全 文 ：靳松，陈泽斌，李育川，等．石蝉草内生细菌多样性及其特征 ［Ｊ］．福建农业学报，２０１６，３１ （１０）：１１０４－１１０８．
ＪＩＮ　Ｓ，ＣＨＥＮ　Ｚ－Ｂ，ＬＩ　Ｙ－Ｃ，ｅｔ　ａｌ．Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ａｎｄ　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉａ　Ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｐｅｐｅｒｏｍｉａ　ｄｉｎｄｙｇｕｌｅｎｓｉｓ　Ｍｉｑ ［Ｊ］．
Ｆｕｊｉａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１６，３１ （１０）：１１０４－１１０８．
石蝉草内生细菌多样性及其特征
靳　松１，２，陈泽斌１＊，李育川１，夏体渊１，任　禛１，莫丽玲１，华金珠１
（１．昆明学院农学院，云南　昆明　６５０２１４；２．云南省高校特色生物资源开发与利用重点实验室，云南　昆明　６５０２１４）
收稿日期：２０１６－０５－２１初稿；２０１６－０７－０３修改稿
作者简介：靳松 （１９８４－），男，硕士，研究方向：植物内生微生物 （Ｅ－ｍａｉｌ：ｉｂｍｊｓ＠１６３．ｃｏｍ）
＊通讯作者：陈泽斌 （１９８５－），男，博士，副教授，研究方向：植物内生微生物（Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｂｃｈｅｎｋｍｕ＠１６３．ｃｏｍ）
基金项目：云南省教育厅科学研究基金项目 （２０１５Ｙ３９３）；昆明学院科学研究项目 （ＸＪＺＤ１６０５）；昆明学院大学生科研项目
（ＸＪＤ１６０８２）；昆明学院人才引进项目 （ＹＪＬ１４００５）
摘　要：采用菌落表征性状统计和１６ＳｒＲＮＡ基因序列分析法，对石蝉草根、茎、叶内生细菌的数量分布、群落组
成和遗传多样性进行初步研究。从各组织器官中分离出内生细菌３８３株，通过菌落表征性状，以类平均连锁聚类
法进行聚类分析，在欧氏距离为０的水平上可聚为１９个亚群。多样性分析结果表明，１９个亚群隶属于８属１３种；
其数量表现为叶＞根＞茎，多样性表现为茎＞叶＞根，其中鞘氨醇单胞菌属Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ和寡养单胞菌属
Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ为石蝉草内生细菌的优势属。
关键词：石蝉草；内生细菌；多样性；１６ＳｒＲＮＡ
中图分类号：Ｑ　９３９．９６ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８－０３８４ （２０１６）１０－１１０４－０５
Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ａｎｄ　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉａ　Ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍＰｅｐｅｒｏｍｉａ　ｄｉｎｄｙｇｕｌｅｎｓｉｓ　Ｍｉｑ
ＪＩＮ　Ｓｏｎｇ１，２，ＣＨＥＮ　Ｚｅ－ｂｉｎ１＊，ＬＩ　Ｙｕ－ｃｈｕａｎ１，ＸＩＡ　Ｔｉ－ｙｕａｎ１，ＲＥＮ　Ｚｈｅｎ１，ＭＯ　Ｌｉ－ｌｉｎｇ１，ＨＵＡ　Ｊｉｎ－ｚｈｕ１
（１．Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｋｕｎｍｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ　６５０２１４，Ｃｈｉｎａ；２．Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｓｐｅｃｉａｌ
Ｂｉｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓ　ｉｎ　Ｙｕｎｎａｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｋｕｎｍｉｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ　６５０２１４，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏｌｏｎｙ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ａｎｄ　１６ＳｒＲＮＡ　ｇｅｎｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｗｅｒｅ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｔｏ　ｏｂｔａｉｎ　ｔｈｅ
ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ，ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｏｏｔｓ，
ｓｔｅｍｓ　ａｎｄ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｐｅｐｅｒｏｍｉａ　ｄｉｎｄｙｇｕｌｅｎｓｉｓ　Ｍｉｑ．Ａ　ｔｏｔａｌ　ｏｆ　３８３ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ａｎｄ　ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇ
ｔｏ　ｔｈｅｉｒ　ｃｏｌｏｎｙ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ．Ａｆｔｅｒ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｌｉｎｋａｇｅ　ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ，ｔｈｅ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗｅｒｅ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　１９ｓｕｂｇｒｏｕｐｓ　ａｔ　ｔｈｅ
Ｅｕｃｌｉｄｅａｎ　ｄｉｓｔａｎｃｅ　ｏｆ　０ｌｅｖｅｌ．Ｔｈｅ　ｓｕｂｇｒｏｕｐｓ　ｗｅｒｅ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｌｙ　ｃｌａｓｓｉｆｉｅｄ　ｉｎｔｏ　８ｇｅｎｅｒａ　ａｎｄ　１３ｓｐｅｃｉｅｓ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅｉｒ
ｐａｒｔｉａｌ　１６ＳｒＤＮＡ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．Ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｗｅｒｅ　ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｏｆ　ｌｅａｖｅｓ＞ｒｏｏｔｓ＞ｓｔｅｍｓ；
ａｎｄ，ｔｈｅ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂａｃｔｅｒｉａ，ｓｔｅｍｓ＞ｌｅａｖｅｓ＞ｒｏｏｔｓ．Ｔｈｅ　ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｉｎ　Ｐ．ｄｉｎｄｙｇｕｌｅｎｓｉｓ　Ｍｉｑ
ｗｅｒｅ　ｆｏｕｎｄ　ｔｏ　ｂｅｌｏｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｒａ　ｏｆ　Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ　ａｎｄ　Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｐｅｐｅｒｏｍｉａ　ｄｉｎｄｙｇｕｌｅｎｓｉｓ　Ｍｉｑ；ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａ；ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ；１６ＳｒＲＮＡ
　　植物内生菌是指定殖于健康植物组织内部，而
又不引发宿主植物表现出明显感染症状的一类微生
物［１］。在与宿主植物协同共生的过程中，部分植物
内生菌具有固氮、解磷、分泌生长素等能力，可促
进植物生长［２］；部分植物内生菌能有效抑制植物病
原菌活性，具有生防作用［３］；植物内生菌可产生与
宿主植物相同或相似的代谢产物，包括萜类、芳香
