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收稿日期:2008-12-25
实验
研究 　　　　HPLC测定不同产地的头花蓼中　　　　　槲皮苷的含量
杨立勇 1 ,王祥培 1﹡ ,吴红梅 1 , 王祥森 2 , 王　强 1
(1.贵阳中医学院 , 贵州贵阳　550002;2.西藏墨脱县墨脱镇人民政府 ,西藏墨脱　860016)
　　摘要:目的:测定不同产地头花蓼中槲皮苷的含量。方法:DiamonsilC18.(250×4.6mm, 5u);以甲醇 -0.2%磷酸(45:
55)为流动相 , 流速 0.8ml· min-1 , 检测波长 350nm。结果:槲皮苷的线性范围为 0.1226 ～ 1.226ug(r=0.9999),平均回收
率为 100.3%。结论:本方法准确 、简便 ,可为评价不同产地头花蓼质量提供依据。
关键词:头花蓼;槲皮苷;HPLC
　　中图分类号:R927.2　文献标识码:B　文章编号:1002-1108(2009)04-0067-02
　　头花蓼为蓼科植物头花蓼 (Polygonum capitatum
Buch.—Han.exD.Don)的干燥全草或地上部分 , 主产于贵
州 、云南 、四川 、西藏和广西等省区 , 为贵州苗族用药 , 具有
清热利湿 、解毒止痛 、和血散瘀以及利尿通淋之功效 , 主要
用于治疗泌尿系统感染 、血尿 、湿疹 、肾盂肾炎 、膀胱炎 、尿
路结石 、风湿痛 、跌打损伤 、痄鳃 、疮疡 、腹泻和痢疾等 [ 1、2] 。
以头花蓼为原料制成的中成药制剂在临床上治疗泌尿系
统感染有显著的疗效。目前关于测定头花蓼中总黄酮及
没食子酸的含量已有报道 [ 3、4] , 但尚未见不同产地头花蓼
药材中槲皮苷的含量测定报道。本研究用 HPLC法测定不
同产地头花蓼中槲皮苷的含量 , 该法准确 、简便 , 可为头花
蓼品质评价及其资源的综合开发 、利用提供参考。
1　仪器与试药
1.1　仪器　高效液相色谱仪 (Agilent1100);电子天枰
(AB104-N);超声波清洗机(TCX— 250W);电热恒温水浴
锅(WS2— 133— 75)。
1.2　材料　槲皮苷标准品(批号 111538-200301);甲醇
(色谱纯);磷酸(分析纯);水为重蒸水;其它试剂均为分析
醇;头花蓼药材:共 10批样品 , 分别产自贵州 、云南 、西藏等
地 , 经王祥培副教授鉴定为蓼科植物头花蓼 Polyonumcapi-
tatumBuch-Ham.exD.Don的干燥全草。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　色谱柱:DiamonsilC18.(250 ×4.6mm,
5u);流动相:甲醇 -0.2%磷酸(45:55);流速:0.8ml/min;
温度:25℃;检测波长:350nm.
