全 文 ：收稿日期:2006-09-08;　修订日期:2006-12-31
基金项目:国家自然科学基金项目(No. 3987099);
广东医学院青年基金项目(No. XQ0208)
作者简介:龚先玲(1975-),女(汉族),湖北天门人 ,现任广东医学院天然
药物研究与开发重点实验室助理研究员,硕士学位 ,主要从事天然药物化
学的研究与教学工作.
高效液相色谱法分析测定半边旗中黄酮类化合物
龚先玲 1 , 陈志红2 , 梁念慈 1
(1. 广东医学院广东天然药物研究与开发重点实验室 ,广东 湛江　524023;
2. 广东医学院分析中心 ,广东 湛江　524023)
摘要:目的 分析测定半边旗中木犀草素和芹菜素的含量。方法 采用 ODS-C18分析柱(25 mm ×4. 6 mm, 5 μm);流动相
为甲醇 - 0. 4%的磷酸水溶液(1∶1);检测波长 345 nm , 流速 1 m l m in- 1 , 柱温为 25℃。结果 木犀草素线性范围 0. 02
～ 0. 4μg, r=0. 999 9, 平均回收率为 96. 39%(RSD =1. 95%);芹菜素线性范围 0. 02 ～ 0. 4 μg, r=0. 999 6, 平均回收率为
98. 10%(RSD =0. 96%)。结论 此法简便 、准确 、灵敏度高 、重复性好 , 可以作为半边旗中两种黄酮的测定方法。
关键词:半边旗;　黄酮类化合物;　高效液相色谱法
中图分类号:R284. 2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2007)05-1028-01
Analysis and Determ ination of F lavonoids in P teris sem ipinnata L. by HPLC
GONG X ian-ling1 , CH EN Zhi-hong2 , L IANG N ian-ci1
(1. Guangdong Key Laboratory forDevelopment and R esearch ofNa turalDrugs, Guangdong Med ica lCollege,
Zhan jiang 524023, China;2. Analysis Center, GuangdongMed ica lCollege, Zhanjiang 524023, Ch ina)
Abstract:Objective To ana ly ze and de term ine the content o f lu teo lin and ap igenin in P teris sem ipinnata L. byHPLC. M ethods
TheHPLC sy stem consisted o f ODS - C18 co lum n(25 mm ×4. 6 mm , 5 μm), m ethano l:0. 4% sodium m ix tu re as a m ob ile
phase, de tection w ave leng th a t 345nm , 1 m l m in- 1 o f flow rate and co lumn tem pe ra tu re a t 25℃. Resu lts The linear range o f
luteo lin and ap igenin w ere 0. 02 ～ 0. 4μg, r=0. 999 9 and 0. 02 ～ 0. 4 μg, r=0. 999 6 re spec tive ly, the recove ry w ere 96. 39%
(RSD =1. 95%, n =5) and 98. 10%(RSD =0. 96%, n=5) respective ly. Conc lusion The me thod is sim ple, accurate, sensitive
and reproducible. Thism e thod can be used for the quantitative dete rm ina tion o f flavono ids in P teris sem ipinnata L.
Key words:P teris sem ipinnata L. ;　F lavono ids;　HPLC
　　半边旗 P teris sem ipinnata L.为凤尾蕨科凤尾蕨属植物 , 广泛
分布于四川及长江以南各省区 ,味苦 、辛 ,性凉 , 具疏散风寒 、化湿
消肿 、清热解毒等功效 [ 1] 。半边旗全草含黄酮类化合物 [ 1, 2] , 傅
玉萍等 [ 3]检测了半边旗中总黄酮的含量 , 黄酮类化合物具有抗
肿瘤 、抗炎 、抗菌 、抗病毒等作用 [ 4] 。为了进一步明确半边旗中
黄酮类化学成分 , 本文采用高效液相色谱法分析测定了半边旗中
木犀草素和芹菜素的含量。
1　仪器与试药
1. 1 　仪器 美国惠普公司 HP-1100高效液相色谱仪;瑞士梅特
勒公司 AE-240型电子分析天平。
1. 2　试药 黄酮标准品:木犀草素 ( luteo lin;5, 7, 3, 4-TETRA-
hyd roxy flavone)、芹菜素(apigenin;5, 7, 4-trihydroxy flavone), 由天
津尖峰公司提供(含量大于 98%), 甲醇为一级色谱纯 , 其它试剂
均为分析纯;半边旗样品 2002-05采于广州市郊 , 由广东海洋大
学扬燕君副教授鉴定 。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件 色谱柱为 ODS C
18
分析柱(25 mm ×4. 6 mm , 5
μm);流动相为甲醇 -0. 4%的磷酸水溶液(1∶1);DAD检测器 ,
检测波长 345nm ,流速 1 m l m in- 1 ,柱温为 25℃。
