全 文 ：第 27卷　第 3期　 吉 　林 　化　 工　 学　 院　 学　报 Vol.27No.3
　2010年 6月 JOURNALOFJILININSTITUTEOFCHEMICALTECHNOLOGY Jun.　2010
收稿日期:2010-04-02
作者简介:钟方丽(1970-), 女 ,山东安丘人 , 吉林化工学院教授 , 博士 , 主要从事天然产物化学成分的分离与生物活
性方面的研究.
　　文章编号:1007-2853(2010)03-0011-03
青叶胆中总黄酮的提取工艺研究
钟方丽 ,王慧竹 ,祝　波
(吉林化工学院 化学与制药工程学院 ,吉林吉林 132022)
摘要:用正交试验法优选青叶胆中总黄酮的提取工艺.以总黄酮提取率为主评价指标 , 浸膏收率为次评
价指标 ,选择固液比 、提取时间 、提取次数为考察因素 ,采用正交试验法确定了青叶胆中总黄酮的最佳提
取工艺 ,利用分光光度法对干浸膏中总黄酮的含量进行了测定 , 检测波长为 490 nm.芦丁在 0.008 ～
0.048mg呈良好的线性关系.平均回收率为 99.72%, RSD为 0.29%.对青叶胆总黄酮提取工艺的研究 ,
为其进一步开发提供了基础依据.
关 键 词:青叶胆;总黄酮;提取;正交试验
中图分类号:R282.71　　　　　文献标识码:A
　　青叶胆为龙胆科植物獐牙菜属青叶胆(Swer-
tiamileensisT.N.HoetW.L.Shih.)的干燥全草.是
我国的一种珍稀药材 [ 1] ,为云南特有植物 ,又名
青鱼胆 ,苦胆草 ,肝炎草 ,勒獐牙菜 、金鱼胆药 、小
苦草 、细龙胆等 ,其性寒 ,味苦.
青叶胆中含黄酮类 、环烯醚萜苷类 、内酯 、齐
墩果酸等化合物[ 2-3] ,具有清热解毒 ,利湿退黄之
功效.主治湿热黄疸 ,热淋涩痛 ,湿热泻痢 ,疟疾发
热等症.治疗肝炎特别是治疗黄疸性肝炎有特别
效用.为进一步综合利用青叶胆 ,对青叶胆中黄酮
类有效成分的提取工艺进行了研究.
1　仪器与试药
752N型三用紫外分析仪;电子天平 MET-
TLER-AE240;超声波清洗器 KQ-400DB;芦丁对
照品 (中国药品生物制品检定所 , 批号:0080-
9705);青叶胆购于安徽省亳州市华申药业有限
公司;所用试剂均为分析纯.
2　方法与结果
2.1　因素及水平考察
根据单因素探索性试验结果 ,选择提取次数 、
固液比 、提取时间 3个因素 ,并选定了每个因素的
相应的水平数 ,见表 1.
表 1　因素水平表
水平因素 A提取次数
B
固液比
C
提取时间 /h
1 1 1:12 2.0
2 2 1:15 3.0
3 3 1:18 4.0
2.2　提取方法
取青叶胆 50g,按 L9(34)正交表设计方案进
行试验 ,加水煎煮 ,滤过 ,合并煎液 ,浓缩后放入定
温在 60 ℃的干燥箱中干燥至恒重 ,计算出膏率 ,
并采用分光光度法测定干浸膏中总黄酮的含量 ,
结果与方差分析见表 2.
