全 文 ：［收稿日期］ 20141027(006)
［基金项目］ 校重点学科青年教师培养计划项目(2012jzzdxk051)
［第一作者］ 李彩丽，在读硕士，从事药物成分分析和质量控制研究，Tel:18582080856，E-mail:987339674@ qq． com
［通讯作者］ * 平欲晖，副教授，从事药物成分及质量控制研究，Tel:13677090003，E-mail:pingyh@ 163. com
HPLC测定芒萁中槲皮素和山柰素的含量
李彩丽，平欲晖*
(江西中医药大学，南昌 330004)
［摘要］ 目的:建立 HPLC测定芒萁中槲皮素和山柰素含量的方法，并测定不同产地芒萁中槲皮素和山柰素含量。方
法:分别用不同体积分数的甲醇和乙醇做为槲皮素和山柰素的提取溶剂，采用超声、回流两种方法提取槲皮素和山柰素，采用
高效液相色谱法，Diamonsil C18色谱柱(4. 6 mm × 200 mm，5 μm) ，流动相甲醇-0. 1%磷酸水(54∶ 46) ，流速 1. 0 mL·min
－1，柱温
30 ℃，检测波长 366 nm。结果:槲皮素和山柰素用 80%甲醇回流提取率较高，江西鹰潭的芒萁中槲皮素和山柰素含量较高。
芒萁中槲皮素、山柰素分离效果良好，线性范围分别为 1. 051 ～ 16. 24，0. 505 ～ 8. 08 μg。结论:该法准确灵敏、稳定可靠，可用
于芒萁的质量控制，不同产地芒萁中槲皮素及山柰素含量差别较大。
［关键词］ 芒萁;槲皮素;山柰素;高效液相色谱
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2015)19-0064-04
［doi］ 10. 13422 / j． cnki． syfjx． 2015190064
Determination of Quercetin and Kaempferol in Dicranopiers dichotoma LI Cai-li， PING Yu-hui*
(Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanchang 330004，China)
［Abstract］ Objective:To establish a HPLC method for the determination of quercetin and kaempferol in
Dicranopiers dichotoma，and to determine the content of quercetin and kaempferol in D． dichotoma from different
areas． Method:Different volume fractions of methanol and ethanol were chosen as the extraction solvents for
quercetin and kaempferol． They were extracted by ultrasonic extraction and refluxing process and determined by
HPLC． Diamonsil C18 column (4. 6 mm ×200 mm，5 μm)was adoped，with the mixture of methanol-0. 1%H3PO4
water (54∶ 46)as the mobile phase． The flow rate was 1. 0 mL·min －1，and the column temperature at 30 ℃，the
detection wavelength was set at 366 nm． Ｒesult:Ｒefluxing process with 80% methanol was proved to be the
optimal extraction method for quercetin and kaempferol，and the content of quercetin and kaempferol in D．
dichotoma from Yingtan of Jiangxi Province was more than that from other areas． This method had a good separation
performance for quercetin and kaempferol in D． dichotoma，and the linear range were 1. 051-16. 24，0. 505-8. 08
μg，respectively． Conclusion:This method is accurate，sensitive，stable and reliable，and can be used in the
