全 文 ：169.
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迎春花植物茎叶中黄酮类物质初步研究
张志信1 ,张仕秀2 ,宋关斌1 ,秦建1(1.重庆大学生物工程学院 , 重庆 400044;2.文山师范高等专科学校 , 云南 文山 663000)
摘要:采用硝酸铝———亚硝酸钠比色法对迎春花茎叶内的黄酮类物质含量进行了初步测定 , 确定了总黄酮含量提取的适宜
溶剂浓度和提取的适宜时间。结果表明 ,用 60%甲醇溶剂提取 5h 总黄酮含量最高 , 茎杆中的含量为 10.42mg g DW , 叶片中的含
量为18.31mg g DW。此外 ,还对迎春花叶提取液进行了各种黄酮定性颜色反应 ,初步确定其中的黄酮类物质主要为双氢黄酮类
及查尔酮类。
关键词:迎春花;总黄酮;含量;颜色反应
中图分类号:Q586;Q949.776.2　　文献标识码:A　　文章编号:1004-311X(2004)04-0030-02
Studies on the Flavonoids in the Leaves and Stems of Jasminum nudiflorum Lindl.
ZHANG Zhi-xin1 ,ZHANG Shi-xiu2 ,SONG Guan-bin1 ,QIN Jian1
(1.The College of Bio-engineering Chongqing University ,Chongqing 400044;2.The Wenshan Normal College ,Wenshan 663000, P.R.China)
Abstract:The oven-dried leaves and stems from Jasminum nudi-florum Lindl.were analyzed for the total contents of flavonoids by spectropho-
tometryic method of aluminum nitrate-natrium nitrite.And the optimal solvent concentration and the best time of extraction were also obtained.R-
esults showed that using 60%Methyl alcohol for 5 hours of extraction could achieved the highest contents of total flavonoids.The total contents of
flavonoidsare 10.42(mg g DW) in stems , 18.31(mg gDW)in leaves.In additional , the total flavoids extraction from Jasminum nudiflorum
Lindl.are mainly Flavanones and Chalcones by analyzing for its coloration reactions.
Key words:Jasminum nudiflorum Lindl.;total flavonoids;contents;coloration reactions
收稿日期:2003-12-10;修回日期:2004-02-11
作者简介:张志信(1970-),男 ,云南文山人 ,硕士生 ,从事天然药物活
性成分研究 ,发表论文十余篇。
　　迎春花(Jasminum nudi- florum Lindl.)又名金腰带 、小黄
花 ,为木犀科(Oleaceae)茉莉花属或素馨属(Jasminum Lindl.)植
物 ,主要以其茎叶入药 , 5 ～ 7月采集。据《本草纲目》记载其性
味“苦平” , 具有“解毒消肿 , 止痛止血“之功效 , 主治” 跌打损
伤 、无名肿痛 、口腔炎 、外阴瘙痒“等病症[ 1] 。迎春花叶所含的
丁香甙(Syringin)迎春花甙(Jasmiflorin)及迎春花苦味质(Jas-
mipierin)等成分已有文献报道[2] , 而有关迎春花植物中黄酮类
物质的研究还未见报道 ,因此 , 作者对迎春花茎叶中的总黄酮
含量以及可能成分进行了初步分析。黄酮类物质具有抗氧
化 ,抗衰老以及增强机体免疫力等功效 , 测定迎春花植物内的
黄酮类物质对开发利用该植物资源可能起到一定指导作用。
1　材料与方法
1.1　材料及仪器
1.1.1　材料:迎春花(Jasminum nudi-florum Lindl.)茎叶 , 2003
年7 月采自重庆大学校园内 , 洗净沥干后 ,烘至恒重备用。标
准品芦丁(中国药品生物制品检定所)。所用试剂均为分析
纯。
1.1.2　仪器:752 紫外分光光度计(上海光谱仪器有限公司);
ZF型紫外透射反射分析仪(上海康华生化仪器制造厂);索氏
提取器(重庆化玻仪器厂)。
1.2　方法
1.2.1　黄酮含量测定方法:采用硝酸铝———亚硝酸钠比色法
测定总黄酮含量 , 即利用黄酮类化合物与铝盐反应生成红色
络合物 ,以芦丁为标准品在 500nm 处测定吸光度[ 3-5] 。
(1)标准溶液的配制:精密称取 120℃干燥至恒重的芦丁