2. 2　供试品溶液的制备 半边旗药材经过粉碎 , 过 40目筛 ,称取
该粉末约 2. 0 g, 加 20 m l甲醇 , 80℃下水浴加热回流 2次 ,
2 h /次。过滤 ,合并滤液 , 移入 25 m l容量瓶中 , 定容 ,取该溶液少
量用 0. 45 μm的微孔滤膜过滤 ,作为供试品溶液 ,备用。
2. 3　对照品溶液的制备 称取木犀草素对照品 2. 50 m g,加甲醇
定容至 25 m l, 作为储备液。称取芹菜素对照品 2. 50 m g, 加甲醇
定容至 25 m l,作为储备液。取两种储备液各 15m l,加甲醇 45 m l,
制成木犀草素 、芹菜素浓度均为 0. 02 μg μl - 1的对照品混合
液 , 作为对照品溶液。
2. 4　线性关系考察 精密吸取对照品溶液 1, 2. 5, 5, 10, 20 μl依
次进样 , 按照上述色谱条件测定峰面积 , 木犀草素的峰面积分别
为 68. 30, 168. 95, 331. 70, 698. 26, 1415. 26;芹菜素的峰面积分别
为 74. 91, 161. 53, 346. 67, 743. 72, 1509. 54。以峰面积(Y)和质量
(X)进行回归。求得回归方程见表 1。
表 1　回归方程与线性范围
成分 回归方程 r 线性范围 m /μg
木犀草素 Y =3 558. 514 8X - 11. 517 3 0. 999 9 0. 02～ 0. 4
芹菜素 Y =3 816. 801 5X - 20. 513 4 0. 999 6 0. 02～ 0. 4
2. 5　精密度实验 精密吸取木犀草素和芹菜素分别为 0. 02 μg
μl- 1的对照品溶液 10 μl, 重复进样 5次 ,对照品木犀草素峰面积
的平均值为 699. 53, RSD =0. 86%, 芹菜素峰面积的平均值为
742. 83, RSD =1. 75%。
2. 6　稳定性实验 取样品供试液分别在 0, 2, 4, 6, 8 h测定 ,结果
表明在测定条件下 ,于 8 h内测定结果稳定 , 木犀草素和芹菜素
RSD分别为 2. 50%, 2. 74%。
2. 7　重现性实验 按样品测定法测定 , 对同一批半边旗样品测定
5次 , 木犀草素和芹菜素平均含量分别为 0. 240 8, 0. 211 6 mg
g - 1 , RSD 分别为 2. 20%, 2. 46%。
2. 8　加样回收率实验 精密称取已知含量的半边旗样品 ,再精密
加入浓度均为 0. 02 μg μl- 1木犀草素和芹菜素对照品溶液 11
m l, 按供试品溶液制备方法制备 , 按样品测定法测定 , 计算回收
率。结果见表 2 ～ 3。
2. 9　样品测定 分别取上述木犀草素 、芹菜素和对照品溶液 10
1028
时珍国医国药 2007年第 18卷第 5期 LISH IZHEN MED IC INE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2007 VOL. 18 NO. 5　
μl,样品溶液 10μl注入高效液相色谱仪 , 按 2. 1项色谱条件测
定 , 木犀草素标准品的色谱图见图 1, 芹菜素标准品的色谱图见
图 2,对照品溶液的色谱图见图 3, 样品溶液的色谱图见图 4。 3
批样品木犀草素和芹菜素含量结果见表 4。
表 2　木犀草素回收率实验结果
样品量
m /g
样品含量
m /mg
对照品加样量
m /mg
测得总量
m /mg
回收率
(% )
平均回收率
(%)
RSD
(% )
2. 003 6 0. 482 5 0. 220 0. 690 3 94. 45
2. 003 0 0. 482 3 0. 220 0. 691 3 95. 00
2. 008 7 0. 483 7 0. 220 0. 701 0 98. 77 96. 39 1. 95
2. 007 0 0. 483 3 0. 220 0. 698 8 97. 95
2. 004 9 0. 482 8 0. 220 0. 693 5 95. 77
表 3　芹菜素回收率实验结果
样品量
m /g
样品含量
m /mg
对照品加样量
m /mg
测得总量
m /mg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
2. 003 6 0. 424 0 0. 220 0. 637 2 96. 91
2. 003 0 0. 423 8 0. 220 0. 638 8 97. 73
2. 008 7 0. 425 0 0. 220 0. 643 1 99. 14 98. 10 0. 96
2. 007 0 0. 424 7 0. 220 0. 642 5 99. 00
2. 004 9 0. 424 2 0. 220 0. 639 2 97. 73
图 1　木犀草素标准品的色谱图　　图 2　芹菜素标准品的色谱图
3　讨论
3. 1　 木犀草素和芹菜素在 340 ～ 360 nm之间有较大吸收峰 ,但
由于木犀草素在 350 nm处吸收峰达最大 , 芹菜素在 340 nm处吸
收峰达最大 ,综合考虑 , 选择 345 nm作为紫外检测波长。
图 3　木犀草素和芹菜素标准品的色谱图 图 4　半边旗样品溶液的色谱图
表 4　3批样品的测定结果
批
号
木犀草素
含量 C /mg g- 1　RSD(%)
芹菜素
含量 C /mg g- 1　RSD(%)
1 0. 242 1 2. 49 0. 209 6 3. 96
2 0. 241 6 1. 66 0. 215 3 2. 64
3 0. 240 2 1. 07 0. 214 6 3. 60
3. 2　 本法同时测定半边旗中的木犀草素和芹菜素含量 , 简便、准
确 、灵敏度高 、重复性好, 可以作为半边旗中两种黄酮的测定方法。
参考文献:
[ 1 ] 　丁恒山. 中国药用孢子植物学 [ M ] . 上海:上海科技出版社 ,
1982:104.