quality control of D． dichotoma． The contents of quercetin and kaempferol in D． dichotoma of different origins were
significantly different．
［Key words］ Dicranopiers dichotoma;quercetin;kaempferol;HPLC
芒萁广泛分布于我国长江以南各省区，为典型
的酸性土壤指示植物［1］。全草入药，有清热、化湿
利尿、去瘀止血的功效，具有较高的实际应用价
值［2-4］。芒萁中黄酮类化合物含量高，而且具有很
好的抗菌、抗氧化作用［5-7］，芒萁黄酮提取物是一种
很好的功能性食品添加物，可以作为一些降血压、降
血脂、抗衰老等功能保健食品的有效成分［8］。近年
来有学者发现芒萁还具有抗癌［9-10］，抗 HIV-1［11］的
作用。
目前，国内外主要从医药卫生、农业科学、生物
科学、环境科学几个方面对芒萁展开研究［12-14］，有
在芒萁中提取出了黄酮类、酚类、生物碱类、甾体及
萜类等［15-17］多种化学成分。HPLC 测定芒萁中槲皮
素和山柰素含量的方法尚未见报道，作者以槲皮素
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Vol． 21，No． 19
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和山柰素为指标性成分，建立了其含量测定方法，并
对江西省境内 10 个不同地区的芒萁样品进行了测
定，对芒萁的质量控制和开发利用具有重要的意义。
1 材料
1200 系列高效液相色谱仪(VWD 检测器、四元
泵、自动进样器、柱温箱、在线真空脱气机，美国安捷
伦公司) ，AE-240 型 1 /10 万天平 (瑞士梅特勒公
司) ，SZ-97A型自动三重纯水蒸馏器(上海亚荣生化
仪器厂)。
芒萁药材分别采于江西多个地区，经江西中医
药大学付小梅老师鉴定为里白科植物芒萁
Dicranopteris dichotoma 的全草。槲皮素对照品(江
西品正贸易有限公司，批号 1166-101216) ，山柰素
对照品 (上海永恒生物科技有限公司，批号
201000924) ，甲醇为色谱纯，水为三蒸水，其他试剂
均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Diamonsil C18色谱柱(4. 6 mm ×
200 mm，5 μm) ，流 动 相 甲 醇-0. 1% 磷 酸 水
(54∶ 46) ，流速 1. 0 mL·min －1，检测波长 366 nm，柱
温 30 ℃。见图 1。
A．混合对照品;B. 供试品;1. 槲皮素;2. 山柰素
图 1 芒萁的 HPLC
Fig． 1 HPLC chromatography of Dicranopteris dichotoma
2. 2 对照品溶液的制备 分别精密称取槲皮素对
照品 11. 98 mg 和山柰素对照品 11. 84 mg，置25 mL
量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得每 1 mL含槲皮素
0. 479 2 mg，山柰素 0. 473 6 mg 的对照品储备液。
分别吸取一定量的对照品储备液制成槲皮素
(0. 287 5 g·L －1)山柰素(0. 142 1 g·L －1)的混合对
照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备 称取芒萁药材粉末(过
60 目筛)1 g，精密称定，置 150 mL 圆底烧瓶中，加
80%甲醇 20 mL，盐酸 1 mL，在 80 ℃回流提取 1 h，
放冷，过滤，取续滤液，过 0. 45 μm微孔滤膜，即得。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 线性关系考察 精密移取槲皮素和山柰素
对照品母液一定体积，用甲醇稀释成含槲皮素
50. 75，101. 5，305. 5，710. 5，812 mg·L －1，山柰素为
25. 25，50. 5，151. 5，353. 5，404 mg·L －1的系列对照
品溶液。分别进样，以进样量(X)为横坐标、峰面积
(Y)为纵坐标进行线性回归，得回归方程，槲皮素
Y = 2 095. 6X + 2 104. 1(r = 0. 999 5) ，山柰素 Y =
2 058. 1X + 970. 1(r = 0. 999 5)。结果表明槲皮素
和山柰素分别在 1. 015 ～ 16. 24，0. 505 ～ 8. 08 μg，进
样量与峰面积呈良好线性关系。
2. 4. 2 精密度试验 精密吸取槲皮素(0. 287 5
g·L －1)山柰素(0. 142 1 g·L －1)的混合对照品溶液
20 μL，按照上述色谱条件，连续进样 6 次。测得槲
皮素山柰素峰峰面积的 ＲSD 分别为 1. 6%，1. 5%。
结果表明，所用仪器精密度良好。
2. 4. 3 重复性试验 精密称取芒萁粉末 6 份，按
