全 文 ：北方园艺２０１２（１７）：１５９～１６０ ·中草药·
第一作者简介：张虹（１９６２－），女，本科，教授，现主要从事生物技术
等研究工作。
责任作者：郭俊明（１９６２－），男，硕士，教授，现主要从事无机非金属
及生物化学等研究工作。
基金项目：云南民族大学国家民族事务委员会教育部共建民族药
资源化学重点实验室开放基金资助项目（ＭＺＹ１１０５）。
收稿日期：２０１２－０５－２１
青叶胆总黄酮提取方法研究
张 　 虹１，计 红 旭１，张 江 梅１，王 宝 森１，白 红 丽２，郭 俊 明２
（１．红河学院，云南 蒙自６６１１００；２．云南民族大学，民族药资源化学国家民委－教育部重点实验室，云南 昆明６５０５００）
　　摘　要：以红河州民族民间草药青叶胆为试材，用紫外分光光度法对总黄酮含量进行分析，
以乙醇和甲醇为提取剂，分别对青叶胆中总黄酮进行提取。结果表明：乙醇和甲醇浓度８０％，浸
提时间为３ｄ时，总黄酮的提取效果较好，以乙醇作为提取剂的提取效果优于甲醇，总黄酮平均回
收率为１０２．２％，相对标准偏差ＲＳＤ为１．８５％，结果可靠。
关键词：青叶胆；总黄酮；提取
中图分类号：Ｓ　５６７．２３＋９　文献标识码：Ｂ　文章编号：１００１－０００９（２０１２）１７－０１５９－０２
　　青叶胆（Ｓｗｅｒｔｉａ　ｍｉｌｅｅｎｓｉｓ　Ｔ．Ｎ．Ｈｏ　ｅｔ　Ｗ．Ｌ．Ｓｈｉ）为
龙胆科獐牙菜属１ａ生直立小草本植物，别名肝炎草、苦
胆草、走胆草等［１］，主要分布在云南省红河哈尼族彝族
自治州，当地人用青叶胆治疗肝炎有较长的历史，１９７０
年从云南红河哈尼族彝族自治州弥勒、开远等地民间发
掘出来，收载于１９８５年版《中华人民共和国药典》［２－４］。
青叶胆中含有黄酮、三萜、环烯醚萜苷类、内酯和齐
墩果酸等化合物，青叶胆味苦、甘、寒。具有清肝利胆、
清热利湿的功效，主治黄疸、尿赤、热淋涩痛［５－６］。黄酮类
化合物具有多种生物活性和药理作用，不仅对心血管系
统有作用，且具有抗炎、抗菌及抗病毒等作用［７－８］。
该试验采用冷浸法提取青叶胆中的总黄酮，用不同
浓度的乙醇和甲醇为提取剂，分别提取不同时间后进行
比较，以得到总黄酮提取率最高的提取条件，皆在为青
叶胆的研究提供理论依据。
１　材料与方法
１．１　试验材料
新鲜青叶胆购于红河州蒙自草药市场。试验仪器：
紫外分光光度仪（ＵＶ－４８０２Ｓ型紫外－可见分光光度计，上
海尤尼柯仪器有限公司）。试剂：芦丁标准品，乙醇、甲
醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等试剂均为分析纯。
１．２　试验方法
将新鲜青叶胆洗净、剪成小段，置于电热恒温鼓风
干燥箱中６０℃干燥６ｈ，高速粉碎机粉碎，备用。
１．２．１　波长的选择　选取标准溶液和样品提取溶液进
行波长扫描，标准溶液和样品提取溶液在５１０ｎｍ有最
大吸收峰，故选择５１０ｎｍ作为测定波长。
１．２．２　标准工作曲线制备　准确称取于１２０℃恒温干燥
至恒重的芦丁标准品２５．０ｍｇ置于１００ｍＬ容量瓶中，加
入适量６０℃的５０％乙醇或５０％甲醇使其溶解。加５０％乙
醇或５０％甲醇定容至刻度，摇匀。此时标准品溶液浓度
为０．２５ｍｇ／ｍＬ。分别吸取标准品溶液０、０．５、１．０、２．０、
３．０、４．０、５．０ｍＬ置于２５ｍＬ容量瓶中；每个容量瓶中加入
约５ｍＬ　５０％乙醇或甲醇，摇匀；分别加５％亚硝酸钠溶液
１ｍＬ，摇匀，放置６ｍｉｎ；再加１０％硝酸铝溶液１ｍＬ，摇匀，
放置６ｍｉｎ；加４％ＮａＯＨ溶液１０ｍＬ，加５０％乙醇或甲醇
定容至刻度，摇匀，放置１５ｍｉｎ。同时以试剂空白作参比。
在５１０ｎｍ波长处测定溶液的吸光度。以吸光度Ａ为纵
坐标，浓度Ｃ（μｇ／ｍＬ）为横坐标，绘制标准曲线，分别得
到乙醇和甲醇的线性回归方程：Ａ＝０．００９Ｃ－０．００１１，
Ｒ２＝０．９９９６；Ａ＝０．００９１Ｃ－０．００３９，Ｒ２＝０．９９９６。
１．２．３　样品提取液的制备　准确称取２ｇ青叶胆干粉
置于１００ｍＬ带塞三角瓶中，分别加入浓度为３０％、
５０％、７０％、８０％、９０％的甲醇或乙醇５０ｍＬ，分别浸提
１、２、３、４ｄ后过滤，滤液用相应浓度的乙醇或甲醇溶液
定容至１００ｍＬ，此液作为青叶胆样品的总黄酮提取液。
１．２．４　青叶胆总黄酮含量的测定　准确吸取样品提取液
１．０ｍＬ，置于２５．０ｍＬ容量瓶中，按１．２．２方法操作，在