对照品 10mg 用 20ml乙醇溶解后 , 转移到 100ml容量瓶中 , 加
水至刻度 ,摇匀即得(每毫升溶液中含无水芦丁 0.1mg)。
(2)标准曲线的制作:精密吸取芦丁标准液 0.0ml、1.0ml 、
2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml。分别置于 25ml容量瓶中 , 各
加水至 6ml , 加 5% NaNO2 溶液 1ml ,混匀 , 放置 6min ,加 10%Al(NO3)3 溶液 1ml ,混匀 ,放置6min , 加4%NaOH 10ml , 再加水至
25ml , 放置 15min , 以不加芦丁对照品的试剂作空白对照。按分
光光度法在 500nm 波长处测定吸光度 ,其结果见表 1。
以所取标准液含有的芦丁标样量 mg 数和吸光度数据经
回归处理 , 得到回归方程 , 回归方为程:A =1.47 ×10 -3 +
0.4929C , 相关系数 r=0.9993。以吸光度对标样含量 mg 数作
图得到标准曲线图 ,见图 1。
1.2.2　迎春花茎叶总黄酮含量的测定:将茎叶用研钵研碎 , 过
20 目筛 , 120℃烘干至恒重 , 称取茎叶各 5.0000g , 以 60%甲醇
为溶剂采用索氏提取器 , 加热回流提取 5h。过滤 , 残渣用 60%
甲醇冲洗 3 次 ,合并滤液 , 静置过夜 , 过滤 , 定容至 500ml , 取上
述样品液 V(ml), 按标准曲线相下方法于 500nm 处测定吸光
度。利用标准曲线测得的回归方程计算总黄酮的含量。
1.2.3　计算结果
图 1　芦丁标准曲线
Fig.1　The standard curve of rut in
图 2　溶剂浓度对提取率的影响
Fig.2　The affection of concent ration of solvent on extraction rate
图 3　提取时间对提取率的影响
Fig.3　The affection of extraction time on extraction rate
第 14卷第 4 期:30
2004 年 8 月 　　　　　　　　　　　　　　　　
生　物　技　术
BIOTECHNOLOGY
　　　　　　　　　　　　　　　　　Vol.14 , No.4:30
Aug.2004
表 1　芦丁标准曲线的测定
Table 1　Determination of Rutin′s standard curve
编号Number 1 2 3 4 5 6 7
芦丁标量(mg)
Rutin s standard contents 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
吸光度(A)absorbance 0 0.052 0.102 0.148 0.192 0.254 0.296
　　样品中的总黄酮含量(以芦丁计)(mg g DW)=100C
V
式中:C 样品液含总黄酮量(mg);V样品液体积(ml)。
2　结果与分析
2.1　提取条件选择[6 ,7]
2.1.1　提取溶剂浓度的选择
迎春花叶片分别加 100%、80%、60%、40%、20%甲醇
250ml , 回流提取 5h , 过滤 ,定容至 500ml ,按标准曲线项下的方
法测定总黄酮的含量 ,结果见表 2。
表 2　溶剂浓度对提取率的影响
Table 2　The affect of concent ration of solvent on extraction rate
甲醇浓度(%) 100 80 60 40 20
叶片总黄酮含量(mg g DW) 18.14 18.21 18.31 17.86 16.92
2.1.2　提取时间的选择
精密称取适量迎春花叶片样品 ,加 250ml 60%甲醇回流提
取2h、4h 、5h、6h、7h , 过滤 , 残渣用 60%甲醇洗涤 3 次 , 定容至
500ml , 按标准曲线项下测定总黄酮含量 ,结果见表3。
表 3　提取时间对提取率的影响
Table 3　The affect of extraction time on extraction rate
提取时间(h) 2 4 5 6 7
叶片总黄酮含量(mg g DW) 11.74 17.13 18.31 18.26 18.16
2.2　样品总黄酮含量的测定
迎春花茎叶用 60%甲醇 250ml提取 5h ,过滤 , 残渣用 60%
甲醇洗涤 3次 , 合并滤液 ,定容至 500ml ,按标准曲线项下的方
法测定总黄酮的含量 ,结果见表 4。
表 4　迎春花茎叶中总黄酮含量
Table 4　Total contents of flavonoids in stems and leaves of Jasminum nudiflorum Lindl.
迎春花部位 总黄酮含量(mg g DW)
茎杆(Stems)
叶片(Leaves)
10.42
18.31
表 5　迎春花叶片提取液中的黄酮类物质的显色结果
Table 5　The coloration results of the flavonoids extracted in the
leaves of Jasminum nudiflorum Lindl.