2.2　线性关系　精密称取槲皮苷对照品 6.13mg置于
50ml容量瓶中 , 加 95%甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 , 得每
1ml含 0.1226mg的对照品储备液溶液。
分别精密吸取对照品溶液 1.0、 2.0、 4.0、 6.0、 8.0、
10.0uL, 进样 ,测定峰面积 , 以色谱峰面积为纵坐标 , 槲皮
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第 31卷　第 4期
2009年 7月　 　　　　　　　　　　　
贵阳中医学院学报
JGCTCM 　　　　　　　　　　　
No.4　Vol.31
July　2009
DOI :10.16588/j.cnki.issn1002-1108.2009.04.024
苷进样量为横坐标 , 进行线性回归分析 , 线性回归方程:Y
=316.01X-29.98r=0.9999,结果表明槲皮苷在 0.1226 ～
1.226ug进样量与峰面积的线性关系良好。
A—样品　B—槲皮苷对照品
图 2-1　头花蓼的 HPLC色谱图
2.3　供试品溶液的制备　取头花蓼药材 0.5g, 精密称定。
置圆底烧瓶中 , 加 50ml甲醇 ,回流提取 1小时 , 冷却 ,滤过。
将残渣加 50ml甲醇 ,回流 1小时 ,冷却 , 滤过。合并滤液 ,
水浴蒸干 , 用甲醇定容至 25ml的容量瓶中 , 即得供试品
溶液。
2.4　精密度试验　精密吸取对照品溶液 5ul, 连续进样 5
次 , 记录色谱图 ,结果槲皮苷的峰面积的 RSD为 0.89%。
2.5　稳定性试验　精密吸取同一供试品溶液 , 分别在 0、
4、8、 12、16小时进样。记录其色谱图:结果槲皮苷峰面积
RSD为 0.41%, 表明供试品溶液在 16小时内稳定。
2.6　重复性实验　取同批药材 5份 , 精密称定 , 按 2.4项
下的供试品溶液制备方法制合并测定 , 槲皮苷平均含量为
0.1027%, RSD%为 0.42%。
2.7　回收率实验　取已知含量头花蓼粉末 5份 , 每份约
0.25g,精密称定 , 分别精密加入槲皮苷对照品溶液 ,按 2.5
项下的供试品溶液制备方法制备并测定。结果见表 1。
　表 1 回收率实验结果
样品重量
/g
样品率含
量 /mg
加入标品
质量 /mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
(%)
0.2505
0.2501
0.2501
0.2512
0.2502
0.2554
0.2568
0.2568
0.2580
0.2570
0.1226
0.2575
0.2575
0.2575
0.3678
0.3781
0.5228
0.5207
0.5107
0.6166
100.0
103.3
102.2
98.1
97.8
100.3 0.97
2.8　样品含量测定
精密吸取对照品溶液与头花蓼药材供试品溶液各
10μl, 按上述的色谱条件测定 , 测定峰面积积分值 , 计算槲
皮苷的含量。结果见表 2。
　表 2 样品的含量测定结果(n=3)
序号 产地 采收时间 槲皮苷的含量(%)
1 贵州安顺 2006年 9月 0.2152
2 贵州锦屏 2006年 9月 0.2389
3 贵州施秉 2006年 9月 0.2482
4 贵州剑河 2006年 9月 0.2279
5 西藏墨脱 2006年 3月 0.1270
6 云南大理 2006年 9月 0.1191
7 云南昆明 2006年 9月 0.3475
8 贵州贵阳 2006年 9月 0.2284
9 西藏墨脱 2006年 8月 0.2127
10 西藏墨脱 2006年 9月 0.1380
3　结论与讨论
3.1　实验中分别采用回流提取法 、超声法 、渗漉法等不同
提取方法来考察对样品中槲皮苷的影响 , 并作综合分析 ,
拟定上述供试品的制备方法。
3.2　在色谱柱的选择时 , 主要考察了依利特 HypersilODS
色谱柱(4.6mm×150mm, 5um), DiamonsilC18色谱柱(250
×4.6mm, 5u)及 ShimadzuC18色谱柱(150mm×4.6mm,
5um),结果以 DiamonsilC18.色谱柱(250×4.6mm, 5u)的
分离度较好。
3.3　本实验曾对两次提取后的残渣用甲醇进行提取 , 进
样 , 经测定 ,检测不出槲皮苷的峰面积。 结果表明 ,经过两
次提取后 , 头花蓼中槲皮苷已经基本提取完全。
3.4　本文建立了高效液相色谱法测定头花蓼中槲皮苷的
含量 , 在上述提取方法和色谱条件下待测成分与相邻峰达
到基线分离 , 重现性好 ,回收率高 , 可作为头花蓼药材质量
控制的方法。
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·68· 　　　　　　　　　　　　　　　　　　贵阳中医学院学报　　　　　　　　　　　　　　　　第 31卷