全 文 ：中国药房 2006年第 17卷第 10期 China Pharm acy 2006 Vol.17 No.10 · 777·
高效液相色谱法同时测定田基黄注射液中槲皮苷 、异槲皮苷的含量
林焕泽 *,吴秀荣(广东省茂名市人民医院药剂科 ,茂名市 525000)
中图分类号 R927.2 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2006)10-0777-02
摘 要 目的:建立以高效液相色谱法同时测定田基黄注射液中槲皮苷 、异槲皮苷含量的方法 。方法:色谱柱为Merck Lichrospher
RP 18 ,流动相为乙腈-(pH=3.0)磷酸盐缓冲液(18∶82),流速为 1m l/min ,柱温为 25℃,检测波长为 350nm 。结果:槲皮苷 、异槲
皮苷进样量分别在 0.278μg ～ 4.440μg(r=0.9 991)、0.315μg ～ 2.520μg(r=0.9 991)范围内与峰面积积分值线性关系良好;平
均加样回收率分别为 98.60%(RSD=2.23%)、97.79%(RSD=1.74%)。结论:本方法准确可靠 、应用性强 ,可用于本品的质量控
制 。
关键词 高效液相色谱法;田基黄注射液;槲皮苷;异槲皮苷;含量
Simultaneous Assaying of Quercitrin and Isoquercetin in Hypericum Japonicum Thunb.Injection by HPLC
LIN Huanze ,WU Xiurong(Dept.o f Pha rmacy ,Guangdong Provincial M aoming People s Hospi tal , Maoming
525000 ,China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To establish a HPLC m ethod fo r the sim ultaneous dete rmination of quercitr in and isoquerce tin in
hypericum japonicum thunb.injection.M ETHODS :Merck Lichrospher RP 18 w as used as chromatog raphic colum n and the mo-
bile phase consisted o f acetonit rile-(pH=3.0)buffe r phosphate(18∶82)w ith flow rate at 1ml/min , column tem peratu re at
25℃and detection waveleng th at 350nm.RESU LTS:The linear range fo r quercitrin and isoquercetin w ere 0.278μg ～ 4.440μg(r=0.9 991)and 0.315μg ～ 2.520μg(r=0.9 991), respec tively.The average recovery w ere 98.60% (RSD=2.23%)and
97.79%(RSD=1.74%), respec tively.CONCLUS ION :This m ethod is accurate , reliable and applicable , and suitable fo r t he
quality contro l o f hypericum japonicum thunb.injection.
KEY WORDS HPLC;Hypericum japonicum t hunb.injection;Quercit rin;I soquercitrin;Content
*主管药师。研究方向:临床药学、制剂。电话:0668-2922686
图 1 高效液相色谱
A.槲皮苷对照品;B.异槲皮苷对照品;C.供试品;1.槲皮苷;2.异槲
皮苷
Fig 1 HPLC
A.reference subs tance of quercit rin;B.reference substance of iso-
quercit rin;C.test ing sample;1.quercit rin;2.isoquercit rin
田基黄注射液系田基黄的灭菌水提取液 , 具有清热利湿 、
散淤消肿的功效 ,对治疗急性 、迁延性、慢性重症肝炎及肝硬化
具有良好疗效 ,收载于 1977年版《中国药典》[1 ] 。为控制本品质
量 ,笔者建立了以高效液相色谱(HPLC)法测定田基黄注射液
中槲皮苷 、异槲皮苷含量的方法 。
1 仪器与试药
1.1 仪器
高效液相色谱仪 ,包括 ASI -100自动进样器 、ATH-585
柱温箱 、P680四元梯度泵 、PDA -100检测器(美国 Dionex 公
司)。
1.2 试药
槲皮苷 、异槲皮苷对照品(瑞士 Fluka公司);田基黄注射
液(常州康普药业有限公司 , 批号:1 、2 、3……10);乙腈为色谱
纯 ,水为高纯水 ,其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱 :M erck Lichrospher RP 18(250mm ×4.0mm ,
5μm);流动相:乙腈-(pH=3.0)磷酸盐缓冲液(18∶82);流
速:1m l/min;柱温:25℃;检测波长:350nm 。在此色谱条件下 ,
待测成分全部被洗脱且达到基线分离 ,分离度 R>1.5 ,理论塔