显色试剂 浓硫酸 氢氧化钠 三氯化铁 三氯化铝 醋酸镁 硼氢化钠 盐酸-镁粉 锆-柠檬酸
显色结果 紫红色 橙黄色 深绿色 蓝绿色 ＊ 蓝色 ＊ 紫红色 蓝色 黄色＊
　　注:＊表示有荧光(fluorescence)。
从表 4结果可知 , 迎春花黄酮类物质主要分布在叶中 , 茎
中的黄酮类物质含量低于叶中的含量。
2.3 迎春花叶片提取液中的黄酮颜色反应
2.3.1　浓硫酸试验:取迎春花叶片的总黄酮提取液约 1ml于
试管中 ,加入浓硫酸数滴 , 混匀 , 喷于滤纸上 , 吹干后观察现
象。
2.3.2　醋酸镁试验:用玻棒蘸取总黄酮提取液涂于滤纸上 , 吹
干 , 喷 1%醋酸镁的甲醇溶液 , 吹干后于紫外灯下观察。
2.3.3　二氯氧化锆—柠檬酸试验:取迎春花叶片的总黄酮提
取液约 1ml于试管中 , 加入 2%二氯氧化锆的甲醇溶液 , 混匀 ,
观察现象;再加入 2%柠檬酸溶液 , 混匀 ,观察现象。
2.3.4　氢氧化钠试验:用玻棒蘸取总黄酮提取液涂于滤纸上 ,
吹干 , 喷 4%氢氧化钠溶液 , 吹干后观察现象。
2.3.5　三氯化铁试验:取迎春花叶片的总黄酮提取液约 1ml
于试管中 , 加入 1%三氯化铁溶液数滴 , 混匀 ,观察现象。
2.3.6　三氯化铝试验:用玻棒蘸取总黄酮提取液涂于滤纸上 ,
吹干 , 喷 1%AlCl3 的乙醇溶液 ,吹干后于紫外灯下观察。
2.3.7　盐酸—镁粉试验:取迎春花叶片的总黄酮提取液约
1ml于试管中 ,加入少量镁粉 , 然后再滴加数滴浓盐酸 , 观察现
象(另一试管提取液仅加入浓盐酸进行对比 , 以排除本身颜色
干扰)。
2.3.8　硼氢化钠还原试验:取迎春花叶片的总黄酮提取液约
1ml于试管中 ,加入等量的 2%NaBH4 的甲醇溶液 , 1min 后 , 沿
着试管壁滴加数滴浓硫酸 , 观察现象。
从表 5的定性颜色反应的结果 , 查阅相关的资料可以初
步判断[8-10] ,迎春花叶片样品中的黄酮类物质主要是双氢黄
酮类和查尔酮类。
3　结论
迎春花茎叶用 60%甲醇溶剂提取 5h 总黄酮含量最高 , 茎
杆中的含量为 10.42mg g DW , 叶片中的含量为 18.31mg g DW。
对迎春花叶提取液进行了各种黄酮定性颜色反应 , 初步确定
其中的黄酮类物质主要为双氢黄酮类及查尔酮类。
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高效液相色谱法测定细菌发酵液中的糖 、甘油和乙醇的研究
陈毅坚1 ,周元清2 ,张灼2(1.云南民族大学化学与生物技术学院 ,云南 昆明 650031;2.云南大学生物系 ,云南 昆明 650031)
摘要:目的:建立一种用高效液相色谱快速测定细菌发酵液中糖 、甘油和乙醇的方法。方法:酌情取细菌发酵液样品适量(1-9 mL)于 10 mL容量瓶中 ,加入 10 mg mL的甘露醇内标物 1.0 mL ,用水定容到刻度 ,取 2 mL用 4.5μm 滤膜过滤 , 进样 20 μL 分
析 ,糖 、甘油和乙醇以Waters Suger-Park-1 钙型阳离子交换柱为固定相 , 0.05 g L EDTA 钙钠水溶液为流动相分离 ,示差折光仪为
检测器检测测定。结果:一次进样可同时测定细菌发酵液样品中的糖 、甘油和乙醇;方法 RDS 在 0.52%～ 0.85%之间 , 标准回收
率在 99～ 102%之间 , 结果满意。结论:该方法简便 、快速 、结果可靠 ,为发酵法生产甘油过程中的质量监控提供了方法 。
关键词:高效液相色谱法;细菌发酵液;糖;甘油;乙醇
中图分类号:O657.32　　文献标识码:A　　文章编号:1004-311X(2004)04-0031-02
Determination of Sugars ,Glycerol and Ethanol in Ferment Product
with High Performance Liquid Chromatography
CHEN Yi-jian1 ,ZHOU Yuan-qing2 ,ZHAN Zhuo2
(1.Shool of Chemistry and Bio-Science , Yunnan University for Nationalities , Kunming 650031;
2.The Department of Biology , Yunnan University , Kunming 650031, P.R.China)
Abstract:A high performance liquid chromatography(HPLC)method for the determination of sugars , gly cerol and ethanol in ferment product was
studied.Sugars , glycerol and ethanol on a Waters Suger-Pak-I cations ion exchange column(6.5×300mm), with 0.05g L EDTA calcium diso-
第 14卷第 4 期:31
2004 年 8 月 　　　　　　　　　　　　　　　　
生　物　技　术
BIOTECHNOLOGY
　　　　　　　　　　　　　　　　　Vol.14 , No.4:31
Aug.2004