表 2　正交试验结果
序号 A B C D 干浸膏收率(%)
总黄酮的含量
(%)
总黄酮质量 /
g
1 1 1 1 1 9.2 6.75 0.310
2 1 2 2 2 9.9 10.02 0.496
3 1 3 3 3 11.0 11.33 0.623
4 2 1 2 3 12.5 10.40 0.650
DOI :10.16039/j.cnki.cn22-1249.2010.03.011
续表 2
序号 A B C D 干浸膏收率(%)
总黄酮的含量
(%)
总黄酮质量 /
g
5 2 2 3 1 13.0 11.80 0.767
6 2 3 1 2 14.6 11.37 0.830
7 3 1 3 2 11.8 6.19 0.365
8 3 2 1 3 11.6 11.47 0.665
9 3 3 2 1 14.6 11.15 0.814
T1j 0.476 0.442 0.602 0.630
T
2j 0.749 0.643 0.653 0.564
T3j 0.615 0.756 0.585 0.646
极差 0.273 0.314 0.068 0.082
　　由正交试验数据处理结果可得出青叶胆总黄
酮的最佳提取工艺为 A2B3C2 ,即提取 2次;固液
比为 1:18 ,提取时间为 2 h.由极差值可以看出 ,
提取溶剂量对提取率有显著的影响 ,其次为提取
的次数 ,提取时间对提取率的影响相对而言不太
显著.
2.3　工艺验证性试验
为考察上述优选得到的提取工艺的稳定性 ,
按最佳工艺水平组合条件进行了 3次验证性试
验 ,测得青叶胆干浸膏的平均收率为 12.78%,干
浸膏中总黄酮的平均含量为 11.23%, RSD为
1.46%,表明本实验制定的工艺路线稳定可靠.
2.4　青叶胆干浸膏中总黄酮含量的测定
2.4.1　对照品溶液的制备
精密称取在 60℃减压干燥至恒重的芦丁对
照品 20mg,置于 100mL容量瓶中 ,加 60%乙醇
适量 ,超声 15min使溶解 ,放冷 ,用 60%乙醇稀释
至刻度 ,摇匀 ,即得(每 1mL含无水芦丁 0.2mg)
芦丁对照品溶液.
2.4.2　样品溶液的制备
取青叶胆干浸膏粗粉约 0.3g,精密称定 ,置
50mL容量瓶中 ,加 60%乙醇适量 ,超声使溶解 ,
放冷并稀释至刻度 ,摇匀 ,滤过 ,弃去初滤液 ,精密
吸取续滤液 10mL,置 50mL容量瓶中 ,用 60%乙
醇稀释至刻度 ,摇匀 ,即得供试品溶液.
2.4.3　检测波长的选择
采用分光光度法在 200 ～ 600nm之间进行波
长扫描 , 测得芦丁对照品的最大吸收波长为
500nm,供试品的最大吸收波长为490nm,所以选
择 490nm为检测波长.
2.4.4　测定法
精密量取供试品溶液及空白溶液各 4mL,分
别置于 50mL容量瓶中 ,各加 60%乙醇 10mL,摇
匀 ,精密加入 5%亚硝酸钠溶液 2mL,摇匀 ,放置
6min,加 10%硝酸铝溶液 2mL,摇匀 ,放置 6min,
加 4%氢氧化钠溶液 10mL,然后加 60%乙醇稀释
至 50 mL,摇匀 ,放置 10 min.照分光光度法 ,在
490nm处测定其吸光度.
2.4.5　线性关系考察
精密吸取芦丁对照品溶液(0.208mg/mL)0、
2、4、6、8、10、12 mL,以试剂作空白 ,依 “2.44”法
在 490nm波长处测得吸光度 ,以浓度为横坐标 ,
吸收度为纵坐标 ,进行线性回归 ,结果回归方程为
y=11.193x-0.0005, R=0.999 6,结果表明芦丁
在 0.008 ～ 0.048mg范围内呈良好的线性关系.
2.4.6　稳定性试验
取供试品溶液 , 依次在 1, 2, 3 , 4, 5 h按
“ 2.4.4”项下方法测定其吸收值 , 结果 RSD=
1.06%(n=5).结果表明供试品的吸收值 5h内
基本稳定.
2.4.7　精密度试验
取对照品溶液按 “2.4.4”项下方法 ,连续 5次
测定其吸收度 ,结果 RSD=0.82%(n=5).结果
表明:仪器精密度良好.
