全 文 ：华西药学杂志
W C J P S　2007, 22(1):017 ～ 018 　　
基金项目:肇庆市科技局资助项目(203E501)
作者简介:段志芳(1973 -),女 ,河南安阳 ,博士 ,从事天然产物化学研究。 E - m ail:w dzh ifang@ yahoo. com. cn
溪黄草及其发酵物中黄酮对自由基的清除作用
段志芳 , 梁盛年
(肇庆学院生物医药工程中心 , 广东 肇庆 526061)
摘要:目的　研究溪黄草及其发酵物中黄酮对自由基的清除作用。方法　用枯草芽孢杆菌对溪黄草进行发酵 , 从溪黄草及
其发酵物中提取总黄酮 ,用分光光度法测定含量 ,采用 UV -Vis法测定两类黄酮提取物对 O— 2 和 OH 的抑制作用。结果　溪
黄草及其发酵物中的黄酮含量丰富 ,两者对 O— 2 和 OH 均有良好的清除作用 ,而发酵物中黄酮提取物的作用相对较弱。结论
溪黄草及其发酵物中的黄酮是良好的自由基清除剂 ,具有开发类似黄酮药物的前景。
关键词:溪黄草;发酵;黄酮;自由基;清除作用
中图分类号:R284　 　文献标识码:A　 　文章编号:1006 -0103(2007)01 - 0017 - 02
The effects on scaveng ing of free radica ls of flavones from Rabdosia serraM axmi . Hara and
its ferm ented product
DUAN Zhi - fang, LIANG Sheng - nian
(B iopharmaceutica lR esearch and D evelopm ent Cen ter of Zhaoqing University, Zhaoqing 526061, China)
Abstrac t:OBJECTIVE　To study the effects on scaveng ing of free rad ica ls of flavones from Rabdosia serraM axim. H ara and its fe r-
m en ted produc.t METHODS　The ex trac tion, co lor reaction and content measure of flavone compounds from Rabdosia serraM ax im.
H ara and its ferm en ted product by B. subtilis we re stud ied. The inh ibitory effec ts o f the extracts on supe rox ide anion free radica l and
hyd roxy l free radica lw erem easured by UV -V is spectropho tom e try. RESULTS　 The conten t o f flavones w as high in Rabdosia serra
M ax im. H ara and its ferm ented produc.t It was shown that the ex tracts had scaveng ing action on free radicals. The flavone compounds
from the ferm en ted produc t had w eaker action than those from Rabdosia serraM ax im. H a ra. CONCLUSION　 The flavones in Rabdo-
sia serraM axim. H ara and its fe rmented produc t have good inh ibito ry effects on free radicals. They m ay be the prom ising flavone medi-
cines.
K ey words:Rabdosia serraM axim. H ara;Ferm en tation;F lavone;F ree rad ica l;Scave ng ing ac tion
CLC num ber:R284 D ocum ent code:A Artic le ID:1006 - 0103(2007)01 -0017 - 02
　　溪黄草 Rabdosia serraM ax im. H ara属唇形科香
茶属的多年生草本植物。具有清热祛湿 、凉血散淤 、
抗肿瘤 、抗菌 、消炎及保肝作用 ,临床用于治疗乙型
肝炎 、急性黄疸型肝炎 、急性胆囊炎 ,治疗跌打损伤 、
痈肿等症[ 1] 。溪黄草含萜类 、黄酮类 、酚类 、氨基酸
等多种化学成分 。黄酮具有广泛的生理和药理活
性 , 包括抗病毒 、抗癌 、抗氧化 、抗炎 、抗衰老等 。因
此 ,对该类化合物的研究已成为国内外医药界研究
的热门课题 [ 2] 。我们对枯草芽孢杆菌 Bacillus subti-
lis Eh renberg C ohn进行了发酵 ,从发酵前 、后的溪黄
草中提取黄酮类物质并测其含量 ,比较其对超氧阴
离子自由基和羟自由基的清除作用。
1　实验部分
1.1　仪器与试剂
2550型紫外可见光光度计 (日本岛津公司 );
