全 文 ：J Jining Med Univ , April 2011 , Vol.34 ,No.2
＊　济宁医学院 2008年青年基金课题
doi:10.3969/ j.issn.1000-9760.2011.02.004
山东肿足蕨总黄酮的提取工艺优化＊
高桂花　朱　军　张华丽
(济宁医学院药学院 ,山东 日照 276826)
　　摘　要　目的　研究山东肿足蕨总黄酮的最佳提取方法。方法　以山东肿足蕨总黄酮的含量为考察指标 ,
通过单因素试验和正交试验的方法确定山东肿足蕨总黄酮的最佳提取方法。结果　最佳提取工艺确定为用 20
倍量的70 %乙醇 , 超声提取 3 次 , 每次 60 min。结论　优选的工艺稳定可行 , 可作为山东肿足蕨中总黄酮的提
取工艺。
关键词　山东肿足蕨 , 总黄酮 ,提取工艺
中图分类号:R917　　文献标志码:A　　文章编号:1000-9760(2011)04-088-03
Process optimization for extraction of total flavonoids
from hypodematium sinense iwatuki.
GAO Gui-hua , Z HU Jun , ZH ANG Hua-li
(Pharmaceutical co llege , Jining Medical Unive rsity , Rizhao 276826 , China)
Abstract:Obj ective　To explore the extraction process of total flavones from Hypodematium sinense Iwatuki.
Methods　Using single factor experiment and orthogonal test the optimal extraction condition was determined from
total flavones of Hypodematium sinense Iwatuki.Results　The optimal condition of extraction process was as fol-
lowing:adding 20 folds of 70% aqueous ethanol and ultrasonic extracting for 60 min×3 times.Conclusion　The
extraction technics is feasible and can be used as extraction process of total flavones from Hypodematium sinense
Iwatuki.
Key words:Hypodematium sinense Iwatuki.;Total flavonoids;Extraction technics
　　山东肿足蕨(Hypodemat ium sinense Iw atuki)
为金星蕨科肿足蕨属植物 ,分布于山东地区 ,民间
用于治疗头晕 、恶心 、呕吐 ,为济宁医学院于 20世
纪 70年代发现的新药用植物。凌秀珍等对其药理
作用进行了初步探讨[ 1] ,并有报道称其对美尼尔氏
综合症有较好的治疗作用[ 2] , 并具有抗生育作
用[ 3] 。其化学成分主要有对苯二甲酸二甲酯[ 4] 、肿
足蕨碱[ 5] 等 ,并证明其中含有大量的黄酮类化合
物[ 6] 。现代医学对植物中广泛存在的黄酮化合物
的研究表明 ,黄酮类化合物具有明显的抗溃疡 、解
痉 、抗炎 、抗菌 、抗氧化 、抗衰老 、增强免疫力 、软化
血管 、降血糖及降血脂等生理活性作用[ 7-8] ;山东肿
足蕨中含有大量的黄酮类化合物 ,因此有必要对山
东肿足蕨的黄酮类化合物提取工艺进行研究。本
文采用单因素和正交试验的方法对山东肿足蕨药
材中的总黄酮的提取工艺进行优化 ,为以后深入研
究山东肿足蕨的总黄酮打下基础。
1　材料与仪器
药材:山东肿足蕨 ,产于山东嘉祥 ,经济宁医学
院中药学教研室王建安老师鉴定为山东肿足蕨
(Hypodemat ium sinense Iw atuki.)。
