全 文 ：收稿日期:2012 － 10 － 24
基金项目:国家自然科学基金项目(20862020) ;中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(ITBB130405) ;海南省
自然科学基金项目(313079)
作者简介:靳鹏飞(1987 －) ，男(汉族) ，甘肃兰州人，博士研究生，E-mail:283321431@ qq． com;* 通讯作者:梅文莉
(1974 －) ，女(汉族) ，湖北黄石人，博士，副研究员，Tel:(0898)66987529，E-mail:meiwenli@ yahoo． com． cn。
文章编号:1005 － 0108(2013)04 － 0309 － 03
角果木内生真菌的代谢产物研究
靳鹏飞1，2，戴好富2，左文健2，曾艳波2，郭志凯2，梅文莉2*
(1. 海南大学 环境与植物保护学院，海南 海口 570228;
2. 中国热带农业科学院 热带生物技术研究所 热带作物生物学与遗传资源利用农业部重点实验室，中国 海口 571101)
摘 要:目的 研究角果木内生真菌 Penicillium． sp FJ-1 发酵液的化学成分。方法 用多种柱色谱技术对该菌发
酵液化学成分进行分离纯化，根据波谱数据和理化性质鉴定化合物的结构。结果 分离得到 5 个化合物，经波
谱分析鉴定其结构分别为 24Ｒ-ergosta-7，22-diene-3，5，6-triol(1)、互隔交链孢霉素(2)、5-羟基互隔交链孢霉
素(3)、5-epialtenuene(4)、篮毒菌素黄酮(5)。结论 以上 5 个化合物均为首次从该菌中分离得到，并首次报
道了化合物 3 的核磁数据。
关键词:内生真菌;化学成分;角果木;Penicillium． sp
中图分类号:Ｒ284 文献标志码:A
角果木(Ceriops tagal)为红树科(Ｒhizo-
phoraceae)角果木属(Ceriops)植物，分布在非洲
沿海、南亚及南太平洋岛，富含鞣质、五环三萜和
二萜［1 － 3］。本属植物在民间用作止痛药［4］，印度
角果木树皮熬汁可用于治疗恶疮和止血［5］。本
文首次对其内生真菌 FJ-1 发酵液的乙酸乙酯萃
取部分进行了研究，从中分离鉴定了 5 个单体化
合物，通过理化常数和波谱数据分析分别鉴定为
24Ｒ-ergosta-7，22-diene-3，5，6-triol(1)、互隔交链
孢霉素(2)、5-羟基互隔交链孢霉素(3)、5-epialt-
enuene(4)、篮毒菌素黄酮(5)。以上化合物均为
首次从该菌中分离得到，并首次报道了化合物 3
的核磁数据。
1 仪器与材料
所用仪器为 VG － AutoSpec － 3000 型质谱仪
(英国 VG 公司) ;Bruker AV － 500 型超导核磁仪
(TMS 内标，德国 Bruker 公司) ;鲁道夫 III 旋光
仪(美国鲁道夫公司) ;Nicolet380 型红外光谱仪
(美国 Thermo 公司)。
薄层色谱硅胶板(GF254)、柱色谱硅胶(50 ～
71 μm)均为青岛海洋化工厂产品。Sephadex
LH-20 和 ＲP-18 柱均为 Merck公司产品。
第 23 卷 第 4 期
2013年8月 总 114期
中 国 药 物 化 学 杂 志
Chinese Journal of Medicinal Chemistry
Vol. 23 No. 4 p． 309
Aug. 2013 Sum 114
DOI:10.14142/j.cnki.cn21-1313/r.2013.04.004
角果木(Ceriops tagal)的枝条于 2011 年 7 月
采自海口市东寨港红树林保护区，经中国热带农
业科学院热带生物技术研究所代正福副研究员鉴
定，凭证标本(No． 20110731)存放于中国热带农
业科学院热带生物技术研究所。菌株由本研究组
鉴定为青霉属(Penicillium sp) ，保存在中国热带
农业科学院热带生物技术研究所。
2 内生真菌的培养
将刚采集的新鲜角果木枝条用水洗净沥干。
再将材料放进经过紫外线消毒的超净工作台内，
切割成 1 cm ×2 cm 的小段，按常规无菌操作进行
表面消毒处理:体积分数 75%乙醇浸泡 1 min→
无菌水冲洗 3 遍→体积分数 5%的次氯酸钠浸泡
3 min→无菌水冲洗 3 遍。将上述处理过的材料
经滤纸吸干水分后，在无菌条件下切成 0. 5 cm ×
0. 5 cm 的小块，放置于新鲜 PDA(马铃薯葡萄糖
琼脂)平板培养基上，每个平板放置 4 ～ 5 块，
28 ℃恒温培养 3 ～ 7 d。待切口边缘处长出真菌
菌丝，及时转接至新鲜 PDA 培养基上培养，采用
划线法逐步培养出纯菌株。同时，以消毒后最后
一次的洗涤灭菌水涂布在 PDA 培养基的表面作
为对照，同样条件下观察是否有微生物长出(没
有菌株长出说明表面灭菌彻底［6］)。采用真菌插
片法进行培养，对分离得到的内生真菌进行显微
形态特征(分生孢子梗、孢子等)观察和分类鉴