DJ -10A倾倒式粉碎机 (上海淀久中药机械制造有
限公司)。溪黄草全草(市售 );枯草芽孢杆菌 (生物
系微生物实验室);芦丁对照品 (中国药品材料制品
检定所);其余试剂均为分析纯。
1.2　方法与结果
1. 2. 1　固体发酵法　将粉状溪黄草与水同比例混
合搅匀 ,装入菌袋 ,于 121℃灭菌 40 m in。每袋接入
80m l培养 48 h的枯草芽孢杆菌菌液 。将菌种和溪
黄草充分混匀后培养 。 10 d后培养物变为黑褐色 ,
干燥 , 4℃冰箱保存 。
1. 2. 2　提取的方法　准确称取溪黄草干粉 (或发
酵物 )30 g,加入乙醇 -水 (1：1)溶液 250m l,回流
提取 3 h。过滤 ,滤渣再加入乙醇 -水 (1：1)溶液
200m l,提取 30m in。过滤 ,弃去滤渣 ,合并后的滤液
减压浓缩至约 85 m l,然后加入约 100 m l石油醚萃
取 ,除去叶绿素等脂溶性杂质。静置分层后乙醇水
溶液部位呈棕红色 (含花青素和黄酮 ),将此溶液减
压蒸馏浓缩至约 30m l。用正丁醇萃取(20 m l×3),
DOI牶牨牥牣牨牫牫牱牭牤j牣cnki牣wcjps牣牪牥牥牱牣牥牨牣牥牥牱
合并正丁醇部位 ,再用水萃取(50m l×3),除去水溶
性杂质 ,得到正丁醇提取液 (约 60 m l),保存备用 。
1. 2. 3　显色反应　采用试管和纸斑反应 ,分别测定
了溪黄草及其发酵物的正丁醇提取液与浓硫酸 、氢
氧化钠 、三氯化铁 、醋酸镁 、氨水和盐酸 -锌粉的作
用 。两种提取液与浓硫酸作用均显黄橙色;与 4%
氢氧化钠水溶液作用显黄色;与 1%三氯化铁水溶
液作用显深绿色;与 1%醋酸镁的甲醇溶液作用显
黄色;与氨水作用显黄绿色;与盐酸 -锌粉作用显红
色 。结果表明正丁醇提取液为黄酮类物质 。
1. 2. 4　含量的测定　取正丁醇提取液 4 m l于 50
m l量瓶中 ,用 30%乙醇稀释至 25 m l,加入 1. 4 m l
5%N aNO 2溶液 ,摇匀后放置 6m in,加入 1. 4m l10%
A l(NO 3)3溶液 ,摇匀后放置 6m in,再加入 10 m l4%
N aOH溶液 ,混匀 , 用 30%乙醇定容 , 10 m in后于
510 nm测定吸光度。以芦丁对照液与吸光度进行
回归 ,其回归方程为:A =9. 310C +2.644 ×10-2。
计算正丁醇部位总黄酮的含量 。溪黄草中总黄酮的
含量为 0.64%,其发酵物中总黄酮含量为 0. 60%。
与文献[ 3]银杏叶中黄酮类质量分数 0. 40% ～ 1.98%
相当 。
1. 2. 5　提取物对超氧阴离子自由基的清除作用　
O
—
2 自由基产生体系模型参照文献 [ 4] 。邻苯三酚在
弱碱性介质(pH 8. 2)中自身氧化分解产生 O— 2 和其
他产物。该体系常用于测定超氧化物歧化酶 (SOD)
或 SOD活性物质对 O— 2 的歧化活性。随着反应的进
行 ,因 O— 2 不断积累 ,反应液的吸光度(325 nm)在反
应开始后 5 m in内随反应时间的延长而线性增大。
因此 ,于 325 nm测定被测反应液吸光度随时间的变
化率 ,并与不含样品的空白溶液比较便可得出被测
物抑制 O— 2 积累的作用能力 。抑制率 =(Fx - F0) /
F0 ×100%。在 O— 2 自由基产生体系中加入黄酮提
取物后的 5 m in内 ,吸光度随着加入量的增加而增
大 ,说明当黄酮类物质的浓度增加时 ,其抑制率不断
增大 (图 1)。
图 1　黄酮提取物对超氧阴离子自由基(A)及自由基(B)的清除作用
F ig 1　The effects of flavone ex tracts on superox ide anion free radica l(A) and hydroxyl free rad ica l(B)
1. 2. 6　黄酮提取物对羟自由基的清除作用　羟自
由基产生体系模型参照文献 [ 5] 。H 2O 2与二价铁离
子混合后产生 OH 的 Fenton反应为:
H2O2 +Fe2+ OH +OH - +Fe3 +
OH
具有很高的反应活性 , 存活时间短 ,但在
反应体系中加入水杨酸 ,可有效地捕捉 OH ,并产
生有色产物 。该产物在 510 nm处有强吸收 。若加
入具有清除 OH 功能的被测物 ,便与水杨酸竞争
OH
,从而使有色物质的生成量减少。采用固定反
应时间法 ,在 510 nm测定被测物反应液的吸光率 ,
并与空白液比较 ,便能测定被测物对 OH 的清除作
用 ,其计算式为:清除率 =(A0 -Ax ) /A0 ×100%。在
羟自由基产生体系中加入黄酮提取物时 ,有色产物
的生成量会随着黄酮的加入而不断减少 ,即随着黄
酮浓度的增大清除率也增大。
2　讨论
溪黄草及其发酵物中的黄酮类物质对超氧阴离
子自由基和羟自由基均有清除作用 ,且与其浓度成
正相关。由于所采用的自由基模型体系所产生的自
由基浓度远大于体内此自由基的浓度 ,可见其为良
好的氧自由基清除剂。发酵物中的黄酮含量略低于
溪黄草中的黄酮含量 ,且对自由基的清除作用在同
浓度下略低于溪黄草提取物清除的作用 ,这可能是
发酵过程中某些黄酮物质已被细菌破坏 。具体原因
有待于进一步研究 。
参考文献:
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收稿日期:2006 - 04
18 　 华 西 药 学 杂 志　　　 第 22卷