板数按异槲皮苷计算不低于 3 000。色谱详见图 1。
2.2 对照品溶液的制备
准确称取干燥至恒重的槲皮苷对照品 1.11mg 、异槲皮苷
对照品 1.26mg , 分别加甲醇至刻度 , 制成槲皮苷 、异槲皮苷浓
度各为 111.0 、126.0μg/ml的溶液 ,即得 。
2.3 供试品的制备
取本品 ,经 0.45μm微孔滤膜过滤 ,取续滤液 ,即得。
2.4 线性关系考察
取“2.2”项下槲皮苷对照品溶液 ,分别进样 2.5 、5 、10 、20 、
40μl , 另取 “2.2”项下异槲皮苷对照品溶液 , 分别进样 2.5 、5 、
10 、15 、20μl 。按“2.1”项下色谱条件进样测定 ,以峰面积积分值
(A)为纵坐标 ,进样量(C)为横坐标 ,进行线性回归分析 ,得回归
方程分别为 A 槲皮苷=26.561C 槲皮苷—1.9 826(r =0.9 991)、
A 异槲皮苷=27.683C 异槲皮苷—0.7 413(r=0.9 991)。结果表明 ,
槲皮苷 、异槲皮苷进样量分别在 0.278μg ～ 4.440μg 、 0.315 ～
2.520μg 范围内与峰面积积分值线性关系良好 。
2.5 精密度试验
取“2.2”项下对照品溶液各 10μl ,重复进样 6次 ,测定其峰
面积积分值 , 结果槲皮苷 、 异槲皮苷峰面积的 RSD 分别为
0.14%、0.39%。
2.6 稳定性试验
取“2.3”项下溶液 ,分别于 0 、1 、3 、6 、12 、24 、48h取 10μl ,按
“2.1”项下色谱条件进样 , 测定峰面积 , 结果槲皮苷 、异槲皮苷
峰面积积分值的 RSD 分别为 0.98%、1.13%,表明供试品溶液
中的槲皮苷 、异槲皮苷在 48h 内基本稳定 。
2.7 重现性试验
· 778· China Pharmacy 2006 Vol.17 No.10 中国药房 2006年第 17卷第 10期
乳癖宁贴膏质量控制方法研究
叶立新 1 *,陈刚梅 2 ,张树平 1 ,赖素萍 1 ,陈育煌 3(1.广东惠州市人民医院药剂科 ,惠州市 516002;2.惠州大亚
制药股份有限公司 ,惠州市 516001;3.惠阳妇幼保健院 ,惠州市 516001)
中图分类号 R927.11 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2006)10-0778-04
摘 要 目的:建立乳癖宁贴膏的质量控制方法 。方法:采用薄层色谱法对乳癖宁贴膏中淫羊藿 、土贝母 、川楝子进行定性鉴别;采
用柱层析-高效液相色谱法对其中君药淫羊藿进行含量测定 。结果:在薄层色谱中均能鉴别出淫羊藿 、土贝母 、川楝子;淫羊藿苷进
样量在 0.428μg ～ 2.568μg 范围内与峰面积积分值线性关系良好(r=0.9 998);平均加样回收率为 94.57%(RSD=1.43%)。结
论:本方法灵敏 、准确 、重现性好 ,可用于本品的质量控制 。
关键词 乳癖宁贴膏;薄层色谱法;柱层析-高效液相色谱法;淫羊藿;含量
*副主任药师。研究方向:药剂学。电话:0752-2254283。E-
mail:ylx51010@21cn.com
Study on Quality Control of Rupining Strapping
YE Lixin , ZHANG Shuping , LA I Shupin(Dept.of Pharmacy , Guangdong Huizhou Ci ty People s Hospi tal ,
Huizhou 516002 , China)
CHEN Gangmei(Huizhou Daya Pharmaceut ical M anufacture Co.Ltd ,Huizhou 516001 ,China)
CHEN Yuhuang(Huiyang M aternal and Child Health Hospi tal ,Huizhou 516001 ,China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To establish quality cont rol met hod for rupining st rapping.M ETHODS:The qualitation o f Herba
Epimedii , Rhizoma Bolbostemm ae and fructus toosendan in rupining strapping w as conducted by TLC.T he principal drug -
epimedium herb w as de termined by co lumn chrom atog raphy -HPLC.RESULTS :Herba Epimedii ,Rhizoma Bolbostemmae and
fructus toosendan could all be iden tified in TLC.Good linear co rrela tion of icariin w as observed w hen the sample size w as
0.428μg ～ 2.568μg(r=0.9 998).The average recovery was 94.57%(RSD=1.43%).CONCLUSION :The method is sensi-
tive , accura te ,and reproducible.It can be used for the quality cont rol of rupining stripping.