定。分类检索参照文献［7 － 8］。将分离得到的
内生菌株 FJ-1 切成黄豆粒大小的菌丝块，接种于
PDA 培养液中。在 1 L 的三角瓶中装入培养基
400 mL，室温培养，110 r·min －1振荡培养 7 d，静
置培养 21 d，共发酵 60 L。
3 代谢物的提取分离
发酵产物经过滤、真空减压浓缩至无乙醇味
得粗浸膏，粗浸膏分散于水中成悬浊液，依次用石
油醚、乙酸乙酯萃取，萃取液分别减压浓缩至干。
乙酸乙酯部分(8. 4 g)经减压硅胶柱色谱分离，以
氯仿-甲醇(体积比为 100 ∶ 1→0 ∶ 1)梯度洗脱，分
段收集，薄层检测，合并相同部分，浓缩收集得到
10 个组分(Fr. 1 ～ Fr. 10)。
Fr. 8(0. 2 g)经硅胶柱色谱分离，以氯仿-甲
醇(体积比为 9 ∶ 1→5 ∶ 1)洗脱得到化合物 1
(21. 6 mg)。Fr. 5(220. 0 mg)先经 Sephadex LH-
20 凝胶柱，后经硅胶柱色谱分离，以氯仿-甲醇
(体积比 10∶ 1)洗脱得到化合物 2(3. 8 mg)和 3
(5. 2 mg)。Fr. 3(125. 0 mg)以氯仿-甲醇(体积
比 60∶ 1→15 ∶ 1)梯度洗脱，再经 Sephadex LH-20
凝胶柱、反复硅胶柱色谱分离，得到化合物 4
(2. 1 mg)和 5(3. 3 mg)。
4 结构鉴定
化合物 1:白色粉末(氯仿) ，遇硫酸显紫色。
ESI-MS m/z:453. 4［M + Na］+，结合13C-NMＲ和
1H-NMＲ 谱推导其分子式为 C28H46O3。
1H-NMＲ
(500 MHz，CDCl3)δ:5. 22(1H，d，J = 5. 0 Hz，H-
7) ，5. 14(1H，dd，J = 7. 3，15. 2 Hz，H-22) ，5. 08
(1H，dd，J = 8. 0，15. 3 Hz，H-23) ，3. 91(1H，m，H-
3) ，3. 49(1H，d，J = 5. 0 Hz，H-6) ，0. 98(3H，s，H-
19) ，0. 94(1H，d，J = 6. 6 Hz，H-27) ，0. 83(3H，d，
J = 6. 8 Hz，H-28) ，0. 76(3H，d，J = 7. 2 Hz，H-
21) ，0. 74(3H，d，J = 7. 3 Hz，H-26) ，0. 52(3H，s，
H-18) ;13 C-NMＲ(125 MHz，CDCl3)δ:32. 8(C-
1) ，30. 4(C-2) ，67. 3(C-3) ，39. 3(C-4) ，76. 0(C-
5) ，73. 1(C-6) ，117. 5(C-7) ，143. 4(C-8) ，43. 2
(C-9) ，37. 0(C-10) ，22. 0(C-11) ，38. 9(C-12) ，
43. 7(C-13) ，54. 7(C-14) ，22. 9(C-15) ，27. 9(C-
16) ，56. 0(C-17) ，12. 2(C-18) ，18. 3(C-19) ，40. 4
(C-20) ，19. 6(C-21) ，132. 1(C-22) ，135. 5(C-
23) ，42. 8(C-24) ，33. 1(C-25) ，19. 9(C-26) ，21. 1
(C-27) ，17. 6(C-28)。上述数据与文献［9］报道
一致，故鉴定化合物 1 为 24Ｒ-ergosta-7，22-diene-
3，5，6-triol。
化合物 2:白色粉末(氯仿) ，遇硫酸显紫色。
ESI-MS m/z:315. 1［M + Na］+，［α］ = + 3. 3°
(c 0. 02，MeOH) ，结合 13 C-NMＲ 和 1H-NMＲ谱
推测其分子式为 C15 H16 O6。
1H-NMＲ (CDCl3，
500 MHz)δ:11. 34(1H，s，3-OH) ，6. 55(1H，d，
J = 2. 2 Hz，H-6) ，6. 46(1H，d，J = 2. 2 Hz，H-4) ，
6. 11(1H，d，J = 2. 0 Hz，H-6) ，4. 38(1H，dd，J =
2. 0，8. 0 Hz，H-5) ，3. 85 (1H，m，H-4) ，3. 85
(3H，s，OCH3) ，2. 30(1H，dd，J = 3. 7，12. 4 Hz，H-
3 α) ，2. 40(1H，dd，J = 3. 7，12. 4 Hz，H-3 β) ，
1. 58(3H，s，CH3) ;
13 C-NMＲ(CDCl3，125 MHz)
δ:134. 1(C-1) ，100. 4(C-2) ，166. 3(C-3) ，101. 5
(C-4) ，164. 4(C-5) ，103. 1(C-6) ，168. 2(C-7) ，
55. 9(8-OCH3) ，137. 4(C-1) ，82. 2(C-2) ，43. 0
(C-3) ，71. 8(C-4) ，73. 9(C-5) ，127. 4(C-6) ，
26. 9(7-CH3)。上述数据与文献［10］报道一致，
