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朱唇化学成分预实验及止血活性研究



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朱唇化学成分预实验及止血活性研究
罗泽萍 1,2 潘立卫 1,2
(1.河池学院化学与生物工程学院,广西 宜州 546300;
2.广西高校微生物及植物资源开发利用重点实验室,广西 宜州 546300)

【摘 要】目的:初步探讨朱唇可能的化学成分及研究其止血活性。方法:采用系统预实验法对朱唇的提取物可能含有的
化学成分进行初步研究。并通过体外促凝血实验,研究朱唇的止血活性。结果:朱唇中可能含有多糖、苷类、黄酮等丰富化学
成分。另外,朱唇提取物具有显著的止血作用。结论:初步鉴定朱唇含有丰富的活性成分,为深度研究和开发朱唇的植物资源
提供实验基础。朱唇提取物具有较好止血活性,为寻找新止血药物提供基础。
【关键词】朱唇;预实验;化学成分;止血活性
【中图分类号】R285.5 【文献标识码】A 【文章编号】1008-1151(2016)01-0038-03
Preliminary tests for chemical components and hemostatic activity
of Salvia coccinea L.
Abstract: Obiective: To identify the chemical components and hemostatic activity of Salvia coccinea L.. Methods:The extracted
from Salvia coccinea L. was studied using test tube method, the chemical components of Salvia coccinea L. were preliminarily
demonstrated . And the hemostatic active of Salvia coccinea L in vitro were observed by procoagulation. Results: Salvia coccinea L.
might exist variety of hemostatic effect in Salvia coccinea L., for example, polysaccharide, glycosides, flavonoids, etc. In addition, Salvia
coccinea L. has evident hemostatic function. Conclusion:Diverse chemical components exist in Salvia coccinea L., which provides
foundation for further study and application of Salvia coccinea L.. Diverse hemostasis natural products exist in Salvia coccinea L. extract,
which provide a basis for developing new hemostasis drug.
Key words: Salvia coccinea L.; preliminary test; chemical components; hemostasis

朱唇(Salvia coccinea L.)是唇形科鼠尾草属植物,原产于
美洲的一年生或多年生草本植物,该品种通常作为观赏植物,
在我国多地有栽培,如:广东、广西、陕西、浙江、上海、江
西、安徽等。朱唇全草均有药用价值,具有凉血、止血,清热
利湿等功效,可以用于治疗妇女血崩,高热及腹疼不适[1]等。现
代药理研究表明朱唇水溶性部位可明显提高小鼠耐缺氧能力[2]。
目前国内外对朱唇的研究主要集中在植物资源、组织培养和园
林景观等[3-6];而对其化学成分的研究甚少。本实验首次对朱唇
的化学成分进行初步研究。
出血是诸多疾病中常见并发症之一,出血过多甚至会导致
休克,存在生命危险,因此及时的进行止血显得尤为重要。目
前,止血药的需求和使用日益剧增,使得市场上对止血新药的
研发更加迫切,寻找更为廉价、安全可靠的止血药,是目前的
研究热点。为研究朱唇的止血作用,本实验通过家兔体外促凝
血实验研究朱唇的止血活性。旨在深入研究和开发新的止血药
物提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料仪器
朱唇采自广西都安县保安乡,经河池学院邓晰朝副教授
鉴定为唇形科鼠尾草属朱唇(Salvia coccinea L.);家兔由河池
学院药理实验室提供;D2KW-4 电子恒温水浴锅(北京中兴
伟业仪器有限公司)、WKH-1.7-A 烘箱(青州市精诚医药装备
制造有限公司)、JA2003B 电子天平(上海越平科技仪器有限
公司)、WFH-203 三用紫外分析仪(上海精科实业有限公司)、
WKF-180 万能粉碎机(青州市京城医药装备有限公司)、云南
白药标准品(云南白药股份有限公司)、TDL-5A 离心机(上
海安宁科学仪器厂)。
1.2 实验方法
朱唇药材粗粉制备后采用试管预试法进行实验。根据供
试液可能含有的化学成分类型的理化性质,选择其特有的化
总第 18 卷 197 期 大 众 科 技 Vol.18 No.1
2016 年 1月 Popular Science & Technology January 2016
【收稿日期】2015-12-15
【基金项目】广西高校科学技术研究项目(KY2015LX366);河池学院校级青年科研课题立项项目(2014QN-N002);
生物化工广西重点学科(河池学院)建设基金(201308)。
【作者简介】罗泽萍(1987-),女,广西梧州人,河池学院讲师,研究方向为生化药理学。
【通讯作者】潘立卫(1987-),男(壮族),广西都安人,河池学院实验师,研究方向为中草药有效成分研究。
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学反应如颜色反应、沉淀反应等做定性试验。
1.2.1 样品制备
取一定量的朱唇,阴干,粉碎成粗粉即为实验品粗粉。
1.2.2 水供试液制备
取朱唇药材粗粉 10g,各两份,分别加水 100ml,冷浸 12
小时。取其中一份滤液做为冷水供试液。另一份于 60℃水浴
上加热 30 分钟,过滤,即得。
1.2.3 醇供试液制备
取朱唇药材粗粉 10g,加 10 倍量的 95%乙醇,经水浴回
流 1 小时,过滤,即得醇供试液。取一部分滤液浓缩成膏状,
加 5%HCl 溶解,过滤,得到乙醇酸水供试液。
1.2.4 石油醚供试液制备
取朱唇粗粉 1g,加 10ml 石油醚,密封放置 2~3 小时,
过滤即得石油醚供试液。
1.2.5 朱唇水提取物的制备
称取朱唇粗粉 100 g,加入 10 倍量蒸馏水,煎煮三次,
每次 1 h,合并提取液,浓缩干燥,即得朱唇水提物。
1.2.6 朱唇醇提物的制备
将朱唇药材粉碎,得朱唇粗粉,称取朱唇药粉 100 g,用
10 倍量 75 % 乙醇回流提取三次,每次 1 h,合并提取液,浓
缩干燥即得。
1.2.7 氯化钙溶液配制[7 ,8]
准确称取取无水氯化钙 1.400 g,加去离子水定容至 50
mL 混匀。
1.2.8 抗凝血液的制备[7 ,8]
准确称取 1.900g 枸橼酸钠,加去离子水定容至 50mL 混
匀,然后与新鲜家兔血按 1∶9 比例轻轻混匀,待用。
1.2.9 去钙血浆的制备[7 ,8]
取抗凝血液 1500 r/min 离心 30 min 即得。
1.2.10 凝血时间(Clotting time,CT)的测定
采用凝血板法和试管法[7,8]测定,所取指标为凝血时间。
设立空白对照及云南白药阳性对照,每样品进行 6 次平行实
验,并计算平均值。下同。
1.2.11 血浆复钙时间(recovery-calcium time,RT)的测定
采用试管法[9]进行测定。
1.2.12 统计方法
实验数据以(均数±标准差)即( ) 表示,组间比较采用
t 检验,数据采用 Microsoft Excel 统计软件进行分析。凝血
时间缩短率计算方法如下:


2 结果与分析
2.1 水提取液预试
冷水供试液做氨基酸、多肽、蛋白质成分检查,热水供
试液做糖、多糖、皂苷、苷类、鞣质、有机酸成分检查。结
果见表 1。

表 1 水提取液预试结果
检查项目 试剂或反应名称 现象 结论
茚三酮试剂 颜色无明显变化 -
双缩脲反应 颜色无明显变化 - 氨基酸、多肽、蛋白质 蛋白质沉淀反应 无↓ -
Fehling 反应 棕红色↓ + 糖、多糖、苷类 Molish 反应 紫红色环 +
皂 苷 泡沫试验 泡沫不多且明显减少,最后消失 -
氯化钠明胶反应 白色沉淀 + 鞣 质 1%FeCl3 试剂 呈绿、蓝色 +
有机酸 PH 试纸 溴甲酚绿试验
PH=6
蓝色背景显黄色斑点


(“↓”:沉淀,“+”:正反应,有该成分,“—”:负反应,无该成分。
下同)
2.2 乙醇提取液预试
乙醇供试液做黄酮、蒽醌、香豆素、植物甾醇、强心苷
的检查,乙醇酸水供试液做生物碱检查,结果见表 2。

表 2 乙醇提取液预试结果

2.3 石油醚提取液预试
石油醚供试液分别做挥发油和油脂检查,结果见表 3。

表 3 石油醚提取液预试结果
检查项目 试剂或反应名称 现象 结论
挥发油和油脂 滤纸试验 滤纸有油斑,加热挥散 有油脂挥发油

2.4 朱唇提取物凝血板法实验结果

表 4 凝血板法测定凝血时间(n=6,±S)
样品(0.5%)
(0.5%) 空白对照 云南白药对照 醇提物 水提物
T(min) 11.14±0.24 10.16±0.18** 9.24±0.49**## 10.90±0.40
注:T(凝血时间);醇提物(朱唇乙醇提取物);水提物(朱唇水提
取物);与空白组比较*P<0.05,**P<0.01;水提物与醇提物相比#P>0.05,
##P<0.05;下同。