５１０ｎｍ下平行测定３次，同时以样品空白作参比。根据
回归方程，计算总黄酮的浓度。总黄酮得率％＝［提取液
浓度×稀释倍数×体积／样品干重×１　０００］×１００％。
２　结果与分析
２．１　提取溶剂浓度和浸泡时间对青叶胆总黄酮得率的
影响
由表１、２可知，在相同浸提时间内，乙醇浓度和甲
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·中草药· 北方园艺２０１２（１７）：１５９～１６０
醇浓度为３０％～８０％时，均表现出随浓度的增加总黄酮
得率也随之增加，在以乙醇浓度和甲醇浓度为９０％时总
黄酮得率均略有减少，乙醇浓度８０％和甲醇浓度８０％时
总黄酮得率为最高，其次是乙醇浓度和甲醇浓度为９０％
的，乙醇浓度和甲醇浓度为３０％得率为最低。
在相同浓度下，浸提时间不同，总黄酮得率不同。
在以乙醇和甲醇为提取剂时，所有浓度均表现出浸提时
间为３ｄ时的总黄酮得率最高，浸提１ｄ的总黄酮得率
最低。以乙醇和甲醇为青叶胆总黄酮提取剂时，在相同
浓度下，乙醇的提取效果比甲醇好，在相同浓度，相同提
取时间，乙醇和甲醇的总黄酮得率最低相差１．１４％，最
高相差１．５９％。
表１　乙醇提取青叶胆总黄酮得率的测定结果 ％
浸泡时间／ｄ
乙醇浓度／％
３０　 ５０　 ７０　 ８０　 ９０
１　 ３．０６　 ３．４０　 ４．００　 ４．６３　 ４．５４
２　 ３．２０　 ３．５１　 ４．２２　 ５．１３　 ４．８８
３　 ３．２７　 ３．５９　 ４．３２　 ５．１４　 ５．０２
４　 ３．１９　 ３．４１　 ４．３１　 ４．９８　 ４．９９
　　表２　甲醇提取青叶胆总黄酮得率的测定结果 ％
浸泡时间／ｄ
甲醇浓度／％
３０　 ５０　 ７０　 ８０　 ９０
１
２
３
４
１．５５
１．７３
１．８５
１．８０
１．８５
１．９７
２．１４
２．０３
２．４１
２．７７
３．１８
３．１２
３．０５
３．８９
３．９２
３．７３
２．９７
３．６６
３．７０
３．５５
２．２　稳定性试验
准确量取１．０ｍＬ　７０％乙醇的提取液，按１．２．２方
法操作，放置０、１、２、３、４、５ｈ，每隔２０ｍｉｎ测定１次吸光
度，结果表明，２ｈ内稳定性良好，ＲＳＤ为１．０２％。
２．３　加标回收率试验
取已知样品总黄酮含量的提取液１．０ｍＬ置于２５ｍＬ
容量瓶中，加入芦丁标准溶液２．０ｍＬ，余下部分按１．２．２
方法操作，平行测定５次，计算加标回收率，其平均回收
率为１０２．２％，相对标准偏差ＲＳＤ为１．８５％，表明测定
结果准确可靠，测定精密度符合要求。
３　结论与讨论
该试验结果表明，乙醇浓度８０％和甲醇浓度８０％
时，浸提时间为３ｄ时的总黄酮得率最高为５．１５％和
３．９２％，乙醇浓度和甲醇浓度均为３０％时，浸提１ｄ的总
黄酮得率最低为３．０６％和１．５５％。在相同浓度下，浸提
时间不同，总黄酮得率不同。在乙醇和甲醇为提取剂
时，所有浓度均表现出浸提１ｄ的总黄酮得率为最低。
以乙醇和甲醇为提取剂中，以乙醇的提取效果最好。该
试验与钟方丽等［９］的把青叶胆加水煎煮，制成浸膏，再
测定总黄酮含量的研究方法比较，其总黄酮得率要低于
他们的研究结果，可能是不同的提取剂和提取方法对青
叶胆总黄酮提取率有差异导致的。
参考文献
［１］　云南省药物研究所．云南重要天然药物［Ｍ］．昆明：云南科技出版社，
２００６：２３５．
［２］　宋万志．龙胆科的资源植物－“青叶胆”和“藏茵陈”［Ｊ］．中药材，１９９１，
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［３］　杨永红，杨林福，范建，等．青叶胆可持续利用策略研究［Ｊ］．中国民族
民间医药杂志，２００３，６１（２）：４８－５０，６５．
［４］　任丽华，谢华通．龙胆科植物獐牙菜属药用植物的研究及应用概况
［Ｊ］．中医儿科杂志，２００７，３（１）：５０－５２．
［５］　郭爱华，李军，付宏征，等．青叶胆酮类化合物的成分研究［Ｊ］．中草
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［７］　裴凌鹏，惠伯棣，金宗濂．黄酮类化合物的生理活性及其制备技术研
究进展［Ｊ］．食品科学，２００４，２５（２）：２０３－２０７．
［８］　刘玉芬，夏海涛，杨树平．紫外分光光度法测定剑麻花中总黄酮的含