类等化合物，这些物质具有多种生物学活性，如抗
菌、降糖等［４］。
在农业和医药领域，药用植物内生菌资源的开
发利用具有很大的应用潜力。１９９３年Ｓｔｉｅｒｌｅ等首
次从红豆杉韧皮部分离得到的内生真菌紫杉霉
Ｔａｘｏｍｙｃｅｓ　ａｎｒｅａｎａｅ可以产生紫杉醇或其他紫杉
烷类化合物，该类物质对多种恶性肿瘤具有突出疗
效，从此掀起了开发内生菌及活性物质的热潮［１］。
周佳宇等［２］从茅苍术叶片分离的内生细菌，３４株
具有溶解磷的作用，４３株能够将色氨酸转化为生
长素。王娜［５］研究发现，乌头内生细菌群落结构与
宿主主要有效成分生物碱有密切相关性。梁子宁
等［６］从药用植物鸦胆子中分离得到１株抑菌谱广、
福建农业学报３１（１０）：１１０４～１１０８，２０１６ ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｆｊｎｙｘｂ．ｃｎ
Ｆｕｊｉａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　 ｄｏｉ：１０．１９３０３／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８－０３８４．２０１６．１０．０１９
活性较高的内生细菌，为新型生物杀菌剂的开发利
用提供了理论依据。总之，药用植物内生菌的研究
将会在人类健康、环境保护和农业生产等多个领域
发挥巨大潜力和价值。
石蝉草Ｐｅｐｅｒｏｍｉａ　ｄｉｎｄｙｇｕｌｅｎｓｉｓ　Ｍｉｑ．系胡
椒科草胡椒属植物，在我国南方各省区有较多分
布。《中华本草》、《云南中草药选》等对其均有记
载，其味辛、性凉，具有清热解毒、化瘀散结、利
水消肿的功效，对肺癌、肝癌、胃癌等有治疗作
用［７］。目前，石蝉草的研究多集中于化学成分、药
理作用等方面，而忽视了植物内生菌在中药材形成
中所发挥的作用。朱文君等［８］对石蝉草乙醇提取物
进行了分离和鉴定，得到聚酮类化合物１１个，其
中２个为新的化合物；陈立［７］研究发现石蝉草的乙
醇提取物中氯仿部位对肿瘤细胞株抑制作用最强，
分离得到的３个断联木脂素对肿瘤细胞株有较强的
抑制作用。尚未见石蝉草内生细菌的相关研究和报
道。本研究采用稀释涂布平板法，对石蝉草根、
茎、叶内生细菌进行分离和鉴定，旨在了解石蝉草
内生细菌的数量分布、群落组成和遗传多样性。
１　材料与方法
１．１　材料的采集
石蝉草于２０１５年１０月上旬采自云南省文山州
马关县，根、茎、叶分别取自５株生长健壮的石蝉草植
株。不同部位样品从植株分离后立即装入无菌采样
袋中，低温保鲜，于４８ｈ内进行内生细菌的分离。
１．２　培养基
参照方中达［９］方法配制培养基，其中内生细菌分
离和培养采用ＮＡ培养基，液体培养采用ＬＢ培养基。
１．３　内生细菌的分离
将材料用自来水洗净，移入超净工作台内，无
菌滤纸吸干样品表面水分，分别称取石蝉草根、
茎、叶各１ｇ，用７５％酒精浸没１ｍｉｎ，转入２％次
氯酸钠５ｍｉｎ，无菌水漂洗５次，并不断摇动。取
最后１次漂洗无菌水涂布于ＮＡ平板作为对照，以
此检验表面消毒是否彻底。将已消毒材料置于无菌
研钵中加２ｍＬ无菌水研磨至匀浆，梯度稀释１０～
１０３倍，各取１００μＬ涂布于 ＮＡ平板，重复３次，
在２８℃黑暗环境中培养２～３ｄ。
１．４　内生细菌的菌落调查、纯化和保存
选择菌落密度 （３０～３００个·皿－１）适宜的
ＮＡ平板统计菌落总数，计算各部位样品每克鲜重
所含活菌数，用ｃｆｕ·ｇ－１　ＦＷ 表示。参照陈泽斌
等［１０］方法对菌落形态进行初步归类，得出表型特
征数值分类聚类图。根据聚类图挑选各亚群单菌落
划线纯化，纯菌落转接入ＮＡ试管斜面保存。
１．５　内生细菌的１６Ｓ　ｒＤＮＡ序列分析
将纯化菌株接入 ＬＢ 液体培养基中，恒温
２８℃、１００ｒ·ｍｉｎ－１振荡培养２ｄ，８　０００ｒ·ｍｉｎ－１
离心取沉淀物，用细菌基因组 ＤＮＡ 提取试剂盒
（ＴＡＫＡＲＡ）提取菌株总 ＤＮＡ。采用通用引物
Ｆ２７／Ｒ１４９２［１１］进行１６ＳｒＲＮＡ基因序列扩增。扩增
产物送上海桑尼生物科技有限公司进行序列测定，
将测得的１６ＳｒＤＮＡ 全序列在 ＧｅｎＢａｎｋ中进行
ＢＬＡＳＴ同源性搜索，获得已知分类地位同源性相
近的菌株序列，参照Ｆｅｌｓｅｎｓｔｅｉｎ　Ｊ［１２］方法，对各菌
株的系统发育地位进行分析。
图１　内生细菌表征性状聚类分析树状图
Ｆｉｇ．１　 Ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ
ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
注：Ｃｌｕ为表观群；Ｓｕｂ为亚群；Ｎｏ．为内生细菌菌株编号。
２　结果与分析
２．１　内生细菌的分离
石蝉草各部位表面消毒后最后１次漂洗无菌水
涂布于ＮＡ平板，在２８℃环境中培养３ｄ未见菌落
生长，说明此方法消毒彻底。菌落计数结果表明，
各组织分离出的内生细菌数量差异明显，其中叶部
的内生细菌数量最多，为 （２．１６±０．１１）×１０４
ｃｆｕ·ｇ－１ＦＷ，其次为根部，平均内生细菌数量为
（６．３６±１．２９）×１０３ｃｆｕ·ｇ－１　ＦＷ，茎部内生细菌数
量最少，仅为（３．９３±０．２４）×１０３ｃｆｕ·ｇ－１ＦＷ。
２．２　内生细菌表征性状的多样性分析
由图１可以看出，从石蝉草各组织分离出的
３８３株内生细菌具有丰富的多样性。在欧氏距离为
２．７７时，可聚分为５个表观群：ＳＡ、ＳＢ、ＳＣ、
５０１１第１０期 靳　松等：石蝉草内生细菌多样性及其特征
ＳＤ、ＳＥ，分别在分离总数中所占比例依次为
８７．２１％、６．０１％、０．２６％、３．９２％、２．６１％ （表
１），其中表观群ＳＡ 菌株最多；在欧氏距离为０
时，可聚分为１９个亚群 （图１、表１）。
表１　亚群菌落形态特征
Ｔａｂｌｅ　１　Ｃｏｌｏｎｉａｌ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｓｕｂ－ｃｌｕｓｔｅｒｓ
亚群 菌株 菌落形态
分离株数
根 茎 叶
所占比
例／％
ＳＡ－１ Ｙ１ 点状、湿、黄色、有光泽、表面凸起、边缘整齐、不透明 ２　 ２０　 ２４４　 ６９．４５
ＳＡ－２ Ｙ３ 圆形、直径２～３ｍｍ、湿、乳白、有光泽、表面凸起、边缘整齐、半透明 ０　 ６　 ４　 ２．６１
ＳＡ－３ Ｇ４ 圆形、直径２～３ｍｍ、湿、乳白、有光泽、表面凸起、边缘整齐、不透明 ３　 ０　 ０　 ０．７８
ＳＡ－４ Ｊ８ 圆形、直径１～２ｍｍ、湿、白色、有光泽、表面凸起、边缘整齐、不透明 ０　 ４　 ０　 １．０４
ＳＡ－５ Ｇ７ 圆形、直径１～２ｍｍ、湿、乳黄、有光泽、表面凸起、边缘整齐、透明 ５１　 ０　 ０　 １３．３２
ＳＢ－１ Ｙ４ 形状不规则、长７～８ｍｍ、黏稠、乳白、无光泽、中间凸起、边缘不整齐、不透明 ０　 ０　 ３　 ０．７８
ＳＢ－２ Ｊ５ 形状不规则、长６～８ｍｍ、湿、乳白、无光泽、中间凸起、边缘不整齐、不透明 ０　 ７　 ０　 １．８３
ＳＢ－３ Ｇ３ 形状不规则、长７～８ｍｍ、黏稠、白色、无光泽、中间凸起、边缘不整齐、不透明 １０　 ０　 ０　 ２．６１
ＳＢ－４ Ｙ５ 形状不规则、长６～７ｍｍ、干、白色、无光泽、表面凸起褶皱、边缘不整齐、不透明 ０　 ０　 １　 ０．２６
ＳＢ－５ Ｊ７ 形状不规则、长５～７ｍｍ、干、乳白、无光泽、表面凸起褶皱、边缘不整齐、不透明 ０　 １　 ０　 ０．２６
ＳＢ－６ Ｇ６ 形状不规则、长５～６ｍｍ、干、乳白、无光泽、中间凸起、边缘不整齐、不透明 １　 ０　 ０　 ０．２６
ＳＣ－１ Ｙ８ 形状不规则、长３～４ｍｍ、湿、乳白、有光泽、表面凸起褶皱、边缘不整齐、半透明 ０　 ０　 １　 ０．２６
ＳＤ－１ Ｙ６ 圆形、直径４～５ｍｍ、黏稠、乳白、无光泽、表面内凹、边缘整齐、不透明 ０　 ０　 １　 ０．２６
ＳＤ－２ Ｙ９ 圆形、直径４～５ｍｍ、湿、乳白、有光泽、中间凸起、边缘整齐、半透明 ０　 ０　 ４　 １．０４
ＳＤ－３ Ｊ４ 圆形、直径５～６ｍｍ、黏稠、乳白、有光泽、中间凸起、边缘整齐、半透明 ０　 ６　 ０　 １．５７
ＳＤ－４ Ｇ５ 圆形、直径４～５ｍｍ、湿、白色、有光泽、中间凸起、边缘整齐、不透明 １　 ０　 ０　 ０．２６
ＳＤ－５ Ｊ９ 圆形、直径３～４ｍｍ、湿、乳白、有光泽、表面内凹、边缘整齐、半透明 ０　 １　 ０　 ０．２６
ＳＤ－６ Ｙ７ 圆形、直径５～６ｍｍ、干、乳白、无光泽、表面扁皱、边缘整齐、半透明 ０　 １　 １　 ０．５２
ＳＥ－１ Ｇ１ 水渍状、长２５ｍｍ、湿、乳白、无光泽、表面凹凸不平、边缘不整齐、半透明 ８　 １　 １　 ２．６１
２．３　内生细菌１６ＳｒＤＮＡ序列分析结果
根据表征性状数值分类聚类图结果，选择１９
株代表菌株的１６ＳｒＤＮＡ进行测序，获得基因序列
提交ＧｅｎＢａｎｋ数据库，收录号分别为 ＫＵ１６０３６９
－ＫＵ１６０３８７。通过ＢＬＡＳＴ程序进行相似性比对，
与已知分类地位菌株１６ＳｒＤＮＡ序列相似性均大于
９７％，大部分相似性达９９％以上，１９株代表菌株
分属于８属１３种，并构建了系统发育树 （图２）。