所用试剂:NaNO2 , A l(NO 3)3 , NaOH 等均
为分析纯;对照品芦丁(批号 F20020428)中国医药
上海化学试剂公司;乙醇为 95%医用酒精;蒸馏
水 。KQ-50超声仪(昆山市超声仪器有限公司),
TU1901 紫外-可见分光光度计(北京普析通用仪
器有限责任公司), TB-215D 型电子天平(北京赛
多利斯仪器系统有限公司)。
2　方法与结果
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济宁医学院学报 2011 年 4 月第 34 卷第 2 期
2.1　标准溶液的制备
精密称取芦丁对照品 14.9 mg ,置 50 ml量瓶
中 ,用 70%乙醇溶解 ,并稀释至刻度 ,摇匀 ,即得。
2.2　标准曲线的制备
精密量取上述标准溶液 0 、1.0 、 2.0 、 3.0 、
4.0和 5.0 ml ,分别置 25 ml量瓶中 ,各加 70%乙
醇至 5 m l;分别加 5%N aNO 2 溶液 1 m l ,摇匀 ,放
置 6 min;分别加 10%Al(NO 3)3 溶液 1 ml ,摇匀 ,
放置 6 min;然后分别加 4%NaOH 溶液 10 m l并
分别加 70%乙醇至刻度;摇匀 、静置 15 min ,以空
白试剂为参比 ,于 510 nm 测定吸收度 。以吸光度
为纵坐标 ,浓度为横坐标进行回归处理 ,得方程 A
=0.0133C-0.0108 (r =0.9995),芦丁在 11.92
～ 59.60μg/ml 范围内线性关系良好。
2.3　不同提取方法比较
取山东肿足蕨药材粉末 1.0 g ,共6份 ,精密称
定 ,置 100 m l三角瓶和圆底烧瓶中 ,各加入 10 ml
70%乙醇 ,分别超声 、冷浸 、70℃回流提取 1次 ,每
次 1 h 。过滤 ,滤液置 100 ml量瓶中 ,用 70%乙醇
稀释至刻度 。分别精密量取上述各溶液 2 ml ,置
25 m l量瓶中 ,按“2.2”项下测定吸光度 ,按标准曲
线法计算药材中总黄酮的含量 。超声 、冷浸和
70℃回流提取所得总黄酮含量的平均值分别为
17.23 mg/g 、12.42 mg/g 和 16.88 mg/g ,可知超
声与 70℃回流提取效果无明显差异 ,但均明显好
于冷浸提取 ,故采用超声方法提取。
2.4　不同提取时间比较
取山东肿足蕨药材粉末 1.0 g ,共9份 ,精密称
定 ,置 100 m l三角瓶中 ,各加入 70%乙醇 10 ml ,
分别超声 30 min , 60 m in和 90 min。过滤 ,合并滤
液 ,置 100 ml 量瓶中 , 用 70%乙醇稀释至刻度。
分别精密量取上述各溶液 2 ml ,置 25 ml量瓶中 ,
按“2.2”项下测定吸光度 ,按标准曲线法计算药材
中总黄酮的含量。结果超声提取 30 min 、60 min
和 90 min 所得总黄酮含量的均值分别为 17.17
mg/g 、23.32 mg/g 和 23.59 mg/g , 可知超声 60
min和 90 min相差不大 ,考虑到节约时间 ,故选择
超声 60 min。
2.5　正交试验
因素及水平的选择:选用 L9(34)正交表 ,因素
水平的选择见表 1。
取山东肿足蕨药材粉末 1.0 g ,精密称定 ,按正
交表设计方案进行实验 ,提取液均定容于 100 ml
量瓶中 。取样品溶液 2 ml ,按“2.2”项下测定吸光
度 ,按标准曲线法计算药材中总黄酮的含量 ,实验
结果及直观分析见表 2 ,方差分析结果见表 3。
表 1 　正交试验因素水平表
水平 因素
A(乙醇浓度) B(料液比) C(提取次数) D
1 70% 1:30 1
2 90% 1:20 3
3 50% 1:10 2
表 2 　正交试验结果分析
因素 A(乙醇浓度)
B
(料液比)
C
(提取次数) D
总黄酮含量
(mg/ g)
1 1 1 1 1 26.97
2 1 2 2 2 34.82
3 1 3 3 3 29.63
4 2 1 3 3 21.37
5 2 2 1 1 19.91
6 2 3 2 2 18.28
7 3 1 2 2 29.18
8 3 2 3 3 22.97
