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分光光度法测定鸡矢藤中总环烯醚萜苷的含量



全 文 :进行使用。
3.3.5 实验前进行安全教育的必要性(见图 5)
从数据上就可以看出,学生非常希望在实验课前进行安全
教育,以提高他们的安全意识。
通过这几幅图可以明显看出安全教育的必要性,而学生对
于这种安全教育还是很有收获的,他们不仅熟练地掌握了安全
操作规程还提高了安全意识。
4 结语
经过 1学期的实验安全渗透教育,学生无论是在安全规范
地使用仪器及试剂上,还是在安全意识上都有了很大提高。从
学生的安全作业中也可以看出,学生的安全知识越来越丰富,
而且,经过教育后,实验课上意外损坏玻璃仪器的现象和酸碱
洒出试剂瓶的情况越来越少了。
要做好安全教育工作,还需要任课教师的大力帮助,经过
安全教育后,学生做实验的态度不仅更为认真严谨,而且也懂
得了实验的严肃科学性。蒉
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鸡矢藤为茜草科鸡矢藤属多年生草质藤本植物,鸡矢藤
[Paederia scandens(Lour.)Merr.]或毛鸡矢藤[P. scandens(lour.)
merr. var. tomentosa(Bl.)H.-M.]全草或根是我国传统的中草药,
具有祛风活血,止痛解毒,消食导滞,除湿消肿的功效,在我国
分布广泛。鸡矢藤含有多种化学成分,包括挥发油、环烯醚萜苷
类、多种烷醇、齐墩果酸等油脂及甾醇类化合物[1]。现代研究证
明,鸡矢藤提取物具有良好的保肝、镇痛、抗惊、解毒、消炎、抗
病毒和抗肿瘤等作用[2~7]。研究表明,鸡矢藤总环烯醚萜苷是一
类有效成分[8~9]。目前,对鸡矢藤中总环烯醚萜苷的质量控制研
究较少[10]。我们通过分光光度法建立了鸡矢藤中总环烯醚萜苷
含量的测定方法,此法简便、快速、准确、易行,适于对鸡矢藤中
总环烯醚萜苷的含量进行测定。
1 材料及仪器
1.1 材料
鸡矢藤药材采自甘肃陇南地区,标本经甘肃省医学科学研
究院石长栓副研究员鉴定为茜草科鸡矢藤属植物鸡矢藤的全
草。
鸡矢藤苷对照品由本研究室分离纯化并鉴定结构,采用
HPLC归一法测定其含量为 98.60%。
薄层层析硅胶 G(批号:040212,青岛海洋化工有限公司生
产)、层析用硅胶(100~140目,青岛海洋化工有限公司生产)、
D101 型大孔吸附树脂[非极性,批号:04/05/12(1-2)]、活性炭
(粒状,批号:020226,天津市天达净化材料精细化工厂生产)、
冰醋酸、甲醇、乙酸乙酯、正丁醇及其他试剂均为市售 AR级。
1.2 仪器与设备
AE260(万分之一)型电子分析天平(上海)、DHG-9030型
电热恒温鼓风干燥箱(上海)、SHB-Ⅲ型循环水式多用真空泵
(郑州)、KDM型调温电热套(山东)、B3200S-T型超声波振荡
仪、BüCHI 461型旋转蒸发仪(瑞士)、UV-240型紫外-可见分
光光度仪(日本岛津)、Aligent-1100型高压液相色谱仪(德国)、
DLSB-5/10型低温循环泵(郑州)。
1.3 对照品溶液的制备
精密称取鸡矢藤苷对照品 10.0 mg置 10 ml容量瓶中,加
甲醇至刻度,摇匀,制成 1.03 mg/ml的对照品溶液备用。
1.4 供试品溶液的制备
精密称取在 60℃干燥后粉碎的鸡矢藤粗粉 10.0g,用甲醇
分光光度法测定鸡矢藤中总环烯醚萜苷的含量
王永昌,高克立,樊锦慧,李 娟
(甘肃省医学科学研究院分析实验中心,甘肃 兰州 730050)
摘 要:目的 建立鸡矢藤药材中总环烯醚萜苷的含量测定方法。方法 采用分光光度法,以鸡矢藤苷为对照品,经香草醛-
乙酸显色,紫外-可见光全波长扫描在 620 nm处有最大吸收,并在此处测定其含量。结果 鸡矢藤苷及其药材在 620 nm处
有最大吸收,测得含量稳定,重现性好,鸡矢藤苷在 10.3 ~51.5 μg/ml范围内线性关系良好(R2=0.999 5)。结论 建立鸡矢藤
中总环烯醚萜苷的含量测定方法,该方法简便、准确、可靠,可作为鸡矢藤提取、分离、纯化过程的质量控制方法。
关键词:分光光度法;鸡矢藤;总环烯醚萜苷;含量测定
中图分类号:G424.31 文献标识码:A 文章编号:1671-1246(2012)02-0096-02
实验与实习 卫生职业教育
基金项目:甘肃省科技厅条件财务处项目(GKS022-B05-07)
Vol.30 2012 No.2
96- -
索氏提取 2 h,过滤取滤液,定容至 100 ml容量瓶中,摇匀,作
为供试品溶液。
2 实验
2.1 显色条件
精密吸取对照品溶液、供试品溶液和甲醇 0.5 ml于 10 ml
试管中,水浴蒸干,冷却至室温后,加入 0.2 ml的 5%香草醛冰