其中石蝉草根、茎、叶内生细菌种类分别为６种、
９ 种、８ 种 （表 ２）。 寡 养 单 胞 菌 属
Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ、绿芽孢杆菌属Ｖｉｒｉｄｉｂａｃｉｌｌｕｓ
为根部特有；类芽孢杆菌属Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ、葡萄
球菌属 Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ为茎部特有；根瘤菌属
Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ 为 茎、 叶 部 共 有； 芽 孢 杆 菌 属
Ｂａｃｉｌｌｕｓ、赖氨酸芽孢杆菌属Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ、鞘氨
醇单胞菌Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ为根、茎、叶部共有。
各类群在石蝉草所分离内生细菌中所占比例最
高且大于１０％的２种类群为：Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｉａ
所占比例６９．４５％，Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ　ｒｈｉｚｏｐｈｉｌａ
所占比例１３．３２％ （表２）。由此推断，石蝉草内生
细 菌 的 优 势 菌 群 为 Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｉａ 和
Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ　ｒｈｉｚｏｐｈｉｌａ。
表２　石蝉草内生细菌的种类组成
Ｔａｂｌｅ　２　Ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｐ．
ｄｉｎｄｙｇｕｌｅｎｓｉｓ　Ｍｉｑ
菌株 相近的属、种 登录号
序列相
似性／％
Ｇ６Ｊ７Ｙ５　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌｉｓ　 ＫＴ９５７３０６．１　 １００
Ｙ８　 Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ　 ＫＭ２８９１３０．１　 １００
Ｙ７　 Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｌｔｉｔｕｄｉｎｉｓ　 ＫＴ７５８４４８．１　 １００
Ｙ６　 Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｕｍｉｌｕｓ　 ＫＴ００３２７１．１　 １００
Ｊ５　 Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｎｔｈｒａｃｉｓ　 ＡＢ１９０２１７．１　 ９８
Ｇ１Ｇ３Ｙ４　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃｅｒｅｕｓ　 ＫＣ６９２２０１．１　９９～１００
Ｊ８　 Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ　 ＪＸ２９３２９４．１　 ９７
Ｇ４　 Ｖｉｒｉｄｉｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｒｅｎｏｓｉ　 ＪＦ８９９２９８．１　 １００
Ｇ５Ｊ４Ｙ９　Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ　ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ　 ＫＰ３３４９８８．１　 ９９
Ｊ９　 Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｐ　 ＫＦ０１１６１２．１　 ９９
Ｇ７　 Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ　ｒｈｉｚｏｐｈｉｌａ　ＫＭ０９６６０２．１　 １００
Ｙ３　 Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍｓｐ　 ＫＲ０６７５９８．１　 １００