[ 2 ] 　徐国钧 ,何宏贤 ,徐珞珊 ,等.中国药材学 ,下册 [M ] . 北京:中国医
药科技出版社 , 1996:1337.
[ 3 ] 　傅玉萍 ,苟占平 ,胡菊英 , 等. 分光光度计测定不同时期半边旗总
黄酮含量 [ J] . 时珍国医国药 , 2001, 12(12):1080.
[ 4 ] 　裴凌鹏 ,惠伯棣,金宗濂 ,等. 黄酮类化合物的生理活性及其制备
技术研究进展 [ J] . 食品科技 , 2004, 25(2):203.
收稿日期:2006-10-18;　修订日期:2007-01-19
基金项目:南开大学元素有机化学国家重点实验室开放基金资助课题
(No. 0317)
作者简介:杨红兵(1968-),女(汉族),新疆石河子人, 现任石河子大学化
学化工学院副教授 ,硕士学位 ,主要从事药物分析的研究工作.
底物固相分散法测定肉苁蓉中有机氯的残留研究
杨红兵 1 , 张　玲2 , 齐　誉 1
(1.新疆石河子大学化学化工学院 ,新疆 石河子　832003;
　2. 南开大学元素有机化学国家重点实验室 ,天津　300071)
摘要:目的 建立肉苁蓉中多种有机氯类农药同时检测的方法。方法 运用底物固相分散(MSPD)法 、气相色谱法同时测
定肉苁蓉中六六六及滴滴涕七种异构体。结果 六六六及滴滴涕七种异构体的加标回收率均大于 80%, RSD <5%,肉苁
蓉样品在优化的 MSPD的实验条件下 , 无需进一步净化即可用于气相色谱检测。结论 该方法具有试剂用量少 , 操作简
便 , 快速等特点。
关键词:底物固相分散法;　有机氯农药;　肉苁蓉;　残留量
中图分类号:S482. 35　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2007)05-1029-02
Studies on O rganochlorine Pestic ides Res idues in H erba C istanches by M atrix Solid -
Phase D ispersionM ethod
YANG H ong-bing1 , ZHANG L ing2 , Q IY u1
(1. School of Chem istry＆Chem icalEng ineering , ShiheziUn iversity , Shihezi 832003, China;2. S ta teKey Labo-
ratory of E lemento -organ icChem istry, Nanka iUniversity, Tianjin300071 ,Ch ina)
Abstract:Objective To determ ine the organoch lorine pestic ide residues inHerba Cistanches. Methods Seven organoch lorina ted pesti-
c ide residues inHerba Cistanches we re determ ined by ma trix so lid -phase dispersionm ethod(MSPD) and gas chroma tography . Results
The recoveries o f organochlorine pesticides inHerba C istanches were above 80%. The re lative standard deviations a llwe re below 5%(n
=5). TheMSPD condition was op tim ized. Under theMSPD condition , no further c leanup w as necessa ry for subsequen t gas chrom ato-
g raph ic de te rm ina tion. Conc lusion This me thod has features of fewer solvents, easy ope ration and rapidness.
Key words:M atrix so lid - phase dispersion(M SPD);　O rganochlorine pesticide;　Herba C istanches. Residue;
　　中草药中有机氯农药残留量的前处理多采用液液萃取 [ 1, 2] 、
柱层析净化 [ 3, 4]或超声辅助萃取 [ 1 ～ 4]等方法 ,但以上方法操作上
比较繁琐 ,试剂需要量大 ,且非常耗时。本文将一种新型的样品
前处理技术底物固相分散法 (M atrix solid - phase dispe rsion,
MSPD)用于中草药中农药残留的研究 , 该法将提取和净化在同
1029
LISH IZHEN M EDIC INE AND MATER IA MED ICA RESEARCH 2007 VOL. 18 NO. 5 时珍国医国药 2007年第 18卷第 5期