) :
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［5］刘梁，韩定献，周军，等 . 三叶委陵菜根中三萜类化合物
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［6］罗俊，林志彬 . 灵芝三萜类化合物药理作用研究进展
［J］. 药学学报，2002，37(7) :574-578.
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