013 中 国 药 物 化 学 杂 志 第 23 卷
故鉴定化合物 2 为互隔交链孢霉素。
化合物 3:白色粉末(甲醇) ，遇硫酸显紫色。
ESI-MS m/z:301. 2［M + Na］+，［α］ = + 3. 6°
(c 0. 02，MeOH) ，结合13 C-NMＲ 和1H-NMＲ谱推
测其分子式为 C14 H14 O6。
1H-NMＲ(CD3OD，
500 MHz)δ:6. 52(1H，d，J = 2. 2 Hz，H-6) ，6. 29
(1H，d，J = 2. 2 Hz，H-4) ，6. 12(1H，d，J = 2. 6 Hz
H-6) ，4. 20(1H，dd，J = 2. 6，8. 0 Hz，H-5) ，3. 73
(1H，m，H-4) ，2. 15(1H，dd，J = 3. 7，12. 4 Hz，H-
3 α) ，2. 25(1H，dd，J = 3. 7，12. 4 Hz，H-3 β) ，
1. 55(3H，s，CH3) ;
13 C-NMＲ(CD3OD，125 MHz)
δ:134. 5(C-1) ，100. 2(C-2) ，165. 4(C-3) ，103. 9
(C-4) ，166. 9(C-5) ，104. 6(C-6) ，169. 8(C-7) ，
139. 4(C-1) ，83. 4(C-2) ，44. 6(C-3) ，72. 1(C-
4) ，74. 3(C-5) ，129. 9(C-6) ，26. 7(7-CH3)。
根据上述数据鉴定化合物 3 为 5-hydroxyepialt-
enuene。
化合物 4:白色粉末(氯仿) ，遇硫酸显紫灰
色。ESI-MS m/z:291. 1［M － H］－，［α］= + 1. 4°
(c 0. 02，MeOH) ，结合 13 C-NMＲ 和 1H-NMＲ谱
推测其分子式为 C15 H16 O6。
1H-NMＲ (CDCl3，
500 MHz)δ:11. 35(1H，s，3-OH) ，6. 56(1H，d，
J = 2. 3 Hz，H-6) ，6. 45(1H，d，J = 2. 3 Hz，H-4) ，
6. 10(1H，d，J = 2. 1 Hz，H-6) ，4. 48(1H，m，H-
5) ，4. 28(1H，m，H-4) ，3. 86(3H，s，OCH3) ，
2. 27(1H，dd，J = 3. 9，14. 10 Hz，H-3 α) ，2. 50
(1H，dd，J = 3. 9，14. 1 Hz，H-3 β) ，1. 67(3H，s，
CH3) ;
13 C-NMＲ(CDCl3，125 MHz)δ:134. 1(C-
1) ，100. 8(C-2) ，166. 0(C-3) ，100. 9(C-4) ，164. 0
(C-5) ，102. 7 (C-6) ，168. 4 (C-7) ，55. 6 (8-
OCH3) ，138. 1(C-1) ，80. 6(C-2) ，39. 7(C-3) ，
67. 0(C-4) ，67. 4(C-5) ，126. 9(C-6) ，27. 8(7-
CH3)。上述数据与文献［10］报道一致，故鉴定化
合物 4 为 5-epialtenuene。
化合物 5:白色粉末(甲醇) ，遇硫酸先显紫色
而后转成黄色。ESI-MS m/z:299. 0［M + Na］+，
［α］= + 5. 9°(c 0. 02，MeOH) ，结合13 C-NMＲ 和
1H-NMＲ谱推测其分子式为 C14 H12 O6。
1H-NMＲ
(CD3OD，500 MHz)δ:6. 45(1H，d，J = 1. 9 Hz，H-
4) ，6. 35(1H，d，J = 1. 4 Hz，H-3) ，6. 07(1H，d，
J =1. 9 Hz，H-6) ，4. 75(1H，s，H-5) ，3. 80(3H，s，
OCH3) ，1. 86(3H，d，J = 1. 2 Hz，CH3) ;
13 C-NMＲ
(CD3OD，125 MHz)δ:170. 2(C-1) ，94. 2(C-3) ，
150. 8(C-3a) ，103. 5(C-4) ，168. 5(C-5) ，101. 0
(C-6) ，159. 9(C-7) ，106. 5(C-7a) ，171. 4(C-2) ，
131. 4(C-3) ，202. 0(C-4) ，79. 7(C-5) ，13. 4
(CH3) ，56. 5(OCH3)。上述数据与文献［11 －
12］报道一致，故鉴定化合物 5 为篮毒菌素黄酮。
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(下转至第 320 页)
113第 4 期 靳鹏飞等:角果木内生真菌的代谢产物研究
Ｒecent progress of hepatitis virus C targets and
small molecule inhibitors
ZHU Shi-ping，ZHANG Wan-nian，SHENG Chun-quan*