2. 3 项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件进
样分析，测得槲皮素和山柰素的质量分数分别为
4. 723 1，3. 497 5 mg·g －1，ＲSD分别为 1. 3%，1. 2%，
表明该试验重复性良好。
2. 4. 4 稳定性试验 取供试品溶液，分别于配制后
0，2，4，6，8，10 h 进样 20 μL，记录峰面积，结果槲皮
素和山柰素的 ＲSD 分别为 1. 1%，1. 3%，表明供试
品溶液在 10 h内稳定。
2. 4. 5 加样回收率试验 准确称取已知含量的芒
萁样品 6 份，每份约 0. 5 g，分别加入槲皮素和山柰
素对照品适量，按 2. 3 项下方法制备供试品溶液，照
上述色谱条件进样分析，计算回收率，结果见表 1。
2. 5 样品含量测定 取不同产地芒萁粉末各 1 g，
精密称定，按 2. 3 项下方法制备供试品溶液，分别进
样 20 μL，按上述色谱条件测定，计算槲皮素和山柰
素的含量，结果见表 2。
3 讨论
通过全波长扫描，发现槲皮素和山柰素在 366
nm处都基本达到最大吸收，故采用 366 nm 作为检
测波长。再考察不同色谱柱温度(25，30，35，40 ℃)
和流动相比例(甲醇-0. 1%磷酸水 60 ∶ 40，56 ∶ 44，
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表 1 芒萁中槲皮素和山柰素的加样回收率
Table 1 Ｒecovery test of Dicranopteris dichotoma
成分
称样量
/ g
样品中量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
ＲSD
/%
槲皮素 0. 500 3 2. 363 0 2. 381 3 4. 764 4 100. 85 101. 37 0. 5
0. 500 7 2. 364 9 2. 381 3 4. 766 8 100. 87
0. 500 1 2. 362 0 2. 381 3 4. 775 4 101. 35
0. 500 5 2. 363 9 2. 381 3 4. 791 5 101. 94
0. 500 4 2. 363 4 2. 381 3 4. 790 5 101. 92
0. 500 1 2. 362 0 2. 381 3 4. 774 4 101. 31
山柰素 0. 500 3 1. 749 8 1. 705 0 3. 434 4 98. 80 100. 37 1. 2
0. 500 7 1. 751 2 1. 705 0 3. 440 8 99. 10
0. 500 1 1. 749 1 1. 705 0 3. 464 4 100. 60
0. 500 5 1. 750 5 1. 705 0 3. 471 0 100. 91
0. 500 4 1. 750 1 1. 705 0 3. 468 1 100. 76
0. 500 1 1. 749 1 1. 705 0 3. 488 9 102. 04
表 2 不同产地芒萁样品槲皮素和山柰素含量测定
Table 2 Content determination of Dicranopteris dichotoma mg·g － 1
No． 产地 槲皮素 山柰素
1 江西中医药大学湾里校区 4. 52 2. 99
2 江西吉安吉安县 4. 55 2. 98
3 江西萍乡 3. 90 3. 34
4 江西赣州银坑 8. 18 5. 63
5 江西上饶万年 5. 23 4. 87
6 江西宜春 2. 66 4. 28
7 江西鹰潭 12. 45 5. 86
8 江西吉安泰和县 3. 68 3. 90
9 江西九江彭泽 1. 65 1. 96
10 江西上饶余干 8. 91 2. 68
54∶ 46，52 ∶ 48) ，发现当柱温 30 ℃，流动相甲醇-
0. 1%磷酸水(54 ∶ 46)时芒萁中山柰素和槲皮素的
分离度较好，保留时间也适宜。
考察了提取溶剂(甲醇、乙醇、乙酸乙酯、甲醇-
盐酸、乙醇-盐酸)及回流、超声两种提取方法，结果
发现甲醇-盐酸回流提取的有效成分含量较高。回
流提取时主要考察了提取溶剂(50%，70%，80%，
90%，100%的甲醇)、溶剂用量(甲醇 10，15，20，30，
40，50 mL，盐酸 1 mL)、提取时间(30，60，90，120
min)、提取温度(70，80，90 ℃) ，鉴于节约溶剂、时间
及有效成分含量考虑，本实验采用的最佳提取工艺
为芒萁 1 g 加入到 80%的甲醇-盐酸提取液 20 mL
中在 80 ℃条件下回流 1 h。
本实验结果表明不同地区生长的芒萁中槲皮素
和山柰素含量不尽相同，其中以江西鹰潭的槲皮素
和山柰素含量最高。
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［责任编辑 顾雪竹］
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