量［Ｊ］．食品科学，２００５，２６（９）：４１８－４１９．
［９］　钟方丽，王慧竹，祝波．青叶胆中总黄酮的提取工艺研究［Ｊ］．吉林化
工学院学报，２０１０，２７（３）：１１－１３．
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　Ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　Ｔｏｔａｌ　Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｎ　Ｓｗｅｒｔｉａ　ｍｉｌｅｅｎｓｉｓ
ＺＨＡＮＧ　Ｈｏｎｇ１，ＪＩ　ｈｏｎｇ－ｘｕ１，ＺＨＡＮＧ　Ｊｉａｎｇ－ｍｅｉ　１，ＷＡＮＧ　Ｂａｏ－ｓｅｎ１，ＢＡＩ　Ｈｏｎｇ－ｌｉ　２，ＧＵＯ　Ｊｕｎ－ｍｉｎｇ２
（１．Ｈｏｎｇｈｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｍｅｎｇｚｉ，Ｙｕｎｎａｎ　６６１１００；２．Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｅｔｈｎｉｃ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｔａｔｅ　Ｅｔｈｎｉｃ　Ａｆａｉｒｓ　Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ
ａｎｄ　Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｙｕｎｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ，Ｋｕｎｍｉｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ　６５０５００）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｗｅｒｔｉａ　ｍｉｌｅｅｎｓｉｓ　ｈｅｒｂａｌ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ｏｆ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｆｏｌｋ　ｉｎ　Ｈｏｎｇｈｅ　ｌｏｃａｌ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ．Ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｉｎ　Ｓｗｅｒｔｉａ　ｍｉｌｅｅｎｓｉｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｗｈｉｌｅ　ａｌｃｏｈｏｌ　８０％ａｎｄ
８０％ ｍｅｔｈａｎｏｌ　ａｓ　ｅｘｔｒａｃｔａｎｔ，ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｔｉｍｅ　ｗａｓ　３ｄ，ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｈａｄ　ｇｏｏｄ　ｅｆｅｃｔ．Ａｌｃｏｈｏｌ　ｈａｄ
ｂｅｔｔｅｒ　ｅｆｅｃｔ　ｔｈａｎ　ｍｅｔｈａｎｏｌ．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　１０２．２％，ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｄｅｖｉａｔｉｏｎ（ＲＳＤ）ｏｆ
ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　１．８５％．Ｉｔｓ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｗｅｒｅ　ｒｅｌｉａｂｌｅ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｓｗｅｒｔｉａ　ｍｉｌｅｅｎｓｉｓ；ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
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