醋酸溶液和 0.8 ml的高氯酸,经 60℃水浴加热 15 min,取出立
即置冰水浴中 3 min[11],用冰醋酸定容至刻度,摇匀,以甲醇管为
空白,用紫外-可见分光光度计于 620 nm处测定吸光度。
2.2 吸收波长的选择
精密吸取对照品溶液、供试品溶液和甲醇 0.5 ml,按“2.1”
项下显色条件显色,用紫外-可见分光光度计于 200~700 nm范
围扫描,结果对照品和供试品溶液在 620 nm处具有相似最大
吸收,故选择 620 nm为测定吸收峰。
2.3 线性关系
精密吸取对照品溶液 0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、
0.40、0.45、0.50 ml,水浴蒸干,按“2.1”项下显色条件显色,在
620 nm 处测定吸光度值,分别为 0.091、0.186、0.287、0.372、
0.293、0.557、0.638、0.742、0.843。以对照品溶液浓度(c)为横坐
标,吸光度(A)为纵坐标,绘制标准曲线,结果鸡矢藤苷在 10.3~
51.5 μg/ml 范围内具有良好的线性关系,得回归方程:A=
0.018c-0.091 8,R2=0.999 5。
2.4 稳定性试验
精密吸取对照品溶液 1.0 ml,用甲醇定容至 10 ml容量瓶
中,摇匀。精密吸取 0.5 ml,水浴蒸干,按“2.1”项下显色条件显
色后 1~2 h内,每隔 10 min在 620 nm处测定其吸光度,其吸光
值分别为 0.047,0.047,0.047,0.047,0.048,0.047,0.047,0.048,
0.047,0.047,0.046,0.046,平均值为 0.047,RSD=0.02%(n=12),
表明在 0~2 h内稳定性良好。
2.5 精密度试验
取对照品溶液 0.5 ml,水浴蒸干,按“2.1”项下显色条件显
色,显色后 1 h内连续测定 6次吸光度,RSD=0.02%(n=6),表明
仪器精密度良好。
2.6 重复性试验
精密称取鸡矢藤粗粉 6份,每份 10.0 g,按“2.2”项下方法
制成供试品溶液。以“2.1”项下方法显色,测定结果平均含量为
1.53%,RSD=2.33%(n=6),说明该法重复性良好。
2.7 加标回收试验
精密吸取“2.7”项各供试品溶液 5.0 ml,分别精密加入对照
品溶液 1.0 ml,甲醇定容至 10.0 ml,混匀,制成样标供试液。按
“2.1”项下方法显色,测定并计算回收率,具体见表 1。
2.8 样品测定
精密称取鸡矢藤粗粉 6份,每份 10.0 g,按“2.2”项下方法
制成供试品溶液。以“2.1”项下方法显色,测定吸光度,根据标准
曲线计算得出甘肃产地鸡矢藤中总环烯醚萜苷平均含量为
1.50%。
3 讨论
(1)鸡矢藤中含有多种化学成分,包括挥发油、环烯醚萜苷
类、多种烷醇、齐墩果酸等油脂及甾醇类化合物,仅对某一成分
进行含量测定很难全面评价其质量的优劣。曲银锋等[12]对鸡矢
藤注射液中的挥发油成分进行分析及测定,孙素珍[10]利用超高
压液相色谱法测定了鸡矢藤熊果苷含量[10],我们认为也应该对
作为鸡矢藤抗炎镇痛的有效部位之一的环烯醚萜苷类,进行质
量控制,并以鸡矢藤苷为对照品测定其总环烯醚萜苷较为合
理。
(2)在试验过程中,曾选择香草醛-冰醋酸法[13],对二甲氨基
苯甲醛-盐酸法[14],对二甲氨基苯甲醛-醋酸法[13],用紫外-可见
分光光度计在 400~700 nm范围内扫描,3种显色方法均在 620 nm
处有最大吸收,香草醛-冰醋酸法中标准溶液显天蓝色,呈色较
稳定,含量测定在 2 h内较稳定。而对二甲氨基苯甲醛-盐酸法
和对二甲氨基苯甲醛-醋酸法显色不明显,且不稳定。故认为选
择香草醛-冰醋酸法测定鸡矢藤总环烯醚萜苷类成分较为理
想。
参考文献:
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总环烯醚萜苷的含量[J]. 中药新药与临床药理,2006,17(1):46.蒉
1.450
1.480
1.540
1.560
1.570
1.600
表 1 加标回收率试验结果
编号
0.828
0.843
0.873
0.883
0.888
0.903
1.030
1.030
1.030
1.030
1.030
1.030
1
2
3
4
5
6
0.827
0.854
0.868
0.882
0.891
0.908
99.88
101.30
99.42
99.88
100.34
100.55
100.23 0.27
样品含量
(mg/ml)
对照品含
量(mg/ml)
样标含量
(mg/ml)
测得量
(mg/ml)
回收率
(%)
平均回
收率(%)
RSD
(%)
97- -