9 3 3 1 1 21.29
均值 1 30.473 25.840 22.740 22.723
均值 2 19.853 25.900 25.827 27.427
均值 3 24.481 23.067 26.240 24.657
极差 10.620 2.833 3.500 4.704
表 3 　正交试验方差分析结果
指标 方差来源 F 值 P
总黄酮含量(mg/ g)
A
B
C
5.073
0.469
0.655
>0.05
>0.05
>0.05
　　F 0.05(2 , 2)=19.00
由以上数据可知 ,以山东肿足蕨总黄酮含量为
指标 ,三因素 A(乙醇浓度)、B(料液比)和 C(提取
次数)的影响大小依次为 A >C >B ,最优条件为
A 1 B2C2 ,即 20倍量的 70%乙醇 ,提取 3次 。
2.6　结果验证实验
取山东肿足蕨药材粉末1.0 g ,共 5份 ,精密称
定 ,按最佳条件提取制备样品 ,按“2.2”项下测定吸
光度 ,按标准曲线法计算药材中总黄酮的含量 ,其
平均含量为 34.98 mg/g ,RSD为 0.9%。
3　讨论
对于山东肿足蕨总黄酮的提 (下转第 101页)
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济宁医学院学报 2011 年 4 月第 34 卷第 2 期
殖功能显著降低(P<0.01),说明红细胞免疫功能
状态可能直接或间接影响到淋巴细胞的功能 ,这与
文献报道一致[ 2] 。有研究[ 7] 认为红细胞对淋巴细
胞功能的调控可能是通过分泌多种细胞因子实现
的 ,其形式之一就是红细胞分泌的细胞因子与淋巴
细胞表面的相应受体结合 ,从而影响淋巴细胞的效
能 。除淋巴细胞外 , Telen等[ 8] 发现红细胞免疫功
能受损 ,可能会影响整个血液中特异性和非特异性
免疫反应 ,所以调整和维持红细胞的正常免疫功能
状态对 PV患者内环境改善可能具有积极意义。
本研究显示 , PV 患者血清 CIC 含量明显高于
正常人(P<0.01),进一步分析与红细胞免疫功能
各指标之间的相关关系 ,血清 CIC 水平与 RBC-
C3bRR呈正相关趋势 ,但无统计学意义;与 RBC-
ICRR呈正相关关系 ,说明血清 CIC的浓度是影响
EIF 的重要因素 ,免疫复合物水平持续增高 ,超过
红细胞处理能力 ,就会导致 EIF 降低。CIC 水平与
红细胞免疫调节因子具有相关性 ,与 RFIR 呈显著
正相关 ,与 RRER呈负相关 ,提示 CIC可能能够促
进免疫抑制因子的产生 ,降低免疫促进因子水平 ,
间接降低 EIF ,但目前其具体作用机制尚不明确。
另外 ,PV患者血清 CIC 浓度与淋巴细胞增殖功能
呈负相关趋势 ,提示可能 CIC 在一定程度上影响
淋巴细胞的增殖功能 ,但由于影响淋巴细胞增殖功
能的因素较多 , CIC 水平只是诸因素中的一个方
面 ,故这种相关关系不是十分明显。
总之 , PV 患者 EIF 低下 ,且与患者血清 CIC
水平有一定相关性 ,降低患者血清 CIC 浓度 ,改善
红细胞免疫功能 ,可能有助于整个免疫系统的功能
恢复和病情改善 。
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(收稿日期　2011-03-10)
(上接第 89页)取 ,超声提取法和加热回流提取法
并没有显著的差异 ,但考虑到与加热回流提取法比
较 ,超声提取法具有选择性高。快速高效 、溶剂消
耗少 、活性成分提取率高和适用于热不稳定物质的
特点 ,因而在实验中选择了超声提取法。
本文通过单因素试验和正交试验对提取方法 、
提取时间 、乙醇浓度 、料液比和提取次数进行了全
面综合的考察 。虽然正交试验结果表明试验中的
3个因素对山东肿足蕨总黄酮的提取没有显著性
影响 ,但通过试验得到了最佳的提取条件。并且通
过试验可看出乙醇的浓度对试验结果的影响最大 ,
综合文献[ 9-10] ,表明 70%的乙醇对于黄酮类化合物
的提取效率较高 ,是常用且合适的浓度。
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