全 文 :收稿日期:2010-05-04; 修订日期:2010-10-09
作者简介:韦建华(1972-) ,女(壮族) ,广西都安人,现任广西中医学院药
学院讲师,硕士学位,主要从事中药民族药化学成分和质量标准研究工
作.
倒地铃化学成分预实验
韦建华1,蔡少芳1,陈 君2
(1.广西中医学院,广西 南宁 530001; 2.广西柳州医学高等专科学校,广西 柳州 545006)
摘要:目的 采用系统预试法对倒地铃全草可能的化学成分进行预实验,初步探索倒地铃的化学成分。方法 采用试管反
应法、纸反应法,对倒地铃全草水、95%乙醇、石油醚提取物进行研究,通过多种指示剂和显色剂的显色反应或沉淀反应,
对倒地铃可能含有的化学成分进行初步研究。结果 倒地铃全草可能含有氨基酸、糖、苷类、有机酸、黄酮类、香豆素、内酯
类、三萜类、油脂等化学成分。结论 初步确定倒地铃含有多种有效成分,为倒地铃的进一步开发利用提供实验基础。
关键词:倒地铃; 预实验; 化学成分
DOI标识:doi:10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2011. 03. 109
中图分类号:R284. 1 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2011)03-0754-01
倒地铃是无患子科植物倒地铃 Cardiospermum halicacabum
L.干燥全草,主要分布广东、广西、福建、台湾等西南各地,具有清
热、利尿、凉血、解毒等功效,民间多用于治疗肺炎、黄疸、糖尿病
等[1]。目前国内外对倒地铃全草的化学成分的研究暂处于基础
研究,未见有倒地铃全草化学成分研究的文献报道。Ahrned L,
等人从该植物的种子中分离得到:花生酸(arachidic acid) ,亚油
酸(linoleic acid)、硬脂酸(stearic acid)、β - 谷甾醇(β - sito -
sterol) ,木犀草素 - 7 - O -葡萄糖醛酸苷(luteolin - 7 - O - glucu-
ronide)[2],Chandra T等人对倒地铃的乙醇和水提取物进行药理
研究,发现两种提取物能稳定炎症期间的溶酶体膜,抑制溶酶体
内酶的漏出,从而阻止细胞内和细胞外的损伤[2]。但此前未见
倒地铃全草相关化学成分的文献报道,故本实验首次对倒地铃全
草的化学成分进行预实验,以明确其可能的化学成分,为进一步
开发和利用倒地铃提供一定依据。
1 材料与仪器
1. 1 药材 倒地铃采于广西南宁市郊区,经广西中医学院中药鉴
定教研室廖月葵高级实验师鉴定为无患子科植物倒地铃 Cardio-
spermum halicacabum L.干燥全草。
1. 2 试剂 95%乙醇、石油醚(60 ~ 90℃) (分析纯、国药控股) ;
其余试剂(茚三酮试剂、双缩脲试剂、Fehling试剂、氯化钠明胶试
剂、1% FeCl3 试剂、溴甲酚绿试剂、盐酸 -镁粉试剂、三氯化铝试
剂、乙酸镁试剂、异羟肟酸铁试剂、耦合试剂、亚硝酰基铁氰化钠
试剂、碱性苦味酸试剂、碘化铋钾试剂、硅钨酸试剂、碘化汞钾试
剂)自制。
1. 3 仪器 电热恒温水浴锅(北京) ;ZF - 2 三用紫外仪(上海市
安亭电子仪器厂)。
2 方法与结果
2. 1 样品的制备 取一定量的倒地铃全草,自然晒干,粉碎成粗
粉即为实验样品粗粉。
2. 1. 1 水供试液制备 称取倒地铃药材粗粉 15 g,置于具塞三角
锥型瓶中,加入 150 ml水,室温浸泡 24 h,滤过,取 20 ml 滤液作
为冷水提取液。余液及残渣在 50 ~ 60℃水浴上温浸 0. 5 h,抽
滤,得热水提取液。
2. 1. 2 乙醇供度液、酸水供试液的制备 取倒地铃药材粗粉 15
g,加入 10 倍量 95%的乙醇,于水浴加热回流 1 h,过滤,滤液分成
两部分。一份作为乙醇供试液;一份将乙醇液浓缩成膏状(至无
醇味) ,加入 5%盐酸使溶解,过滤,得酸水供试液。
2. 1. 3 石油醚供试液制备 取实验品粗粉 5 g,置于具塞三角锥
型瓶中,加入石油醚 15 ml,室温放置 3 h 后滤过,滤液即为石油
醚供试液。
2. 2 化学成分预试验
2. 2. 1 倒地铃水提取液预实验 冷水提取液作氨基酸、多肽、蛋
白质的检查,热水提取液作糖、多糖、苷类、皂苷、鞣质、有机酸等
检查。结果见表 1。
表 1 倒地铃水提取液预试结果
检查项目 试剂或反应名称 现象 结论
氨基酸 茚三酮试剂 颜色无明显变化 -
多肽 双缩脲反应 浅棕色→深绿色