检查项目 试剂或反应名称 现象 结论
1%三氯化铝试剂 黄色荧光 +
盐酸-镁粉反应 呈红色 + 黄酮类
氨熏反应 黄色荧光 +
1%NaOH 液 红色加过氧化氢加热红色不退加酸退 + 蒽醌类 1%乙酸镁试剂 呈红色 +
氯化钠明胶反应 白色↓ + 酚类、鞣质 1%FeCl3 试剂 绿色 +
异羟肟酸铁反应 浅绿色→深紫色 +
开环-闭环反应 深红色(加 3%Na2CO3 即显深红色) + 内酯、香豆素
荧光反应 绿色荧光 +
3,5-二硝基苯甲酸反应 紫红色 +
碱性苦味酸反应 浅绿色→橙红色 + 强心苷
亚硝酰铁氰化钠反应 紫红色 +
醋酐-浓硫酸反应 黄→红→紫→青→污绿色 + 甾体、三萜类 氯仿-浓硫酸反应 氯仿层暗红色,硫酸层绿色荧光 +
碘化汞钾试剂 浅黄色↓ +
碘化铋钾试剂 棕黄色↓ + 生物碱
硅钨酸试剂 棕色↓ +
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图 1 凝血板法测定凝血时间缩短率

由表 4、图 1 可以看出,用凝血板法测定朱唇提取物的凝
血作用,与空白组对照,其水提物和醇提物均明显缩短
(P<0.01),朱唇醇提物比水提物凝血时间短(P<0.01),说明
醇提物凝血效果较佳。凝血时间缩短率顺序:醇提物(17.03%)
>云南白药(8.74%)>水提物(2.10%),表明朱唇提取物能明
显缩短凝血时间,有较好的止血作用。
2.5 朱唇提取物试管法实验结果

表 5 试管法测定凝血时间(n=6, x ±S)
样品(0.5%)
(0.5%) 空白对照 云南白药对照 醇提物 水提物
T(min) 2.49±0.28 2.03±0.14**# 2.01±0.12* 2.07±0.12*


图 2 试管法测定凝血时间缩短率

由表 5、图 2 可以看出,用凝血板法测定朱唇提取物的凝
血作用,与空白组对照,其提取物具有显著差异(P<0.05),
朱唇醇提物与水提物凝血效果相当,无显著性差异(P>0.05)。
凝血时间缩短率:云南白药(18.60%)>水提物(16.79 %)>
醇提物(15.85%),表明朱唇提取物能明显缩短凝血时间,有
较好的止血作用。

表 6 血浆复钙时间测定(n=6,±S)
样品(0.5%)
(0.5%) 空白对照 云南白药对照 醇提物 水提物
T(min) 2.49±0.282 2.03±0.138** 5.97±0.27**## 5.27±0.39**










图 3 血浆覆盖时间测定凝血时间缩短率

3 讨论
化学成分预实验结果表明,朱唇中可能含有多糖、苷类、
黄酮类等化学成分。本实验为进一步研究该植物化学成分提
取、分离、纯化和相关药理活性提供一定科学依据,拓宽朱
唇药用资源的开发利用。
凝血时间是指在动物血液在机体外完全凝固所需要的时
间[10],常用的测定凝血时间方法有凝血板法、试管法、毛细
玻管法。凝血板法和试管法测定凝血时间值的原理为体外血
液中的Ⅻ因子被异物表面(凝血板表面、试管内表面)活化,
由于血小板因子及钙离子的作用,发生复杂的连锁反应,生
成的纤维蛋白可抑制机体出血[11]。本文采用凝血板法和试管
法对鸡体外血液,设立空白对照组及云南白药对照组对朱唇
提取物进行凝血时间比较,来判断止血效果。结果发现朱唇
提取物能明显缩短凝血时间,有较好的止血作用(P<0.05),
其中凝血板法测定凝血时间结果显示醇提取凝血效果比水提
物好(P<0.05)。血浆复钙时间是指去掉钙的血浆中重新加入
钙,使内源性凝血过程重现,其原理是离体血液经过抗凝剂
二水合柠檬酸三钠处理,离心后血浆中缺少钙离子,凝血功
能失效,再加入钙离子可令其还原,但此时凝血因子减少,
凝血时间会缩短,即血浆复钙时间减短[12]。本研究发现朱唇
提取物血浆复钙时间与空白组对照,其醇提物具有极显著差
异(P<0.05),朱唇醇提物比水提物有较好的凝血效果
(P<0.05)。结果表明朱唇提取物具有止血作用,但使去钙血
浆恢复凝血作用的能力较弱。本实验主要考察了朱唇提取物
的止血活性,而其止血活性物质结构还未明确,有待进一步
的分离纯化及结构鉴定,从而明确止血的物质基础。同时,
以价格低廉的朱唇为原料的止血药具有广泛的开发前景,充
分开发利用了野生中草药资源,拓宽止血药领域。

