全 文 ：檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
制试验条件，并以相同条件制备的空白血浆为对照。
在试验过程中，发现粗制胰酶解物的抗凝活性
与质量浓度呈现出正相关的趋势，但二者之间的量
效关系尚待进一步试验证明。精制后的胰酶解物经
过 MALDI-TOF-MS检测，在 ＜ 1 000 Da 处出现 3 个
主要的分子离子峰群，结合前期理化定性分析，推测
其为相对分子质量 850 ～ 950 Da的多肽类成分。
［参考文献］
［1］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典． 一部［S］． 北
京:中国医药科技出版社，2010:18．
［2］ 李卫星，王中枢． 土鳖血纤维蛋白溶酶原激活物样成
分的研究［J］． 生物化学与生物物理学报，1989，21
(4) :262．
［3］ 卢颖，江佩芬．土鳖虫化学成份的研究［J］．中国中药
杂志，1992，17(8) :487．
［4］ 王克夷．开发小肽筛选新药［J］．中国生化药物杂志，
2003，24(1) :48．
［5］ 周瑞玲，陈玉兴，曾晓会，等． 土鳖虫多肽对家兔血瘀
模型的影响［J］． 中国实验方剂学杂志，2005，11
(6) :51．
［6］ 徐忠，薄凯． 小麦麸皮木瓜蛋白酶法提取工艺研究
［J］． 哈尔滨商业大学学报:自然科学版，2007，23
(6) :729．
［责任编辑 仝燕］
［收稿日期］ 20120828(012)
［第一作者］ 张可锋，硕士，从事生药质量及活性成分药效研究，E-mail:svidy@ 163． com
［通讯作者］ * 段小群，教授，博士，硕士生导师，从事药物开发与药理研究，E-mail:xueshengcailiao@ 163． com
朝天罐中总黄酮的提取工艺优选
张可锋1，高雅2，段小群1*
( 1. 桂林医学院，广西 桂林 541004; 2. 桂林医学院附属医院，广西 桂林 541001)
［摘要］ 目的:优选朝天罐中总黄酮的提取工艺。方法:采用紫外分光光度法测定总黄酮含量，以总黄酮得率为指标，通
过正交试验考察提取时间、乙醇体积分数及料液比对总黄酮提取工艺的影响。结果:最佳提取工艺为加 20 倍量 75%乙醇提
取 3 次，每次 1 h，总黄酮得率 1. 83%。结论:该优选工艺简单可行，可推广使用，为朝天罐资源的充分利用提供了实验依据。
［关键词］ 朝天罐;总黄酮;提取;正交设计
［中图分类号］ R283. 6 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)03-0055-03
Optimization of Extracting Technology of Total Flavonoids
from Osbeckia opipara
ZHANG Ke-feng1，GAO Ya2，DUAN Xiao-qun1*
(1. Guilin Medical University，Guilin 541004，China;
2. Affiliated Hospital of Guilin Medical College，Guilin 541001，China)
［Abstract］ Objective:To optimize extraction technology of total flavonoids in Osbeckia opipara．
Method:The content of total flavonoids was determined by UV spectrophotometry，with yield of total flavonoids as
index，influence of extraction time，solid-liquid ratio and ethanol concentration on extraction technology of total
flavonoids was investigated by orthogonal design． Result:The best extraction technology was as following:
extracted 3 times with 20 times the amount of 75% ethanol，1 h each time，yield of total flavonoids 1. 83% ．
Conclusion:This optimized technology was simple and feasible， it provide experimental evidence for fully
utilization of O． opipara resources．
［Key words］ Osbeckia opipara;total flavonoids;extraction;orthogonal design
