全 文 ：Vol
.琳 ,No . IO,幼 3
禽节营食知咖那 菌效 果研 究
(华南理工大 学食品与 生物 工程学院 , 广 州 5 10 6 41 ) 战 宇 宁正样
研究据讨与
摘 要 : 对溪黄草水提取物 和 乙醇提取物 的 抑菌特性进 行 了研
究 , 分别 .MJ 定 了溪黄草提取物对供试细 菌 、 酵母菌和霉菌
的抑 菌圈直径及其 最低抑菌浓度和杀 菌浓度 , 并选择 自
然条件 下 变质的牛奶沉合微生 物菌群进行 实际抑 菌效果
实验 。 实验结 果表 明 ,溪黄草提取物 对供试非 茅袍 细 菌具
有明显的抑制作用 , 时供试酵母菌和霉菌也具有 一 定的
抑制效 果 , 且醇提 物的抑 菌效果要优 于 水提物 〕 低浓度溪
黄草水提物对牛奶混合微生物 菌群的抑 苗效 果要 优 于 高
浓度溪 黄草水提物
关健词 : 溪 黄草 , 乙 醇提取物 , 水提取物 ,抑菌效果
中图分类号 : ST ZO2 3 文献标识码 : A
文 章 编 号 : 10 0 2 一0 3 0 6 ( 2 0 0 3 ) 10 一 0() 6 l一 0 3
溪黄草为香茶菜属 R ha do 、 ia ( lB )H as sk . 植物 , 因
其喜生于 山 谷明溪旁 , 新鲜叶 片揉碎产生黄色汁液
收稿日期 : 2 0 0 3一 0 2 一 1 1
作者简介 : 战宇 ( 197 4 一 ) ,女 , 在读博士研 究生 , 研 究方 向 : 食品 化 学
基金项目 : 广 东省 自然科 学基金资助 项 目 ,项 目编 号 : 20( )2 0 8斗之
而得名 。 我 国 民间主要将该草煎服 , 治疗急性肝炎 、
胆囊炎 ,跌打癖肿等症 , 具有悠久 的历史 。 对溪黄草
化学成分的研究表明 ,该植物含有多种菇类和黄酮类
物质 ! ’ ]。 曾有文献报导 ,从溪黄草中分离得到的两种二
菇化合物对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用 12 , 但
对其它微生物的作用一直无相关资料 。 本 文报导 了
溪黄草提取物对常见食品微生物生长 的影响 〕
1 材料与方法
1
.
1 实验材料
粉碎 的 干溪黄草 购于广 州 市清平 中 药材市
场 ; 枯草芽饱杆菌 、 金黄色葡萄球菌 、 大肠杆菌 、 沙 门
氏菌 、产气杆菌 、 酿酒酵母 、粘红酵母 、 桔青霉 、 黄曲
霉 、 黑曲霉 、 毛霉 、 根霉 以上菌种均 由华南理上大
学食品与 生物工程学院微生物实验室提供 ; 采用 肉
汤培养基 3[] 和 营养琼脂培养基 3I] 培养细菌 、 麦 芽汁琼
脂培养基 13] 培养真菌 以上培养 基均在 1 12 ℃灭菌
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DOI : 10. 13386 /j . i ssn1002 -0306. 2003. 10. 012
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1
.
2 实验方法
1
.
2
.
1 抑菌物质的提取
1
.
2
.
1
.
1 水提取物 将 干溪黄草茎叶用蒸馏水煮沸
三次 , 提取液合并过滤除渣后真空浓缩干燥 。
1
.
2
.
1
.
2 乙 醇提取物 将干溪黄草茎 叶用 9 5 % 乙醇
反复浸提 ,提取液合并过滤除渣后真空浓缩干燥 。
1
.
.2 2 供试菌株的准备及含菌平板的制备 无菌操
作条件下 , 将供试菌种移接入相对应 的试管斜面培
养基上 , 细菌置于 3 5 一 3 7℃恒温培养箱 内培 养 18 一
2 4 h
, 酵母菌 、 霉菌于 2 8℃恒温培养箱 内培养 4 4 一
4 h8
,然后置于 0 一 4℃下冷藏备用 。 分别用接种环挑取
少许 菌体置于装有 g m L 无菌生理盐水的试管 内 , 振
荡均匀 , 制成菌悬液 。 酵母菌 、 霉菌用血球计数板计
数 ,细菌用稀释倒平板法计数 。 调整菌悬液浓度 , 使
其含饱子或菌体量为 I J 一 1 0 7 个 / m L 。 分别用无菌移
液管向相应 的 固体平板上加 0 . l m L 菌悬液 , 并用无
菌三角刮铲涂布均匀 。
1
.
.2 3 抑菌圈 直径的 测定 采用滤纸圆片法 。 用打
孔器将新华 l 号定性滤纸打成 6~ 的小 圆片
, 置于
小培养皿中 , 1 6 0℃干热灭菌 .o s h 备用 ; 水提取物用
无菌蒸馏水溶解 , 乙醇提取物用 9 5 %的 乙醇溶解 ,分
别配制成 1% 的溶液 ; 无菌操作下将灭菌滤纸片分别
浸于 1%水提取物溶液 、 l% 乙 醇提取物溶液 、无菌蒸
馏水 、 9 5% 的 乙醇中 ; 将浸泡好的滤纸片无菌操作贴
在制备好的含菌平板上 。 每皿均匀分贴同种药液滤
纸片 3 片 , 相应溶剂空 白对照滤纸片 2 片 , 重复 3
次 ;贴好滤纸片的培养基置于恒温培养箱中培养 ,细
菌于 37 ℃培养 18 一 2 4 h ,酵母菌 、 霉菌于 28 ℃培养 4 4 一
4 8 h 后 ,取出观察 , 测定抑菌圈直径 。
1
.