KEY WORDS Rupining strapping ;TLC;Colum n ch rom atog raphy -HPLC;Herba Epimedii;Contents
表 2 样品含量测定结果
Tab 2 Results of sample assaying
批号 含量(mg/ml) 批号 含量(mg/ml)槲皮苷 异槲皮苷 槲皮苷 异槲皮苷
1 0.0 380 0.0 101 6 0.0 827 0.0 450
2 0.1 026 0.0 233 7 0.3 371 0.1 558
3 0.0 810 0.0 216 8 0.1 047 0.0 648
4 0.0 936 0.0 260 9 0.2 818 0.0 467
5 0.1 567 0.1 524 10 0.1 106 0.0 342
表 1 加样回收率试验结果
Tab 1 Results of recovery test
加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) (%) RS D(%)
槲皮苷 异槲皮苷 槲皮苷 异槲皮苷 槲皮苷 异槲皮苷 槲皮苷 异槲皮苷 槲皮苷 异槲皮苷
0.1 332 0.1 662 0.4 413 0.3 262 97.98 97.05
0.1 332 0.1 662 0.4 305 0.3 310 95.58 99.94
0.1 332 0.1 662 0.4 427 0.3 242 98.29 95.85
98.60 97.79 2.23 1.74
0.1 332 0.1 662 0.4 533 0.3 268 100.64 97.41
0.1 332 0.1 662 0.4 387 0.3 254 97.40 96.57
0.1 332 0.1 662 0.4 581 0.3 309 101.71 99.94
x
取同一批样品 6份 ,按“2.3”项下方法制备供试品溶液 ,并
按“2.10”项下方法测定 ,计算槲皮苷 、异槲皮苷含量的 RSD 分
别为 0.61%、0.29%。
2.8 加样回收率试验
准确量取已知含量的田基黄注射液 6份 , 每份 1ml , 分别准
确加入槲皮苷对照品 、异槲皮苷对照品各 0.1 332 、0.1 662mg ,
经微孔滤膜过滤 ,取续滤液 ,按“2.10”项下方法测定 ,计算回收
率 ,结果详见表 1。
2.9 最低检测量的确定
取“2.2”项下槲皮苷 、异槲皮苷对照品溶液 ,各稀释 100倍
至 1.11 、1.26μg/m l , 进样 10μl , 依法测定 ,结果槲皮苷的最低
检测浓度为 1.11μg/ml , 最低检测量为 1.11×10 -3μg(信噪比
S/N=3∶1);异槲皮苷的最低检测浓度为 1.26μg/ml ,最低检
测量为 1.26×10 -3μg(信噪比 S/N=3∶1)。
2.10 样品含量测定
按“2.1”项下色谱条件 , 测定 10批样品 , 以峰面积按外标
法计算样品中槲皮苷 、异槲皮苷的含量 , 10批田基黄注射液样
品中槲皮苷平均含量为 0.14mg/ml , 最低含量为 0.0 380mg/
m l;异槲皮苷平均含量为 0.06mg/m l ,最低含量为 0.01 101mg/
m l ,结果详见表 2。
3 讨论
HPLC法分离效果良好 ,线性 、稳定性 、重现性 、回收率等
指标均符合含量测定的要求 , 因此采用 HPLC法测定田基黄
注射液中槲皮苷 、异槲皮苷含量 , 方法准确可靠 、应用性强 , 可
为控制田基黄注射液的质量提供科学 、合理 、有效的手段 。
参考文献
[ 1] 卫生部药典委员会编.中华人民共和国药典(二部)[ S].
1977年版.北京:人民卫生出版社 , 1977:197.
(收稿日期:2005-12-19 修回日期:2006-03-16)