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第 19 卷第 3 期
2013 年 2 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 3
Feb．，2013
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2013.03.030
朝天罐分布于我国贵州、广西、台湾、长江流域
各省及越南、泰国等国家，为广西少数民族地区常用
本草药材［1］。主要以根入药，又名罐子草根，其味
甘、微苦，性平，归肾、大肠经，具有益肾、止血、解毒
等功效，主治腰膝酸软，咯血，痢疾，咽喉痛等;亦可
全株入药，用于治疗小儿风热、月经不调、癌症等
症［2］。本课题组研究发现，朝天罐抗炎镇痛作用的
药效物质主要是黄酮类物质［3］，目前尚无有关朝天
罐药材总黄酮提取工艺的报道，因此，本试验运用正
交试验对朝天罐中总黄酮成分的提取工艺进行考
察，为更有效地开发利用朝天罐资源提供实验依据。
1 材料
UV2550 型紫外分光光度计(日本岛津公司) ，
BT224S型电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有
限公司) ，720060GN 型单道微量可调移液枪(芬兰
Thermo Finnpipette) ，芦丁对照品(批号 10080-9705，
中国药品生物制品检定所) ，水为超纯水，试剂均为
分析纯。朝天罐新鲜药材购于桂林药材市场，经桂
林医学院生药学教研室杜泽乡副教授鉴定为为野牡
丹科植物朝天罐 Osbeckia opipara C． Y． Wu et C．
Chen的干燥根，粉碎，备用。
2 方法与结果［4-6］
2. 1 总黄酮含量测定
2. 1. 1 检测波长的选择 取适量芦丁对照品与朝
天罐样品溶液，分别置于 5 mL量瓶中，加 75%乙醇
至 1. 6 mL，加 50 g·L －1亚硝酸钠溶液 0. 2 mL，摇匀，
放置 5 min;加 100 g·L －1硝酸铝溶液 0. 2 mL，摇匀，
放置 6 min;加入 40 g·L －1氢氧化钠溶液 2 mL，用水
定容至刻度，摇匀，放置 15 min 显色，立即测定。于
200 ～ 800 nm扫描，结果表明对照品与样品溶液在
505 nm 处均有最大吸收，故选择 505 nm 为检测
波长。
2. 1. 2 标准曲线的绘制 精密称定芦丁对照品
5. 17 mg，置 5 mL 量瓶中，加 75%乙醇至刻度，摇
匀，得对照品储备液。精密量取储备液 0. 04，0. 08，
0. 16，0. 24，0. 32，0. 40 mL，分别置 5 mL 量瓶中，按
2. 1. 1 项下方法显色，自“加 75%乙醇至 1. 6 mL”
起，依法测定吸光度(A) ，以 A 为纵坐标，质量浓度
为横坐标，得回归方程 A = 19. 79C + 0. 003 4(r =
0. 999 9) ，线性范围 8. 27 ～ 82. 72 mg·L －1。
2. 1. 3 供试品溶液的制备 取朝天罐药材粉末
(60 目)0. 2 g，精密称定，加入 75%乙醇 10 mL，水
浴回流提取 1. 5 h，重复 2 次，过滤，滤渣用 75%乙
醇洗涤，合并并浓缩滤液，置于 10 mL量瓶中，放冷，
加 75%乙醇定容至刻度，摇匀，即得。
2. 1. 4 稳定性试验 精密量取朝天罐供试品溶液
0. 5 mL，按 2. 1. 1 项下方法操作，自“置 5 mL 量瓶
中”起，显色后每隔 5 min 测定 A，结果供试品溶液
在 30 min内稳定性良好，RSD 3. 09%。
2. 1. 5 精密度试验 取同一对照品溶液 0. 5 mL，
按 2. 1. 1 项下方法操作，自“置 5 mL 量瓶中”起，显
色后测定 A，RSD 0. 18%(n = 6) ，表明仪器精密度
良好。
2. 1. 6 重复性试验 精密称取同一批样品 6 份，每
份约 0. 2 g，按 2. 1. 3 项下方法制备供试品溶液，每
份精密量取 0. 5 mL，按 2. 1. 1 项下方法进行显色，
测定 A，计算总黄酮平均质量分数为 1. 90%，RSD
2. 33%。表明该方法重复性良好。
2. 1. 7 加样回收率试验 精密称取已知含量的朝
天罐粉末 6 份，每份约 0. 1 g，均加入已知含量的芦
丁对照品 1. 0 mg，按 2. 1. 3 项下方法平行制备，每
份取 0. 5 mL，按 2. 1. 1 项下方法进行显色，测定 A，
计算总黄酮含量，结果见表 1。
表 1 朝天罐中总黄酮含量测定加样回收率试验
No．
称样量
/ g
样品中
含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均
回收率
/%
RSD
/%
1 0． 104 1． 976 1． 0 2． 931 95． 54 98． 09 3． 0