2.4.8　重复性试验
取同一批号的样品 5份 ,按 “2.4.2”项下方
法制备 , “ 2.4.4”项下方法测定 , 结果 RSD=
0.41%(n=5).表明方法重复性良好.
2.4.9　回收率试验
精密称取已知含量的样品 5份 ,精密加入芦
丁对照品约 20 mg,按 “ 2.4.2”项下方法制备 ,
“ 2.4.4”项下方法测定 ,计算回收率 ,结果见表 3.
12 　　 吉　林　化　工　学　院　学　报　　 2010年　　
表 3　回收率测定结果
实验号 取样量 /g
样品含量 /
mg
对照品加入量 /
mg
测得总量 /
mg
回收率
(%)
平均值
(%)
RSD
(%)
1 0.301 5 33.62 20.01 53.61 99.90
2 0.302 1 33.69 19.99 53.63 99.75
3 0.299 5 33.40 20.03 53.39 99.80 99.72 0.29
4 0.310 0 34.57 19.97 54.47 99.65
5 0.302 3 33.71 20.04 53.65 99.50
3　讨　　论
(1)本实验通过正交试验法对青叶胆的提取
工艺条件进行了优化 ,并按最佳工艺进行了验证
试验 ,结果证明用该工艺提取青叶胆总黄酮工艺
简单 、操作控制容易 、稳定性好 ,为青叶胆总黄酮
提取工艺的规模化生产提供了基础依据.
(2)本实验采用以芦丁为标准品 ,以 NaNO2 -
Al(NO3)3 -NaOH显色法测定青叶胆干浸膏中总
黄酮的含量 ,操作简便 ,但专属性稍差 ,在后续研
究中应该探索专属性强的分析方法.
(3)本实验采用水为提取溶剂 ,虽然所得浸
膏中总黄酮含量较醇提工艺稍低 ,但从成本角度
考虑 ,水提法更具经济价值.
参考文献:
[ 1] 　高丽.青叶胆及民间习用品的鉴定 [ J] .云南中医中
药杂志 , 2006, 27(4):65-66.
[ 2] 　刘光明 , 周萍 , 肖培云 , 等.彝族抗肝炎药紫红青叶
胆的化学成分研究 [ J] .中药研究与信息 , 2001,
3(12):16-17.
[ 3] 　郭爱华 , 李军 , 付宏征 , 等.青叶胆酮类化合物的成
分研究 [ J] .中草药 , 2003, 34(2):107-109.
StudyontheextractionprocessoftotalflavonoidsinSwertia
mileensisT.N.HoetW.L.Shi
ZHONGFang-li, WANGHui-zhu, ZHUBo
(CollegeofChemical＆PharmaceuticalEngineering, JilinInstituteofChemicalTechnology, JilinCity132022, China)
Abstract:TheoptimumextractingprocessoftotalflavonoidsinSwertiamileensisT.N.HoetW.L.Shih.was
studiedindetail.Usingtheconcentrationoftotalflavonoidsasmainevaluatingindicatorsandtheyieldofdry
extractsasthesecond, theratiobetweenthematerialandsolvent, extractingtimeandtimeswerechosenasthe
studyingfactors.Theextractingprocesswasoptimizedwiththeorthogonaldesignusingspectro-photometryto
determinetheconcentrationoftotalflavonoidsat490nmwave-length.Therewasgoodlinearrelationshipbe-
tweentheconcentrationofRutinandtheabsorptionvalueintherangeof0.008to0.048mg.Theaveragere-
coveryoftotalflavonoidswas99.72% withtheRSDof0.29%.Thestudyofoptimumextractingprocessofto-
talflavonoidsinSwertiamileensisT.N.HoetW.L.Shi.providedabasisforitsfurtherapplication.
Keywords:SwertiamileensisT.N.HoetW.L.Shi.;totalflavonoids;extraction;orthogonaldesign
13　　第 3期 钟方丽 ,等:青叶胆中总黄酮的提取工艺研究