蛋白质 蛋白质沉淀反应 无↓ -
糖 Fehling反应 棕红色↓ +
多糖 ↓增加 +
苷类 Molish反应 紫红色环 +
皂 苷 泡沫试验 泡沫不多且明显减少 -
鞣 质 氯化钠明胶反应 无↓ -
1% FeCl3 试剂 颜色无明显变化 -
有机酸 pH试纸 pH5 +
溴甲酚绿试验 黄色斑点 +
2. 2. 2 倒地铃乙醇提取液预试验 乙醇供试液作黄酮、蒽醌、酚、
苷、香豆素、内酯、萜类、强心苷、甾体等检查,酸水供试液作生物
碱检查。结果见表 2。
表 2 倒地铃乙醇提取液预试结果
检查项目 试剂或反应名称 现象 结论
黄酮类 1%三氯化铝试剂 黄色荧光 +
盐酸 -镁粉反应 浅绿色→深绿色 +
氨熏试验 +
蒽醌类 1% NaOH液 逐渐变红,30%H2O2不加热能褪色 -
1%乙酸镁乙醇液 棕绿色不变 -
酚类 1%三氯化铁乙醇液 颜色无明显变化 -
鞣质 氯化钠明胶试验 无↓ -
内酯、香豆素类 异羟肟酸铁反应 浅绿色→深紫色 +
耦合反应 深红色 +
荧光试验 蓝色荧光 +
强心苷 3,5 -二硝基苯甲酸反应 出现混浊,颜色加深 +
亚硝酰基铁氰化钠反应 颜色加深后渐褪色 +
碱性苦味酸反应 橙黄色 +
甾体、萜类 醋酐 -浓硫酸反应 黄→红→紫→青→污绿色 +
氯仿 -浓硫酸反应 分层面有棕色环 +
生物碱 碘化汞钾试剂 无↓ -
碘化铋钾试剂 无↓ -
硅钨酸试剂 无↓ -
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时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 3 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL. 21 NO. 3
2. 2. 3 倒地玲石油醚提取液预试验 石油醚供试液作油脂、挥发
油检查,结果见表 3。
表 3 倒地铃石油醚提取液预试结果
检查项目 试剂或反应名称 现象 结论
挥发油和油脂 滤纸试验 有油斑,加热不能挥散 含有油脂
3 讨论
以上实验结果表明,倒地铃全草中可能含有糖、多糖、苷类、
有机酸、黄酮类、香豆素、内酯类、三萜类、油脂等化学成分。
本文首次对倒地铃全草进行了化学成分预实验,初步确定了
其可能含有的化学成分,为进一步进行该植物生物活性成分的确
定、提取、分离研究提供了研究基础。
参考文献:
[1] 江苏新医学院.中药大辞典[M].上海:上海人民出版社,1977: .
[2] 《中华本草》编委会.中华本草[M]. 上海:上海科技出版社,1999:
.
收稿日期:2009-10-27; 修订日期:2010-10-24
作者简介:周 毅(1974-) ,男(汉族) ,江西景德镇人,现任南方医科大学
讲师,硕士学位,主要从事制剂的现代化研究工作.
大孔吸附树脂分离纯化马齿苋总黄酮的工艺研究
周 毅1,曾少娴2,王成蹊1,李悦山2,张 超2
(1.南方医科大学,广东 广州 510105; 2.广州医学院,广东 广州 510182)
摘要:目的 研究大孔吸附树脂分离纯化马齿苋总黄酮的工艺。方法 以总黄酮收率,比吸附量,比解析率和抗氧化特性
等为指标,从 5 种大孔树脂和 1 种聚酰胺树脂中筛选最适宜纯化的树脂,并考察其工艺条件。结果 马齿苋的提取工艺为
每次加 20 倍的 70%乙醇溶液,提取 2 次,提取 60 min /次。HPD - 600 型大孔树脂分离纯化马齿苋总黄酮为最佳,其工艺
条件为:上样液浓度 1. 5 mg /ml,流速 1. 5 ml /min,先用 9 BV的纯水洗脱杂质,再用 70%的乙醇洗脱;得率可达 78. 234%。
结论 HPD - 600 树脂分离纯化马齿苋总黄酮效果较好,工艺的重复性和稳定性较高,适合于工业化生产。
关键词:马齿苋; 树脂吸附; 总黄酮; 紫外分光光度法
DOI标识:doi:10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2011. 03. 110
中图分类号:R284. 1 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2011)03-0755-03
马齿苋(Purslane)又名马齿菜、蚂蚁菜、长寿菜、五行草等,属
马齿苋科一年生肉质草本植物。它是我国传统中药,始载于《本
草经集注》。据《本草纲目》记载,临床可用于“散血消肿,利肠滑
胎,解毒通淋,治产后虚汗”[1]。其性酸、寒,全草可作为药用,无