2 0． 098 1． 862 1． 0 2． 901 103． 92
3 0． 102 1． 938 1． 0 2． 913 97． 51
4 0． 106 2． 014 1． 0 2． 990 97． 57
5 0． 104 1． 976 1． 0 2． 945 96． 88
6 0． 105 1． 995 1． 0 2． 966 97． 10
2. 2 提取溶剂的选择 按 2. 1. 3 项下方法提取总
黄酮，分别以 75%甲醇，75%乙醇、水为提取溶剂，
平行提取 5 次。按 2. 1. 1 项下方法显色，测定 A，计
算总黄酮含量，结果总黄酮提取率分别为 1. 93%，
1. 92%，0. 92%，考虑到甲醇的毒性较大，故选用
75%乙醇为提取溶剂。
2. 3 提取次数考察 按 2. 1. 3 项下方法提取总黄
酮，分别提取 1，2，3 次，按 2. 1. 1 项下方法显色，测
定 A，计算总黄酮含量，结果总黄酮提取率分别为
1. 51%，1. 68%，1. 92%，故确定提取次数为 3 次。
2. 4 提取工艺优选 在单因素试验基础上，选取提
取时间、料液比、乙醇体积分数为考察因素，以总黄
酮得率为指标，精密称取朝天罐药材粉末(60 目)9
份，每份 0. 2 g，按 L9(3
4)正交表进行试验，因素水
平见表 2。按 2. 1. 1 项下方法进行显色，测定 A，计
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第 19 卷第 3 期
2013 年 2 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 3
Feb．，2013
算总黄酮含量，试验安排及结果见表 3，方差分析见
表 4。
表 2 朝天罐中总黄酮提取工艺正交试验因素水平
水平
A
提取时间 /h
B
料液比
C
乙醇体积分数 /%
1 1 10∶ 1 50
2 1. 5 20∶ 1 75
3 2 30∶ 1 95
表 3 朝天罐中总黄酮提取工艺正交试验安排
No． A B C D(空白)
总黄酮
得率 /%
1 1 1 1 1 1. 752
2 1 2 2 2 1. 823
3 1 3 3 3 0. 931
4 2 1 2 3 1. 907
5 2 2 3 1 1. 111
6 2 3 1 2 1. 730
7 3 1 3 2 0. 605
8 3 2 1 3 1. 826
9 3 3 2 1 2. 038
K1 1. 502 1. 422 1. 770 1. 634
K2 1. 589 1. 587 1. 923 1. 386
K3 1. 490 1. 566 0. 882 1. 556
R 0. 099 0. 165 1. 041 0. 248
表 4 提取工艺方差分析
方差来源 SS f F P
A 0. 015 2 0. 156 ＞ 0. 05
B 0. 049 2 0. 510 ＞ 0. 05
C 1. 893 2 19. 719 ＜ 0. 05
D(误差) 0. 10 2
注:F0. 05(2，2)= 19. 00。
由表 3 可知，影响因素的主次顺序为 C ＞ B ＞ A，
直观分析初步确定最佳工艺为 A2B2C2。方差分析
表明因素 C的影响具有显著性差异，因素 A，B 则无
显著性差异。结合生产成本考虑，最终确定总黄酮
提取工艺为 A1B2C2，即加 20 倍量 75%乙醇提取 3
次，每次 1 h。
2. 5 验证试验 精密称取称朝天罐药材粉末 3 份，
按优选工艺进行提取，结果总黄酮的平均得率
1. 83%，RSD 2. 11%，说明该工艺稳定可行。
3 讨论
本研究通过单因素和正交试验，以芦丁为对照
品使用比色法测定总黄酮含量，优化工艺稳定可行;
此外，实验数据显示其药材中黄酮含量较高，具有一
定的开发前景。朝天罐总黄酮提取工艺的研究为朝
天罐的深入开发和研究提供了实验依据。
［参考文献］
［1］ 中国科学院《中国植物志》编辑委员会． 中国植物志
［M］．北京:科学出版社，1984:238．
［2］ 广西 壮族自治区中医药研究所． 广西药用植物名录
［M］．南宁:广西人民出版社，1986:164．
［3］ 蒋霞，黎格，杨柯，等． 民族药朝天罐提取物抗炎作用
及机理研究［J］．时珍国医国药，2010，21(10) :2693．
［4］ 贺石麟，牛景霞，倪艳．淫羊藿中淫羊藿苷和总黄酮的
闪式提取工艺［J］． 中国实验方剂学杂志，2011，17
(8) :38．
［5］ 赖红芳，韦瑞松，黄秀香．金樱根总黄酮提取工艺优选
［J］．中国实验方剂学杂志，2012，18(3) :13．
［6］ 徐保利，管慧洁，李慧，等． 锦灯笼果实总黄酮提取工
艺［J］．中国实验方剂学杂志，2011，17(21) :33．
［责任编辑 仝燕］
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高雅，等:朝天罐中总黄酮的提取工艺优选