(School of Pharmacy，Second Military Medical University，Shanghai 200433，China)
Abstract:In recent years，the infection caused by hepatitis C virus(HCV)is increasing． The current therapy
is in combination of pegylated interferon injection and ribavirin oral administration，while it is not much ef-
fective with lots of side effects． Thus，there is an emergent need to develop novel anti-HCV agents． With the
development of HCV biology，there is in-depth knowledge about HCV infection and replication，which is im-
portant to accelerate the process of new drug development． This review summarized recent progress of anti-
HCV drug targets and small molecule inhibitors． In particular，chemical structures，anti-HCV activity and
structure-activity relationships of HCV inhibitors are focused on．
Key words:hepatitis C virus;drug targets;
櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅
small-molecule inhibitors
(上接第 311 页)
Metabolites from the endophytic fungus of Ceriops tagal
JIN Peng-fei1，2，DAI Hao-fu2，ZUO Wen-jian2，ZENG Yan-bo2，GUO Zhi-kai2，MEI Wen-li2*
(1． College of Environment and Plant Protection，Hainan University，Haikou 570228，China;
2． Key Laboratory of Biology and Genetic Ｒesources of Tropical Crops，Ministry of
Agriculture，Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology，Chinese Academy
of Tropical Agriculture Sciences，Haikou 571101，China)
Abstract:To study the chemical constituents from the broth of endophytic fungus Penicillium sp． FJ-1 of Ce-
riops tagal，the constituents were isolated and purified by column chromatography，and their chemical struc-
tures were identified by physicochemical and spectral data． During our investigation on FJ-1，five compounds
were isolated． Their structures were identified as 24Ｒ-ergosta-7，22-diene-3，5，6-triol(1) ，altenuene(2) ，5-
hydroxyaltenuene(3) ，5-epialtenuene(4) ，and talaroflavone(5)by their physico-chemical properties and
spectral data． All compounds bave been isolated from this endophytic fungus for the first time，and the 1H
and 13C-NMＲ spectral data of compound 3 was first reported．
Key words:endophytic fungus;chemical constituent;Ceriops tagal;Penicillium sp．
023 中 国 药 物 化 学 杂 志 第 23 卷