Ｙ１　 Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｉａ　 ＫＪ５７２３９９．１　 ９９
６０１１ 福建农业学报 第３１卷
图２　内生细菌１６ＳｒＤＮＡ序列构建的系统发育树
Ｆｉｇ．２　Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｔｒｅｅ　ｏｆ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ
１６Ｓ　ｒ　ＤＮＡ　ｇｅｎｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
３　讨论与结论
从石蝉草根、茎、叶中共分离出内生细菌３８３
株，通过表型特征数值分类，在欧氏距离为０时，
聚类为１９个亚群。运用１６ＳｒＲＮＡ基因序列分析
法对１９个亚群代表菌株多样性进行分析，结果表
明１９株内生细菌分属于８个属１３个种，内生细菌
多样性较丰富，３个部位材料中内生细菌的种类和
数量均有差异。从两种方法的分析结果看，聚类情
况存在一定差异，表明某些菌株具有不同表型特
征，或特征甄别受主观因素影响较大。
石蝉草内生细菌的优势菌群为鞘氨醇单胞菌
Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｉａ 和嗜根寡养单胞菌Ｓｔｅｎｏｔｒｏ－
ｐｈｏｍｏｎａｓ　ｒｈｉｚｏｐｈｉｌａ，其中Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｉａ菌在
所分离菌株中所占比例最高，达到６９．４５％。据报
道，鞘氨醇单胞菌具有固氮酶活性，解磷能力较
强，可分泌ＩＡＡ，能促进植物生长［１３－１４］；有很强
的逆境生长潜能，对有机磷、氨基甲酸酯和除虫菊
酯等３类农药具有不同的降解效能［１５－１６］，下一步
可人工栽培石蝉草，探索喷施该菌株发酵液对其生
长的影响。
已有研究证实，内生菌的分布特征和群落结构
不仅受宿主植物基因型的影响，还受外界环境因子
的影响。即使是同一种植物，不同组织中内生细菌
的种类和数量也不尽相同，存在复杂的多样
性［１７－１８］。目前对于内生细菌的分布有两种观点，
一种认为内生菌多从土壤进入植物体，随蒸腾作用
逐渐扩散至地上部分，在植株体内的分布通常上部
组织少于下部组织，越往植株顶部，内生菌越
少［１９］；一种则认为，环境中的微生物一般会沿着
植物的气孔、水孔及伤口等破损处进入植物选择合
适的营养和生态位定殖，造成地下部位内生菌的种
类少于地上部位［２０］。本研究发现石蝉草可培养内
生细菌数量表现为叶部最多，茎部最少；多样性表
现为茎部最多，根部最少。综合两种观点，作者认
为石蝉草内生细菌主要从根部和叶部进入植物体，
因叶两面被短柔毛，叶面孔隙增多，表面积增大，
微生物更易在此聚集进入植物体，从而导致内生细
菌数量叶部高于根部，茎部多样性最为丰富可能与
内生菌在植物体内的扩散有关。
本研究采用传统的微生物研究方法，且选用的
培养基较为单一，具有一定的局限性。目前得到纯
培养并鉴定的微生物种类只占环境中微生物的
０．１％～１０．０％，９０％以上的微生物迄今仍处于存
活 但 不 可 人 工 培 养 的 状 态， 称 未 培 养
（Ｕｎｃｕｌｔｕｒｅｄ）微生物［２１］。下一步可采用非培养的
方法，对石蝉草内生细菌进行更加深入的研究。
参考文献：
［１］刘学周，赵智灵，李绍宾，等．西洋参内生菌群落结构与多样
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［２］周佳宇，贾 永，王宏伟，等．茅苍术叶片可培养内生细菌多样
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［３］杜晓宁，徐惠娟，黄盼盼，等．宁夏枸杞内生细菌的多样性及
其抑菌 活 性 研 究 ［Ｊ］．微 生 物 学 通 报，２０１５，４２ （９）：
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［４］朱妍妍，艾嫦，张嘉，等．具有生物活性的植物内生真菌次生
代谢产物 ［Ｊ］．化学进展，２０１１，２３ （４）：７０４－７３０．
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（责任编辑：黄爱萍）
８０１１ 福建农业学报 第３１卷