【参考文献】
[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志(66)[M].
北京:科学出版社,1977.
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及药用资源[J].时珍国医国药,2008,4(19):904-908.
(下转第 49 页)
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±(0.5%×20MΩ)=±0.10MΩ,即半宽区间 0.10MΩ
±(0.5%×50MΩ)=±0.25MΩ,即半宽区间 0.25MΩ
在测量 100MΩ、200MΩ、500MΩ时其允许误差限为:
±(1.0%×100MΩ)=±1.0MΩ,即半宽区间 1.0MΩ
±(1.0%×200MΩ)=±2.0MΩ,即半宽区间 2.0MΩ
±(1.0%×500MΩ)=±5.0MΩ,即半宽区间 5.0MΩ
在区间内可认为均匀分布,覆盖因子 k 取 3 ,标准不确
定度分别为:
0.1MΩ:u(Rs)= 0.0002/ 3 =0.0001MΩ
0.2MΩ:u(Rs)= 0.0004/ 3 =0.0002MΩ
0.5MΩ:u(Rs)= 0.0010/ 3 =0.0006MΩ
1MΩ:u(Rs)=0.002/ 3 =0.001MΩ
2MΩ:u(Rs)= 0.004/ 3 =0.002MΩ
5MΩ:u(Rs)= 0.010/ 3 =0.006MΩ
10MΩ:u(Rs)=0.05/ 3 =0.029MΩ
20MΩ:u(Rs)=0.10/ 3 =0.058MΩ
50MΩ:u(Rs)=0.25/ 3 =0.14MΩ
100MΩ:u(Rs)=1.0/ 3 =0.58MΩ
200MΩ:u(Rs)=2.0/ 3 =1.15MΩ
500MΩ:u(Rs)=5.0/ 3 =2.89MΩ
6 合成标准不确定度的评定
输入量 Rx 与 Rs彼此独立不相关,所以合成标准不确定度
可按下式得:
=Δ )(2 Ruc )()( 22 sx RuRu +
0.1MΩ: =Δ )( Ruc 0001.0001.0
22+ =0.001MΩ
0.2MΩ: =Δ )( Ruc 0002.0002.0
22+ =0.002MΩ
0.5MΩ: =Δ )( Ruc 0006.0005.0
22+ =0.005MΩ
1MΩ: =Δ )( Ruc 001.0005.0
22+ =0.005MΩ
2MΩ: =Δ )( Ruc 002.0008.0
22+ =0.008MΩ
5MΩ: =Δ )( Ruc 006.0012.0
22+ =0.013MΩ
10MΩ: =Δ )( Ruc 029.0041.0
22+ =0.050MΩ
20MΩ: =Δ )( Ruc 058.0066.0
22+ =0.088MΩ
50MΩ: =Δ )( Ruc 14.044.0
22+ =0.46MΩ
100MΩ: =Δ )( Ruc 58.079.0
22+ =0.98MΩ
200MΩ: =Δ )( Ruc 15.187.0
22+ =1.44MΩ
500MΩ: =Δ )( Ruc 89.299.0
22+ =3.05MΩ
7 扩展不确定度
U =k cu ,取 k =2,得
0.1MΩ:U = k cu =2×0.001=0.002MΩ
0.2MΩ:U = k cu =2×0.002=0.004MΩ
0.5MΩ:U = k cu =2×0.005=0.010MΩ
1MΩ:U = k cu =2×0.005=0.010MΩ
2MΩ:U = k cu =2×0.008=0.016MΩ
5MΩ:U = k cu =2×0.013=0.026MΩ
10MΩ:U = k cu =2×0.050=0.100MΩ
20MΩ:U = k cu =2×0.088=0.176MΩ
50MΩ:U = k cu =2×0.46=0.92MΩ
100MΩ:U = k cu =2×0.98=1.96MΩ
200MΩ:U = k cu =2×1.44=2.88MΩ
500MΩ:U = k cu =2×3.05=6.10MΩ
换算至相对扩展不确定度:
0.1MΩ:Urel=2.0% 0.2MΩ:Urel=2.0%
0.5MΩ:Urel=2.0% 1MΩ:Urel=1.0%
2MΩ:Urel=0.8% 5MΩ:Urel=0.5%
10MΩ:Urel=1.0% 20MΩ:Urel=0.9%
50MΩ:Urel=1.8% 100MΩ:Urel=2.0%
200MΩ:Urel=1.4% 500MΩ:Urel=1.2%
8 校准和测量能力(CMC)
10 级绝缘电阻表是使用 0.2 级兆欧表检定装置校准的最
佳被校绝缘电阻表,因此该项目的 CMC 为:(0.1~500)MΩ:
Urel=0.5%~2.0%。

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