.2 4 最低抑菌浓度的测定
1
.
.2 4
.
1 细菌 将提取物与肉汤培养基按不同 比 例
混合 , 得到含不同浓度提取物的系列培养基 。 每一系
列培养基接种一种菌悬液 o5 卜 L (含菌量为 I J 一 I J
个 / m L ) , 每浓度重复三管 ,摇匀后置于 3 7℃恒温培养
箱 中培养 18 一 2 4 h , 观察实验结果 。 以能抑制细菌生长
的最低添加量为该提取物的最低抑菌浓度 ( M IC ) 。
因含提取物的培养液 肉眼不易辨明菌体的生长
情况 , 可从各管 中各取一环转接于固 体平板 上 , 经
3 7℃培养后观察有无菌落生长加以判断 。
1
.
.2 .4 2 霉菌 将提取物与真菌培养基作不 同 比例
的混合 ,制成不同浓度的倾注平板 。 然后再接种实验
菌 ,置于适宜温度培养 , 观察生长情况 。 以能抑制霉
菌生长的最低添加量为该提取物的最低抑菌浓度 。
1
.
.2 5 最低杀菌浓度的测定 将提取物的浓度高 于
M CI (包括 M CI ) 的各管继续培养 2 4 h , 观察菌体生长
情况 。 以 仍无菌落生长的添加量为该提取物的最低
杀菌浓度 ( M B C ) 。
1
.
.2 6 对变质牛奶混合微生物菌群生长的影 响 将
变质鲜牛奶中 的混合微生物菌群接种至肉汤培养基
中 ,使其 A 、 h l ,净增值为 .0 05 左右 。 加人一定量的溪
黄草水提取物后 , 放入 3 7℃水浴恒温振荡器 中进行
培养 , 以保存于 4℃冰箱中不含提取物 的无菌培养基
作为 空白对照 , 定时测定 A黝l m 值 l4] 。
2 结果与分析
2
.
1 溪黄草提取物的抑菌效果
由表 1 的 实验结果可知 , 溪黄草提取物对各种
供试细菌 , 无论是球菌 、 杆菌 ,还是革兰 氏阳性菌 、 革
兰氏 阴性菌均具有明显的抑制效果 ,对酵母菌 、 霉菌
也有一定的抑制作用 , 其抗菌谱之广在植物界中十
分罕见 。
表 1 溪黄草提取物对供试菌种的抑菌圈直径 (m m )
(X 士S D
, n = 9 )
供试菌种 1%水提取物
.7 8土 0 . 9
8 5土 0 . 5
8
.
2土 0 . 6
8
.
3士 0 . 5
8 2土 0 .7
6 9土 0 . 6
6 3士 0 . 2
6
.
7士 0 . 4
7 5士 0 . 8
6 6土 0 . 3
6
一
8土 0 . 2
6
t
9士 0 户5
l% 乙醇
提取物 无菌水 95 % 乙醇
枯草芽抱杆菌
金黄色葡萄球菌
沙 门氏菌
大肠杆菌
产气杆菌
酿酒酵母
粘红酵母
青 霉黑曲霉
黄曲霉
毛 霉
根 霉
10
.
3士 0 . 5
12
.
9士 0 . 8
12
.
6士 0 . 9
10
.
3士 0 . 9
10
.
8土 0 .5
8 .6扣 .3
9
.
1印 .3
7
.
7功名
8
.
,士 0. 7
9
.肚 0 . 9
.8 3土 0 . 4
.8 9出 0 . 7
研穷与-讨
注 : “ 一 ”表示无抑菌圈 。
溪黄草水提取物的抑菌圈直径明显小于 乙醇提
取物 , 说明溪黄草水提物对微生物的抑制作用小于
醇提物 。 此外 ,无菌水和 9 5 % 乙醇对供试菌种不具有
抑制作用 。
.2 2 溪黄草提取物的最低抑菌浓度和杀菌浓度
为 了定量确定溪黄草提取物的抑菌效果 , 实验
进一步测定了提取物对供试细菌和真菌的 M IC 值和
M B C 值 ,实验结果见表 2 和表 3 。
表 2 溪黄草提取物对细菌的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度 (% )
供试菌种 水提取物 乙醇提取物
M IC
0
.
25
0
.
125
0
.
125
0
.
125
0
.
25
M B C
0
.
50
M IC
枯草芽饱杆菌
金黄色葡萄球菌
沙门氏菌
大肠杆菌
产气杆菌
0
.
25
0
.
2 5
0
.
25
0 {5 0
0
.
12 5
0
.
0 625
0
.肠 25
0
刁
06 25
.0 06 25
M B C
0
.
25
0
.
062 5
0
.
125
0
.
125
0
.
125
溪黄草醇提物对供试细菌的 M IC 值和 M B C 值
仅为水提取物 M IC 值和 M B C 值的 1/ 4 一 12/ , 说明溪
黄草所含抑菌活性物质在 9 5 % 乙醇中 的溶解度要高
于在水中 的溶解度 。 溪黄草提取物对金黄色葡萄球
62 口. . 曰目哪
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的适应 和变异能 力会逐渐 降低为 获得溪 黄草提取 【 l ]肖树雄黄 诺嘉林伟 忠等澳黄 草研究进 展[J]中草 药{ 卜物对实 际食品中 微生物 长的抑制 效果 以便为生 20 31(2):950 951 褚
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