毒、无副作用,具有清热解毒、散血消肿、杀虫杀菌、利水去湿、消
炎利尿的功能[2]。据文献报道其化学组成复杂多样,其所含有
的黄酮类活性成分具有降低血脂、降低血粘度、有效减轻主动脉
壁脂质沉积、抑制动脉粥样硬化作用[3]。目前有关马齿苋工艺
报道甚多,但其工艺纯化还不够完善。本实验采用正交设计法,
考察了马齿苋的提取工艺;以总黄酮为考察指标,并结合抗氧化
特性,从 5 种大孔树脂和 1 种聚酰胺树脂中筛选最适宜纯化的树
脂,并考察其工艺条件。
1 仪器与试药
TU - 1201 型紫外分光光度计(北京分析仪器厂) ;芦丁对
照品(中国药品生物制品检定所,批号:008029705) ;大孔吸附树
脂 D101,AB - 8,HPD - 500 (南开大学化工厂) ;S - 8,D - 140
(成都晨光化工研究所) ;聚酰胺树脂[中国医药集团上海化学试
剂公司产品(50 ~ 60 目) ];马齿苋药材购于广州市清平药材市
场,经广州医学院药学系张建业博士鉴定,为马齿苋科植物马齿
苋(Purslane)的干燥全草;其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 芦丁标准曲线的绘制 采用 NaNO2 - Al(NO3)3 - NaOH 法
测定总黄酮[3]。精确称取芦丁标准品 8mg,置于 50ml量瓶中,加
60%乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得芦丁标准溶液。
分别取上述芦丁标准溶液 0. 5,1. 0,2. 0,3. 0,4. 0,5. 0 ml 于
6 只 10 ml容量瓶中,分别加入 60%乙醇溶液补充至 5. 00 ml。先
分别加入 5% NaNO2 溶液和 10% Al(NO3)3 溶液各 0. 3 ml,摇
匀,放置 6 min后,再分别加入 1. 0 mol /L 溶液 4. 0 ml,用水稀释
至 10. 0 ml,摇匀,放置 10 ~ 15 min后,在 λ = 510 nm处测定吸光
度 A。
用最小二乘法进行线性回归,求得芦丁浓度(C)与吸光度
(A)的关系曲线的回归方程式为 C = 0. 094 8A + 0. 000 6,相关系
数 R2 = 0. 999 1,说明芦丁在 0. 007 ~ 0. 086 4 mg /ml 范围内具有
良好的线性关系,可以作为马齿苋总黄酮含量的测定方法。
2. 2 提取工艺的研究
2. 2. 1 马齿苋药材预处理 取粉碎后的马齿苋粉末适量包好,置
于索氏提取器内乙醚 55℃直接加热回流抽提脱脂,大约 2 h至抽
提液呈无色为止,脱脂后马齿苋挥干备用。
2. 2. 2 样品的制备 分别称取药材 9 份,每份 1 g,精密称定,按
L9 (34)正交表制备样品提取液,水浴挥干,定容到 50 ml容量瓶
中,再取 1 ml稀释到 10 ml,过滤,备用;按“2. 1”项下方法测试。
根据稀释倍数,求出浸膏所含的总黄酮重量,总黄酮得率为求得
的总黄酮重量占 1 g生药的百分含量[4]。
2. 2. 3 正交实验 以溶剂类型、提取时间、提取次数和液料比为
考察因素,每因素 3 水平,采用 L9(3
4)正交表安排实验。见表 1。
研究提取条件对提取效果的影响的大小,并确定最佳工艺。见
表 2 ~ 3。
表 1 因素与水平
水平
A
溶剂
B
提取时间 t /min
C
提取次数
D
液料比
1 70%乙醇 30 1 10:1
2 甲醇 60 2 20:1
3 50%乙醇 90 3 30:1
由直观分析得知各因素对结果影响大小的顺序依次是:D→
A→C→B,4 个因素均取最高水平时,黄酮类物质提取率最大,但
从实际操作及前述单因素试验结果两方面考虑,增加液料比意味
着溶剂用量的增加和后续的溶剂回收能耗增大,这些均会使成本
提高,另外试验结果也表明液料比取第 2 水平(20∶ 1)与第 3 水
平(30∶ 1) ,黄酮类物质提取率变化不大。因此,液料比取 D2,即
20∶ 1。提取时间由 B2(60 min)延长到 B3(90 min) ,黄酮提取率
变化也不大,所以选 B2(60 min)为宜。综合以上分析,最佳提取
条件为 A1B2C2D2,即物料重 20 倍体积 70%乙醇,回流提取 2 次,
60 min /次。
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL . 22 NO. 3 时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 3 期